细菌学检验系列实验 Ⅰ— 基本技术和基本方法 2 细菌的生化反应检测法

1. 细菌学检验系列实验Ⅰ—基本技术和基本方法 2 细菌的生化反应检测法 授课对象： 04级临床检验专业 授课地点： 病原生物学与免疫学系 第五实验室 主带教师： 王立新 辅带教师： 林 陵

2. 细菌的生化反应检测法 • 教学目的 • 掌握细菌“生化反应检测法”的基本原理 • 掌握常见生化反应检测所需要的培养基 • 掌握常见生化反应检测的现象观察和结果判断 • 掌握细菌“生化反应检测法”在细菌鉴别中的应用

3. 细菌的生化反应检测法 • 教学安排 • 6学时，分2次进行 • 第1次： • 教师：总体安排、内容讲解及其示教 • 同学们：接种细菌 • 第2次： • 同学们：观察现象、判断结果 • 教师：总结、布置实验报告内容

4. 讲解内容： 细菌的生长 • 细菌的培养 细菌的生长表现 均匀 沉淀 沿穿刺 扩散 产生绿色 营养琼脂培养 混浊 生长 线生长 生长 色 素

5. 讲解内容：细菌生化反应检测法的基本原理 • 细菌的新陈代谢 细菌的分解代谢及其产物 • 不同的细菌 • 含有不同的分解代谢的酶 • 具有不同的分解代谢途径 • 对同一营养物质的分解代谢及其产物有所不同 知识点 • 利用生化方法来检测代谢产物以判断细菌的分解代谢特征， • 从而达到鉴定细菌的目的 称：细菌的生化反应检测法

6. 讲解内容：细菌生化反应检测法的基本原理 对 蛋白质的发酵 VP试验 对 糖 的 发 酵 吲哚试验 其他试验 尿素酶试验 甲基红试验 枸橼酸盐利用试验 单糖发酵试验 硫化氢试验 • 细菌的新陈代谢 细菌的分解代谢及其产物——常见的生化反应

7. 讲解内容：细菌生化反应检测法的基本原理 • 细菌的新陈代谢 细菌的分解代谢及其产物——常见的生化反应 糖发酵试验 HCOOH 脱氢酶CO2+H2 葡萄糖、乳糖、麦芽糖、 甘露醇、蔗糖 大肠埃希菌：分解乳糖产酸产气； 致病性肠道细菌：大多数不分解乳糖

8. 讲解内容：细菌生化反应检测法的基本原理 • 细菌的新陈代谢 细菌的分解代谢及其产物——常见的生化反应 IMViC试验 I - 吲哚（indol）试验 M - 甲基红（methyl red）试验 V - VP（Voges-Proskauer）试验 C - 枸橼酸盐利用（citrate utilization）试验

9. 讲解内容：细菌生化反应检测法的基本原理 • 细菌的新陈代谢 细菌的分解代谢及其产物——IMViC试验 I-吲哚（indol）试验 色氨酸→吲哚→玫瑰吲哚 ↑ 吲哚试剂

10. 讲解内容：细菌生化反应检测法的基本原理 • 细菌的新陈代谢 细菌的分解代谢及其产物——IMViC试验 VP（Voges-Proskauer）试验 葡萄糖→丙酮酸→乙酰甲基甲醇 →二乙酰 +胍基化合物 葡萄糖→丙酮酸 (-) →红色化合物 (+)

11. 讲解内容：细菌生化反应检测法的基本原理 • 细菌的新陈代谢 细菌的分解代谢及其产物——IMViC试验 M - 甲基红（methyl red）实验 —葡萄糖→丙酮酸→乙酰甲基甲醇→Ph＞5.4 甲基红 - + 葡萄糖→丙酮酸 →Ph≤4.5 甲基红 +

12. 讲解内容：细菌生化反应检测法的基本原理 • 细菌的新陈代谢 细菌的分解代谢及其产物——IMViC试验 C - 枸橼酸盐利用(citrate utilization)试验 利用枸橼酸盐作为唯一碳源— 产生氨— 碱 + 不能利用 中性 -

13. 讲解内容：细菌生化反应检测法的基本原理 • 细菌的新陈代谢 细菌的分解代谢及其产物——IMViC试验

14. 实验材料安排 • 细菌菌种： • 金黄色葡萄球菌 — 由斜面培养基提供 — 2份/组 • 大肠埃希菌 — 由斜面培养基提供 — 2份/组 • 培养基： • 双糖铁琼脂斜面 — KIA试验用 — 2份/人 • 动力-腚基质-尿素培养基 — MIU试验用 — 2份/人 • 乳糖发酵管 — 乳糖分解试验用 — 2份/人 • 蛋白胨水 — 2份/人 • 葡萄糖蛋白胨水 — IMViC试验用 — 4份/人 • 枸橼酸盐培养基 — 2份/人

15. 实验内容复习 • 细菌接种： • 固体平板培养基 接种方法：分区划线法 • 固体斜面培养基 接种方法：划线法 • 固体高层斜面培养基 接种方法：穿刺划线法 • 半固体培养基 接种方法：穿刺法 • 液体培养基 接种方法：液体接种法 使用器材 接种环 接种针/接种环 接种针 接种针 接种环/接种针

16. 实验报告内容 KIA、IMViC、MIU生化反应检测法的原理、结果判断； 记录：金黄色葡萄球菌/大肠埃希菌在固体、半固体、液体培养基生长的情况； 记录：金黄色葡萄球菌/大肠埃希菌的KIA、IMViC、MIU试验的现象、结果判断。