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动物实验的基本技术和方法. 动物实验前的准备工作. 动物在健康快乐的状态下进行生存和进行试验，在无痛苦的状态下死亡。 实验动物的正确选择 种属、品系、性别、年龄、数量、微生物学级别 例： 实验动物生产许可证： SCXK （沪） 2004-0001 实验动物质量合格证. 实验动物场所的确定 实验动物使用许可证： SYXK （沪） 2003-0026. 实验动物的定购与运输 、检疫 1 、必须向具有实验动物生产许可证的单位定购符合实验要求的实验动物 2 、实验动物在运输过程中，必须符合相应的微生物学等级要求
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动物实验前的准备工作 • 动物在健康快乐的状态下进行生存和进行试验，在无痛苦的状态下死亡。 • 实验动物的正确选择 种属、品系、性别、年龄、数量、微生物学级别 例：实验动物生产许可证： SCXK（沪）2004-0001 实验动物质量合格证 Free Powerpoint template from www.brainybetty.com
实验动物场所的确定实验动物使用许可证：SYXK（沪）2003-0026实验动物场所的确定实验动物使用许可证：SYXK（沪）2003-0026 Free Powerpoint template from www.brainybetty.com
实验动物的定购与运输 、检疫 1、必须向具有实验动物生产许可证的单位定购符合实验要求的实验动物 2、实验动物在运输过程中，必须符合相应的微生物学等级要求 3、普通级实验动物购入后，必须进行健康检查和隔离检疫，才能用于实验。 Free Powerpoint template from www.brainybetty.com
实验人员的保护 1、接触动物或动物组织时需带手套 2、屏障系统必须穿隔离服 3、对具有疾病传播性的实验最好在生物安全柜中进行 Free Powerpoint template from www.brainybetty.com
动物实验前须引起重视的事项 1.动物福利和动物实验伦理问题 • 饲养繁殖实验动物的目的是用实验动物作为人类的替身进行各种生物医学研究。 Free Powerpoint template from www.brainybetty.com
一方面随着生物医学的发展，实验动物的使用量逐年增加，使用种类也逐年扩大；一方面随着生物医学的发展，实验动物的使用量逐年增加，使用种类也逐年扩大； • 另一方面从动物福利和动物实验伦理学考虑，又需要减少一些不必要的动物实验，特别是人类的宠物诸如猫、犬、猴等，或者在不得不做的动物实验中尽可能将动物的痛苦、压迫和不适降到最低。 Free Powerpoint template from www.brainybetty.com
国际上对动物实验伦理的要求: (1)动物居住空间应符合标准,注意日常的饲育管理,不使动物陷入饥饿、缺水和患病。 ⑵尽可能地采用代替法最少地使用和牺牲动物。 ⑶在必须使用犬、猫和猴时，在实验前应进行训练，尽可能地减少动物的恐惧和不安。 ⑷实验结束和动物不可能恢复时，应采取安乐死。 ⑸要爱护动物和对由于实验死亡的动物应持有怜悯和感谢之情。 Free Powerpoint template from www.brainybetty.com
我国2006年9月13日，科技部颁布了《关于善待实验动物的指导性意见》我国2006年9月13日，科技部颁布了《关于善待实验动物的指导性意见》 Free Powerpoint template from www.brainybetty.com
2. 动物实验技术和方法是实践性非常强的，不能仅靠书本理论知识，需要通过反复实践加以掌握。 • 目的： 保证实验的顺利进行。 减少动物所承受的痛苦。 Free Powerpoint template from www.brainybetty.com
动物实验前具体准备的细节事项 1.所用实验动物的品种、品系、性别、数量等能否得到 2.所用动物实验设施是否符合本实验要求 普通设施，SPF设施，感染性设施，有毒有害供试品设施，放射性设施、实验室、手术室 Free Powerpoint template from www.brainybetty.com
3.所需要的动物实验技术是否熟练掌握, 所用动物实验器具、试剂是否准备好 4.预实验 正式实验前的演习 预实验可用少量动物进行 预实验结果不能并入正式实验结果一起分析。 Free Powerpoint template from www.brainybetty.com
动物实验的基本操作技术和方法 Free Powerpoint template from www.brainybetty.com
一、动物的抓取 • 动物的抓取是顺利进行各项动物实验操作最基本的一个环节。 • 应熟练掌握各种实验动物的抓取方法，用轻柔的手法把对动物施加的恐惧和痛苦降到最低。 • 一般说来动物是不会主动攻击人的。 Free Powerpoint template from www.brainybetty.com
兔抓取的注意点 • 最好戴人造革围裙和袖套，以免爪子抓伤。 • 采用正确地抓取方法。 • 可采用兔固定器固定进行实验操作，或一人抓取固定，一人实验操作。 Free Powerpoint template from www.brainybetty.com
犬抓取注意点 • 实验用犬有专用的比格犬或其他来源犬。 • 犬是通人性的，随意来源犬购入后，饲养人员和实验人员要经常亲近它们，使它放松对你的警惕，容易直接抓取它们。 • 不要轻易使用长柄铁钳，钳伤造成的伤害会使它对你更加恐惧，影响以后实验的进行。 • 抓取后用绳子将嘴绑住。 Free Powerpoint template from www.brainybetty.com
猴子的抓取 采用捕猴网进行捕捉，捕猴网是用尼龙绳编织成的网袋，网孔直径以不超过3厘米为宜，网口系在直径50厘米大小的钢筋圈上（钢筋直径约1厘米），捕猴网连有1.5米长的木柄。捕捉时动作要迅速准确，不要损伤头部及其他要害部位。猴入网后，将圈网按在地上，紧紧压住猴头或抓住颈后部（以防回头咬人），再将猴双前肢反背于猴的身后。捉住后将猴由网中取出，在捕捉凶猛的雄猴时应戴上防护皮手套，并有2~3个人紧密配合。 Free Powerpoint template from www.brainybetty.com
动物编号常用的标记方法 • 适用需要个体识别的实验 • 染料标记法：适合白色被毛的动物，如小鼠、大鼠、豚鼠、兔等。 黄色：常用3-5%苦味酸溶液 红色：常用0.5%中性红溶液 咖啡色: 2%硝酸银溶液 黑色：煤焦油酒精溶液 优点：简单、易识别 缺点：长期易退色；不能编大号码。 Free Powerpoint template from www.brainybetty.com
2. 剪耳（打孔）法：啮齿类小动物 3. 号码钳法：适用于兔、犬等大动物 4. 耳牌法：适用于羊、牛等大家畜 5. 电子芯片植入法： Free Powerpoint template from www.brainybetty.com
动物被毛的去除方法 1. 剪毛法：用弯头剪逆毛方向剪 适用于各种实验动物 2. 拔毛法：常用于兔的耳缘静脉注射 3. 剃毛法：专用剃毛刀 适用于大动物 4. 脱毛法：脱毛剂 Free Powerpoint template from www.brainybetty.com
常用脱毛剂配方 配方1：硫化钠8g溶于100mL水中。 配方2：硫化钠：肥皂粉：淀粉的比例为 3：1：7，再加水调成糊状。 配方3：硫化钠10g和生石灰15g溶于100mL水中。 • 配方1和2适用于家兔和啮齿类动物的脱毛，配方3适合给犬脱毛。 • 脱毛后用清水将脱毛区清洗干净。 Free Powerpoint template from www.brainybetty.com
实验动物的麻醉方法 • 对实验动物进行麻醉的目的是，消除实验过程中引起的痛苦和不适，确保实验动物的安全和动物实验的顺利进行，是动物实验伦理的一个重要方面。 • 应结合实验目的、实验动物种类、日龄及健康状况等因素进行综合考虑，决定选用的麻醉剂和麻醉方法。 • 麻醉方法有全身麻醉和局部麻醉两种。在实验动物的麻醉中绝大多数采用全身麻醉。 Free Powerpoint template from www.brainybetty.com
全身麻醉简称全麻，全麻是指麻醉药通过呼吸道吸入、静脉、肌肉、腹腔注射等途径，进入实验动物体内，使其产生短时间意识丧失、痛觉消失、肌肉松弛和反射抑制等中枢神经系统抑制现象。当麻醉药从体内排出或在体内代谢破坏后，实验动物逐渐清醒，不留后遗症。全身麻醉简称全麻，全麻是指麻醉药通过呼吸道吸入、静脉、肌肉、腹腔注射等途径，进入实验动物体内，使其产生短时间意识丧失、痛觉消失、肌肉松弛和反射抑制等中枢神经系统抑制现象。当麻醉药从体内排出或在体内代谢破坏后，实验动物逐渐清醒，不留后遗症。 Free Powerpoint template from www.brainybetty.com
全麻有吸入麻醉法和注射麻醉法两种途径，吸入麻醉法用挥发性麻醉药，注射麻醉法用非挥发性麻醉药。全麻有吸入麻醉法和注射麻醉法两种途径，吸入麻醉法用挥发性麻醉药，注射麻醉法用非挥发性麻醉药。 Free Powerpoint template from www.brainybetty.com
（1）吸入麻醉法 • 常用药物为乙醚、异氟烷等。吸入麻醉法有开放吸入和气管内插管吸入两种方法。动物实验大都采用开放吸入法 • 开放吸入：适用于啮齿类小动物，可用乙醚、氯仿、异氟烷。 • 气管内插管：适用于犬、猴、羊等大动物，异氟烷是最常用的麻醉药。 • 吸入麻醉的优点： 麻醉平稳、安全可靠、 停止吸入后很快苏醒 • 缺点： 需要一定的仪器设备， Free Powerpoint template from www.brainybetty.com
（2）注射麻醉法 注射麻醉法是使用非挥发性麻醉药进行全麻的方法。在动物实验中比较常用。 常用麻醉药： 戊巴比妥钠 硫喷妥钠 氯氨酮 乌拉坦 大动物：静脉注射或腹腔注射 啮齿类动物：腹腔注射 Free Powerpoint template from www.brainybetty.com
实验动物麻醉应注意的事项 • 麻醉之前应禁食。 • 麻醉之前应准确称量动物体重，作为计算麻醉剂用量的依据。 • 应注意不同麻醉药对动物的作用是不同的，如戊巴比妥钠、硫贲妥钠等能抑制心肌收缩力，使肌肉松弛，而氯胺酮则相反。 • 大动物犬、猴、羊等麻醉前半小时应注射麻醉前给药如阿托品，抑制腺体过多分泌及改善心脏活动。苯巴比妥钠。 • 静脉注射麻醉药是必须缓慢，边注射边观察动物的意识、角膜反射、肌肉紧张性和对疼痛的反应，达到麻醉要求时应停止注射。 Free Powerpoint template from www.brainybetty.com
氯胺酮 • 分离麻醉：能阻断感觉冲动向丘脑和新皮层的传导，产生抑制作用，同时能兴奋脑干和边缘系统，引起感觉和意识分离。 • “木僵样麻醉”：动物意识不完全丧失，麻醉期睁眼，咽喉反射存在，肌肉张力增加呈木僵样。 Free Powerpoint template from www.brainybetty.com
6.大动物手术时应配备麻醉师，在麻醉过程中密切观察动物的反应，如血压、脉搏、呼吸和体温，及时调节麻醉药剂量，保证手术顺利进行。6.大动物手术时应配备麻醉师，在麻醉过程中密切观察动物的反应，如血压、脉搏、呼吸和体温，及时调节麻醉药剂量，保证手术顺利进行。 7.动物在麻醉期间、手术后至苏醒期体温会下降，应注意手术室的室温。 8. 注意术后护理。 Free Powerpoint template from www.brainybetty.com
麻醉意外的抢救 原因： 麻醉药速度过快、剂量过大、麻醉过深 后果： 中枢神经系统抑制导致呼吸系统、循环系统功能障碍，引起呼吸、心跳停止。 抢救方法： 要针对具体情况，采取对症治疗的措施。 1.立即停止供给麻醉剂 2.人工呼吸，吸氧 3.苏醒剂 Free Powerpoint template from www.brainybetty.com
4.呼吸中枢兴奋剂如可拉明（烟酰乙胺;烟酰二乙胺;二乙烟酰胺；;尼可刹米;nikethamide）等4.呼吸中枢兴奋剂如可拉明（烟酰乙胺;烟酰二乙胺;二乙烟酰胺；;尼可刹米;nikethamide）等 • 尼可刹米 直接选择性兴奋延髓呼吸中枢，用于各种原因引起的呼吸中枢抑制。 • 戊四氮 作用与尼可刹米相似，作用比尼可刹米强，主要用于解救呼吸中枢抑制。 Free Powerpoint template from www.brainybetty.com
心脏和呼吸兴奋剂，如0.1%肾上腺素适量作心内或静脉注射，静脉滴注50%葡萄糖溶液等。心脏和呼吸兴奋剂，如0.1%肾上腺素适量作心内或静脉注射，静脉滴注50%葡萄糖溶液等。 Free Powerpoint template from www.brainybetty.com
肾上腺素 对α、β受体具有兴奋效应。药理作用： ①使皮肤、粘膜、内脏血管收缩 ②心肌收缩的频率增加，能增加心输出量 ③对支气管平滑肌有松弛作用，松弛胃肠平滑肌 ④促进糖元分解，促血糖升高，加速脂肪分解 应用： ①抢救心脏骤停 ②抢救过敏性休克 ③与局麻药合用，延长麻醉时间 肾上腺素与局麻药合用的机制：肾上腺素有缩血管作用，局麻药中加微量肾上腺素可延缓局麻药被吸收的速度，延长局麻时间。 ④有止血作用 Free Powerpoint template from www.brainybetty.com
五、实验动物的给药方法 • 一、经口给药法 • 二、注射法 • 三、其它途径给药方法 • 呼吸道给药 • 皮肤给药 • 脊髓腔内给药 • 脑内给药 • 直肠内给药 • 关节腔内给药 Free Powerpoint template from www.brainybetty.com
经口给药 • 拌入饲料或饮水中自由摄取 优点：省人力 缺点：因个体差异，摄入量不等 • 灌胃 优点：能准确定量 缺点：给动物造成一定的痛苦， 需熟练掌握技术 Free Powerpoint template from www.brainybetty.com
大小鼠灌胃注意点 • 用灌胃针。 • 从嘴角处插入，到达咽部后改变灌胃针的方向，使其与食管的走向一致，然后顺利插入。 • 成年大鼠由于体型较大，不易保定。办法： • 1）一人保定、灌胃 • 2）操作者抓取后，将大鼠尾部按在自己的胸部，达到固定尾部的目的，然后灌胃。 Free Powerpoint template from www.brainybetty.com
兔灌胃法 采用两人操作法。 操作者用左手拇指和中指挤压家兔两颊，将下颌挤开使兔被动张口，右手将开口器从一侧口角插入口腔并固定，用泡在水中的14号细导尿管，经开口器的孔插入，向前推进约15cm，可达胃内，确认泡在水中的导管另一端没有冒气泡，说明没有误入气管，即可注入药液。灌胃量为每只每次80-150mL。 Free Powerpoint template from www.brainybetty.com
1. 口服给药 用右手将口服药片夹在拇指和食指之间，把左手放在犬的圈套上，用拇指和食指压着犬的上唇，用力使犬的头向后仰，继而把右手中指放在犬的下颌向下压。当犬的嘴张大时，快速把药片放在舌根隆起的部位，合上犬的嘴，维持头后仰姿势，右手在咽喉部轻轻按摩。借助犬本能的吞咽动作服下药片。 2. 灌胃给药 在给犬灌胃时，将犬固定于特制的固定架上，实验时将木制开口器从一侧口角放入犬的口腔，用左手或绳子固定，右手持12号胃管由开口器的小圆孔向咽后壁方向不断插入，导管另一端置于一杯清水中，若连续出现气泡，说明插入呼吸道，应立即拔出胃管，重新操作。如无气泡，说明没有插入气管，插至约20cm，即可到达胃内。犬的灌药量为每只每次200-500mL。 犬的经口给药法 Free Powerpoint template from www.brainybetty.com
各种动物一次灌胃能耐受的最大容积 Free Powerpoint template from www.brainybetty.com
注射法 注射法有皮下注射、腹腔注射、静脉注射、肌肉注射以及皮内注射、脑内注射等。 药物吸收速度： 静脉注射＞腹腔注射＞肌肉注射＞皮下注射。 皮内注射常用于观察皮肤血管通透性变化或反应，如过敏试验 脑内注射常用于病毒学接种 Free Powerpoint template from www.brainybetty.com
尾静脉 • 静脉注射 • 大小鼠尾静脉注射 • 大鼠、沙鼠、豚鼠后肢浅背侧足中静脉注射 • 兔耳缘静脉注射 4. 犬前肢头静脉和后肢小隐静脉注射 Free Powerpoint template from www.brainybetty.com
其它途径给药方法 • 呼吸道给药： • 皮肤给药： • 脊髓腔内给药： 4. 脑内给药： 5. 直肠内给药： 6. 关节腔内给药： Free Powerpoint template from www.brainybetty.com
