دانشگاه آزاد اسلامي واحد كرج

1. دانشگاه آزاد اسلامي واحد كرج

3. پایان نامه های كارشناسي ارشد

4. گروه : علوم پايه

5. رشته تحصيلي : ميكروبيولوژي

6. استخراج وارزيابي مولكولي پروتئينهاي غشاي خارجي (OMPS) بروسلا ابورتوس s-99وبررسي خواص ايمونولوژيكي OMPS به صورت توام با LPS.

7. نام و نام خانوادگي دانشجو : سحر كرمي ، شماره دانشجويي : 85357003516

8. به راهنمايي :بهمن تبرايي • چكيده: • بروسلوزيس مهم ترين بيماري عفوني مشترك بين انسان و دام (زئونوزيس) است كه در اثر آلودگي باكتريهاي جنس بروسلا بوجود مي آيد. بنابراين شناسايي عوامل ايمني زا در جسم سلولي بروسلاها به عنوان راهگشايي جهت كنترل اين معضل بهداشتي در برخي مناطق جهان مطرح مي باشد. شاخص هاي آنتي ژنيك مهم بروسلا شامل ليپوپلي ساكاريد (LPS) و پروتئينهاي غشاي خارجي (OMPs) از اجزاي ديواره سلولي بروسلا هستند.در اين مطالعه، پروتئينهاي غشاي خارجي (OMPs) ديواره باكتري گرم منفي بروسلا آبورتوس 99-S به عنوان يك جزء ايمونوژنيك مورد ارزيابي قرار گرفته است. • به اين ترتيب كه ابتدا پروتئينهاي غشاي خارجي بروسلا آبورتوس سويه 99-S به دنبال كشت باكتري در محيط بروسلا آگار، طي روش خاصي استخراج شده و سپس ويژگيهاي شيميايي آن (شامل سنجش ميزان پروتئين، سنجش ميزان LPS، الگوي الكتروفورتيك نمونه استخراج شده) بررسي و تعيين گرديد. در نهايت اين تركيب جهت ايمني زايي در الگوهاي مختلف به مدل حيواني (سه دسته خرگوش سفيد نيوزيلندي) طي روزها 0 ،7و 14 تزريق شد و يك هفته پس از هر تزريق هم خونگيري صورت گرفت و سرم حاصل در 20- نگهداري شد. • جهت القاي بهتر پاسخ ايمني از ادجوانت كامل فروند و LPS بروسلا آبورتوس (به عنوان يك ادجوانت با منشاء ميكروبي) استفاده شد. بررسي الكتروفورتيكيOMP هاي بروسلا با روش سديم دودسيل سولفات ژل الكتروفورزيس (SDS-PAGE) صورت گرفت و يك باند در رنج 36- 38به دست آمد كه متعلق به دومين گروه از پروتئينهاي غشاي خارجي يعني پورين ها مي باشد. به منظور سنجش پاسخ ايمني و ارزيابي القاي سنتز آنتي بادي اختصاصي IgG عليه بروسلا همچنين بررسي توانايي LPS بروسلا آبورتوس 99-S به عنوان يك ادجوانت در تحريك سنتز آنتي بادي با عيار (titer) بيشتر عليه ارگانيسم بروسلا، آزمون الايزا (ELISA) انجام شد و سرم حيوانات ايمني زايي شده بوسيله آن مورد ارزيابي قرار گرفت. در روش الايزا، ديواره سلولي بروسلا به عنوان آنتي ژن فاز جامد استفاده شد. داده هاي حاصل از الايزا مورد آناليز آماري قرار گرفت و مشخص شد كه گروههاي آزمايش نسبت به گروه شاهد داراي اختلاف معني دار (05/0 >P) هستند. • با توجه به يافته هاي به دست آمده در اين مطالعه مي توان به اين نتيجه رسيد كه پروتئينهاي غشاي خارجي تخليص شده در اين روش به تنهايي تأثير كمي در تحريك پاسخ ايمني هومورال دارند اما به صورت همراه با LPS و ادجوانت كامل فروند (CFA) به طور قابل ملاحظه اي مي تواند سيستم ايمني را تحريك كنند. • از بين تركيبات مختلفي كه جهت ايمني زايي مدلهاي حيواني استفاده شدند، تركيب OMPهاي بروسلا آبورتوس 99-S با LPS به عنوان ايمونوژنيك ترين تركيب شناسايي شد و اين دو جزء به عنوان اجزاي يك واكسن زيرواحدهاي (subunit) پيشنهاد شدند. • كلمات كليدي : بروسلا آبورتوس 99S، پروتئينهاي غشاي خارجي (OMPs)، ليپوپلي ساكاريد (LPS)، الايزا (ELISA)، SDS-PAG