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荧光衍生试剂在高效液相色谱和电泳中的应用

荧光衍生试剂在高效液相色谱和电泳中的应用. 导 师：张玉奎 学 生：张 琳. 中科院大连化学物理研究所 1810 组. 汇报内容. 引言 常用荧光衍生化试剂应用简介 展望. 引 言. 衍生的目的 衍生发应方式 荧光衍生试剂的构成. 衍生化反应方式. 标记 非标记. 从是否形成共价键来 分. 在线 (on line) 离线 (off line). 从是否与仪器联机的角度来分. 柱前衍生化 (pre-column derivatization) 柱上衍生化 (on-column derivatization)

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荧光衍生试剂在高效液相色谱和电泳中的应用

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Presentation Transcript

  1. 荧光衍生试剂在高效液相色谱和电泳中的应用 导 师：张玉奎 学 生：张 琳 中科院大连化学物理研究所1810组

  2. 汇报内容 • 引言 • 常用荧光衍生化试剂应用简介 • 展望

  3. 引 言 • 衍生的目的 • 衍生发应方式 • 荧光衍生试剂的构成

  4. 衍生化反应方式 • 标记 • 非标记 从是否形成共价键来分 • 在线 (on line) • 离线 (off line) 从是否与仪器联机的角度来分 • 柱前衍生化 (pre-column derivatization) • 柱上衍生化 (on-column derivatization) • 柱后衍生化 (post-column derivatization) 从衍生反应的场所来分

  5. 荧光衍生试剂的基本构成 荧光团（试剂分子母体） 反应基团 取代基 胆磺酰肼 DNS-H

  6. I 胺类化合物的衍生试剂 • 芳香邻二醛类 OPA • 异硫氰酸酯类 FITC • 酰氯类 FMOC • 活性卤类 NBD-Cl • N-羟基琥珀酰亚胺活性酯类 AQC

  7. 常用胺的衍生试剂 分子式 邻苯二甲醛 OPA 4-氯-7-硝基-2,1,3-苯并恶二唑NBD-Cl 荧光素异硫氰酸酯FITC FMOC芴代甲氧基酰氯 6-氨喹啉基琥珀酰亚胺碳酸酯AQC

  8. 邻苯二甲醛OPA 衍生分离氨基酸的色谱图 J Chromatorgr. 1990,499:557

  9. 集成化微流控芯片氨基酸分析仪 高等学校化学学报 2004, 25: 189~190

  10. FMOC 衍生分离氨基酸的色谱图 J Chromatorgr. 1990,499:557

  11. FMOC与CEOC衍生分离氨基酸的比较 Anal. Biochem 2003,313 17~27

  12. FMOC与CEOC衍生分离脂肪胺的比较 图2 FMOC 衍生胺类化合物色谱分离图（23种） 图3 CEOC 衍生胺类化合物色谱分离图（23种）

  13. II 醇、酚的衍生试剂 • 羰基氯类： FMOC CEOC • 磺酰氯类: DNs-Cl • 卤代三嗪类: EDTN 1-乙氧基-4-(二氯-三嗪)萘（EDTN）

  14. CEOC 衍生醇类荧光检测色谱分离 分析化学 2003, 31, 62~65

  15. CEOC 衍生酚类荧光检测色谱分离 1.苯酚 2.对氯苯酚 3. 2,5-二甲基苯酚 4. 2,4-二氯苯酚 5. 1,4对苯二酚

  16. III 羰基化合物的衍生试剂 • 肼类 DNs-H CEOC-H • 氨基类 氨基甲基芘

  17. 肼和胺与羰基化合物的反应

  18. 咔唑-9-乙氧基羰基肼(CEOC-H)柱前衍生中性糖高效液相色谱分离咔唑-9-乙氧基羰基肼(CEOC-H)柱前衍生中性糖高效液相色谱分离 (FL detection) 1.乳糖 2.甘露糖 3.葡萄糖 4.鼠李糖 5. 山梨糖

  19. IV 羧酸类化合物的衍生试剂 (4-溴甲基-7-甲氧基香豆素) • 溴甲基类 BrMMC • 哌嗪基类 DBD-Pz • 重氮甲烷基类 ADAM • 其它类 7-N-哌嗪-4-二甲氨基苯并呋喃 9-蒽重氮甲烷 9-蒽重氮甲烷 4-氨甲基-6，7-二甲基香豆素 (ADMC) 9-(2-羟乙基)-吖啶酮 HEA

  20. 荧光衍生试剂与羧酸的反应

  21. 4-氨甲基-6,7-二甲基香豆素 (ADMC) 衍生羧酸 色谱分离图 Anal.Sci.1996,12:189

  22. 9-(2-羟乙基)-吖啶酮 HEA 衍生胆汁酸 色谱分离图 Fig.1 胆汁酸分离色谱图（荧光检测）. 衍生物的激发和发射波长分别为 ex=404, em=440nm

  23. V 分离对映体的手性荧光衍生试剂

  24. 手性荧光衍生试剂 R(-)DBD-PyNCS 衍生分离DL氨基酸 Toshimasa Toyo’oka Japan J.C.A 1998 822 215~224

  25. OPA 与手性硫醇 衍生分离DL氨基酸 N-异丁酰基-D(L)-半胱氨酸 (IBDC和IBLC) J.C.A 1999 832 123

  26. VI 蛋白质的衍生试剂 目前常用衍生蛋白质的荧光标记试剂有： • 邻苯二甲醛 (OPA) • 4-氟-7-硝基苯并恶二唑 (NBD-F) • 荧光素异硫氰酸酯 (FITC) • 3-呋喃甲酰喹啉-2-羰醛 (FQ)

  27. 邻苯二甲醛OPA 衍生马心肌红蛋白质毛细管电泳分离 Fig.5 OPA 柱后标记马心肌红蛋白质毛细管电泳图 J.Am.Chem.Soc. 1995,117:3325

  28. 3-呋喃甲酰喹啉-2-羰醛FQ 衍生蛋白质毛细管电泳分离 J.Am.Chem.Soc. 1989,111: 5008

  29. VII 核酸的衍生试剂 DNA序列分析中所用的四种荧光衍生试剂 Nature 1986,327: 674

  30. DNA 测序仪及电泳图

  31. 展 望 分析化学中的有机试剂在分析化学中占有与分析仪器同等重要的地位，荧光衍生化试剂则是有机分析试剂的一类重要分支。 性能优良的荧光衍生化试剂可能将成为某些物质的高灵敏 高选择性分析的关键，荧光衍生试剂的开发与应用也正朝这个方向发展。 在实际工作中将可能遇到各种现有荧光衍生试剂所不能解决或不能很好解决的问题。 有必要根据实际工作的需要来开发研究新型的荧光衍生试剂

  32. Thank You!

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