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第三章 中药制剂的检查

第三章 中药制剂的检查. 制剂通则检查 一般杂质检查 特殊杂质检查 微生物限度检查. §1 中药制剂杂质检查. 杂质 ： 指能危害人体健康或影响药物质量的物质。 杂质的分类 一般杂质（如酸、碱、水分、氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐） 特殊杂质 杂质来源 中药材原料中带入 生产制备过程中引入 贮存过程中引起的中药制剂自身理化性质的改变. 注射用双黄连（冻干）中砷盐限量检查 取本品 0.4g ，加 2% 硝酸镁乙醇溶液 3ml ，点燃，燃尽后，先用 小火炽灼使炭化，再在 500 ～ 600℃ 炽灼使完全灰化，放冷，加

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第三章 中药制剂的检查

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  1. 第三章 中药制剂的检查

  2. 制剂通则检查 • 一般杂质检查 • 特殊杂质检查 • 微生物限度检查

  3. §1 中药制剂杂质检查 杂质：指能危害人体健康或影响药物质量的物质。 • 杂质的分类 • 一般杂质（如酸、碱、水分、氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐） • 特殊杂质 • 杂质来源 • 中药材原料中带入 • 生产制备过程中引入 • 贮存过程中引起的中药制剂自身理化性质的改变

  4. 注射用双黄连（冻干）中砷盐限量检查 取本品0.4g，加2%硝酸镁乙醇溶液3ml，点燃，燃尽后，先用 小火炽灼使炭化，再在500～600℃炽灼使完全灰化，放冷，加 盐酸5ml与水21ml使溶解，依法检查（中国药典2000版附录Ⅸ F）。 如果标准砷溶液（1µgAs/ml）取用量为2ml，杂质限量的计算如下： §1 中药制剂杂质检查 • 杂质的限量检查 杂质限量：指药物中所含杂质的最大允许量，通常用% 或ppm来表示。 • 杂质限量检查及计算方法 取一定量与被检杂质相同的纯物质或其它对照品配制成标准溶液，与一定量供试药物的溶液，在相同处理条件下，比较反应结果，从而确定杂质限量是否超过规定。

  5. §1 中药制剂杂质检查 • 杂质的限量检查 不用标准溶液，直接在供试品溶液中加入试剂进行检查。 肉桂油中重金属检查 取肉桂油10ml，加水10ml与盐酸1滴，振摇后，通硫化氢气使 饱和，水层与油层均不得变色。

  6. §2 一般杂质检查方法 • 重金属检查法 • 重金属：在实验条件下能与硫代乙酰胺或硫化钠作用显色的金属杂质。 • 重金属检查法基本原理 CH3CSNH2+H2O CH3CONH2+H2S↑ Pb2++H2S→PbS↓+2H+ pH3.5

  7. §2 一般杂质检查方法 • 重金属检查法 • 检查方法

  8. §2 一般杂质检查方法 • 重金属检查法 • 检查方法

  9. §2 一般杂质检查方法 • 重金属检查法 • 注意事项 • 方法灵敏度 适用于含铅量在10µg-30µg之间。标准铅液的用量以20µg（相当于标准铅溶液2ml）为宜。 • 反应条件 硫代乙酰胺试液与重金属反应的最佳pH值是3.5，硫代乙酰胺试液加入量以2ml时呈色最深，最佳显色时间为2分钟。 • 有色供试液的处理 供试品在加硫代乙酰胺试液以前如带色，可用稀焦糖液或加常用的指示剂调整标准溶液，使两者颜色一致。 • 其他离子的干扰 • Fe3+---加抗坏血酸。 • 当使用盐酸超过1.0ml、氨试液超过2 ml，以及用硫酸或硝酸进行有机破坏，或加入其他试剂进行处理者，对照溶液应取同样量试液蒸干后，依法检查。 • 铁盐供试品，可利用Fe3+在比重为1.103-1.105的盐酸（盐酸9ml与蒸馏水6ml的混合液）中成为HFeC162-，可用乙醚提取而除去，再将酸性溶液加氨试液使呈碱性后，用氰化钾作为微量铁盐的掩蔽剂，再加硫化钠试液测定。

  10. §2 一般杂质检查方法 • 重金属检查法 • 注意事项 • 前处理 需将药品灼烧破坏，使有机物分子中的重金属游离。灼烧时炽灼温度必须控制在500～600℃。 • 其他 • 标准铅溶液应在临用前精密量取标准铅贮备液新鲜稀释配制 • 硫化钠试液应采用分析纯的硫化钠配制，贮存在棕色瓶中可保存1～2个月。 • 含有Pb2+的中性或弱酸性溶液，如需过滤，可加入对酚酞呈微碱性的饱和醋酸铵溶液，温热后用直径较小的定量滤纸滤过，或者选用玻砂漏斗过滤。 • 如供试品本身能生成不溶性硫化物时，影响重金属的检查，可加入适当的掩蔽剂。

  11. §2 一般杂质检查方法 • 砷盐检查：药品中微量砷（以As计算）的限量检查 • 古蔡氏法 • 基本原理 ① AsO33-+3Zn+9H+→AsH3↑+3Zn2++3H2O ② AsH3+2HgBr2→2HBr+AsH(HgBr)2 (黄色) （溴化汞试纸） AsH3+3HgBr2→3HBr+As(HgBr)3 (棕色) ※ As(V)反应慢，须将As(V)还原成As(III) 初生态的氢

  12. §2 一般杂质检查方法 • 砷盐检查： • 古蔡氏法 AsO43-+2I-+2H+ →AsO33-+I2+H2O AsO43-+Sn2++2H+→AsO33-+Sn4++H2O I2+Sn2+→2I-+ Sn4+ 4I-+Zn2+→[ZnI4]2- Sn2++Zn →Sn+Zn2+ 促进反应向右进行 形成锌锡齐，有利于反应平稳的进行

  13. §2 一般杂质检查方法 • 砷盐检查： • 古蔡氏法 HgBr2试纸 古蔡氏法检查砷装置 A: 100ml标准磨口锥形瓶 B: 中空的标准磨口塞 C: 导气管(外径8.0mm，内径 6.0mm)，全长约180mm D/E :具孔（孔径6.0mm）的有机玻璃旋塞 醋酸铅棉60mg (装管高度6-8cm)

  14. §2 一般杂质检查方法 • 砷盐检查： • 古蔡氏法 标准砷斑的制备 ① A瓶：标准砷溶液(1µg/ml )2ml+盐酸5ml+水21ml+KI试液5ml+酸性SnCl2试液5滴，室温10min ② A瓶＋锌粒2g，接导气管C ③ 25℃ -40℃水浴45min 检查法

  15. §2 一般杂质检查方法 • 砷盐检查 • 古蔡氏法 • 注意事项 • 方法灵敏度 约为0.75µg(以As计)。2ml标准砷溶液（相当于2 µgAs）所形成的砷斑色度适中，清晰，便于辨认。 • 酸度及各种试液用量 反应液的酸度相当于2mol/L的盐酸液。含KI浓度为2.5%，SnC12浓度为0.3%，加入锌粒以2g为宜。 • 反应温度和时间: 25～40℃，时间为45分钟。 • 锌粒选用2 mm左右粒径(能通过一号筛)的为宜。 • 汞试纸的选择 选用质量较好，组织疏松的中速定量滤纸；溴化汞试纸一般宜新鲜制备。 • 采用醋酸铅棉花吸收除去H2S。2000版药典规定称取60mg醋酸铅棉花，装管高度约80mm。

  16. §2 一般杂质检查方法 • 砷盐检查： • 古蔡氏法 • 注意事项 • 中药制剂的前处理：常用酸破坏法、碱破坏法及直接炭化法等使有机砷游离出来，以氢氧化钙破坏法较为常用。 • 干扰物质：如硝酸、磷、锑化合物或硫化物、亚硫酸盐、硫代硫酸盐、碘、氯、汞、银、镍、钴、铜、铁、铋等的干扰。 • 其他 A 所用仪器、试液等的影响 B 同一套仪器应能辨别出标准砷溶液1.5ml与2.0ml所呈砷斑的深浅。 C 标准砷溶液应于实验当天配制，标准砷贮备液存放时间一般不宜超过一年。 D 砷斑不稳定，反应应保持干燥及避光，并立即比较。 E 配制成的酸性氯化亚锡试液3个月后不宜使用。

  17. §2 一般杂质检查方法 • 砷盐检查： • 二乙基二硫代氨基甲酸银法（Ag-DDC法） • 基本原理 ※ 既可做限量检查，又可做含量测定。 红色胶态银

  18. §2 一般杂质检查方法 • 砷盐检查： • 二乙基二硫代氨基甲酸银法（Ag-DDC法） • 检查方法 • 目视检测 • 分光光度计, λ=510 Ag-DDC 5ml

  19. §2 一般杂质检查方法 • 砷盐检查： • 二乙基二硫代氨基甲酸银法（Ag-DDC法） • 注意事项 吡啶(DL=0.5 µgAs/30ml) • 有机碱液的选择 三乙胺 (0.75-7.5 µg范围内, A∝C) • 温度和时间：25～40℃水浴，45min

  20. §2 一般杂质检查方法 • 铁盐检查法 • 硫氰酸盐法(CP) • 原理 Fe3++6SCN-→[Fe(SCN)6]3- • 检查方法 供试品 标准铁溶液 • 方法灵敏度20-50 µg Fe3+ /50ml H+ +H20至25ml, +稀HCl4ml, +(NH4)2S2O850mg, +H20至35ml, +30%NH4SCN3ml, +H20至50ml

  21. §2 一般杂质检查方法 • 铁盐检查法 • 巯基醋酸法（EP） 2Fe3++2HS·CH2COOH → 2Fe2++HOOCCH2-S-S-CH2COOH+2H+ Fe2++2HS·CH2COOH → Fe(S·CH2COOH)2 +2H+ Fe(S·CH2COOH)2 +2OH-→ [Fe(S·CH2COO)2]2-+2H2O

  22. §2 一般杂质检查方法 • 硫酸盐检查法 SO42- + Ba2+→ BaSO4 (白色混悬液) （pH ~1，25-30℃，+25%BaCl2) ※ 适宜的浓度范围：100-500 µg SO42- /50ml • 氯化物检查法 Cl-+Ag+→ AgCl(白色混悬液) （5ml HNO3/50ml，30-40℃，置暗处反应) ※ 适宜的浓度范围：50-80 µg Cl- /50ml

  23. §2 一般杂质检查方法 • 干燥失重：药品在规定的条件下，经干燥后所减失 的重量，包括水分及其他挥发性成分。 • 检查方法 • 常压恒温干燥（烘干法）--受热较稳定的中药制剂 恒重：连续2次干燥后的重量差异不超过0.3mg • 干燥剂干燥 –受热易分解或挥发的供试品 • 硅胶，五氧化二磷，硫酸等干燥剂 • 减压干燥—熔点低、受热不稳定及较难赶除水分的供试品

  24. §2 一般杂质检查方法 • 水分测定法 • 烘干法—不含或含少量挥发性成分的供试品 • 甲苯法--含挥发性成分的供试品 • 减压干燥--含挥发性成分的贵重药品 干燥剂：P2O5 • 气相色谱法--散剂、颗粒剂、丸剂、 片剂等各类型中药制剂中微量水分的测定 • 费休法 甲苯法装置

  25. §2 一般杂质检查方法 • 炽灼残渣检查法(硫酸灰分,EP) 700℃－800℃ +硫酸 ※ 取样量由炽灼残渣限量决定,一般1~2 g ※ 缓慢灼烧 ※ 将残渣留作重金属检查时, 500℃－600℃ • 灰分测定 • 总灰分 500℃－600℃灰烬+盐酸溶解过滤 滤渣 灼烧 (+10% NH4NO3) • 酸不溶性灰分 有机物→炭化，分解 非挥发性无机杂质→硫酸盐

  26. §3 特殊杂质检查方法 • 特殊杂质：指在该药品的生产和贮存过程中，根据其来源、生产工艺及药品的性质有可能引入的杂质。 大黄流浸膏中土大黄苷的检查 取本品适量，加甲醇2 ml，温浸10分钟，放冷，取上清液 10µl，点于滤纸上，以45%乙醇展开，取出，晾干，放置 10分钟，置紫外灯（365nm）下检视，不得显持久的亮紫 色荧光。 大黄素 土大黄苷

  27. §4 农药残留量的检查 • 常用农药 • 有机氯类：艾氏剂、六六六、氯丹、DDT、狄氏剂等 • 有机磷类：三硫磷、氯硫磷、蝇毒磷、内吸磷、敌敌畏、乐果等 • 苯氧羧酸类除草剂：2，4-D；2，4，5-T • 氨基甲酸酯类：西维因（甲萘威） • 二硫代氨基甲酸酯类：福美铁、代森锰、代森钠、福美双等 • 无机农药：磷化铝、砷酸钙、砷酸铅 • 植物性农药：烟叶和尼古丁；除虫菊花提取物和除虫菊酯（合成除虫菊酯）；毒鱼藤根和鱼藤根 • 其他：溴螨酯、氯化苦、二溴乙烷、环氧乙烷、溴甲烷。

  28. §4 农药残留量的检查 • 农药残留量的测定 • 供试品的制备 • 残留农药的提取 • 提取溶剂：乙腈、丙酮 • 提取方法：索氏提取法和振荡提取法 • 样品纯化—液-液分配+柱层析分离 • 检测方法—色谱分离法

  29. §4 农药残留量的检查 • 农药残留量的测定 • 检测方法 • 薄层色谱法 • 气相色谱法和液相色谱法

  30. §4 农药残留量的检查 • 农药残留量的测定 • 有机氯农药残留量检查 • 色谱条件与系统适用性试验——弹性石英毛细管柱SE-54(或DB-1701) 、电子捕获检测器，进样口温度：230℃，检测器温度：300℃，不分流进样，程序升温 • 对照品储备液——六六六（BHC）[α-，β-，γ-，δ-BHC]，滴滴涕（DDT）[PP’-DDE，-DDD，-DDT，OP’-DDT]及五氯硝基苯（PCNB）+石油醚（60-90℃）分别制成每1ml约含4-5µg的溶液 • 混合对照品储备液的制备——对照品储备液0.5ml →10ml • 混合对照品溶液的制备——取混合对照品储备液制成每1L含0µg、1µg、5µg、10µg、50µg、100µg、500µg浓度系列。

  31. §4 农药残留量的检查 • 农药残留量的测定 • 有机氯农药残留量检查 • 供试品溶液制备——供试品研细，称取适量（相当于药材2g），置100ml具塞锥形瓶中，+水20ml浸泡过夜，+丙酮40ml，称定，超声处理30min，放冷，用丙酮补足减失的重量，+氯化钠约6g及二氯甲烷30ml，称定，超声处理15min，用二氯甲烷补足减失的重量，静置使分层，将有机相迅速移入装有适量无水硫酸钠的100ml具塞锥形瓶中，放置4小时。精密量取35ml，于40℃水浴减压浓缩至近干，加少量石油醚（60～90℃）如前反复操作至二氯甲烷及丙酮除净，用石油醚（60-90℃）溶解并转移至10ml具塞刻度离心管中，加石油醚（60～90℃）至5ml。+硫酸1ml，振摇1分钟，离心（3000转/分）10分钟。精密量取上清液2ml置具刻度的浓缩瓶（见图3-5）中，连接旋转蒸发器， 40℃下（或用氮气）将溶液浓缩至适量，精密稀释至1ml ，即得。 • 测定

  32. §4 农药残留量的检查 • 农药残留量的测定 • 有机磷农药残留量检查 • 色谱条件与系统适用性试验——弹性石英毛细管柱DB-17MS(或HP-5)、氮磷检测器，进样口温度：230℃，检测器温度：300℃，不分流进样，程序升温 • 对照品储备液——对硫磷、甲基对硫磷、乐果、氧化乐果、甲胺磷、久效磷、二嗪农、乙硫磷、马拉硫磷、杀扑磷、敌敌畏、乙酰甲胺磷，+用乙酸乙酯，制成每1ml约含100µg的溶液 • 混合对照品储备液的制备——对照品储备液1ml →20ml • 混合对照品溶液的制备——取混合对照品储备液制成每1ml含0.1µg、0.5µg、1µg、2µg、5µg浓度系列。

  33. §4 农药残留量的检查 • 农药残留量的测定 • 有机磷农药残留量检查 • 供试品溶液制备——供试品研细，称取适量（相当于药材5g），+无水硫酸钠5g，+乙酸乙酯50-100ml，冰浴超声处理3min，放置，取上层液滤过，药渣加乙酸乙酯30-50ml，冰浴超声处理3min，放置，滤过，合并滤液， 40℃减压浓缩至干，+乙酸乙酯5ml，使溶解。精密量取1ml，加到活性炭小柱（120-400目，0.25g），置多功能真空样品处理器上，用正己烷-乙酸乙酯（1:1）5ml洗脱。洗脱液置氮吹仪上浓缩至近干。+乙酸乙酯1ml，溶解。 • 测定

  34. §4 农药残留量的检查 • 农药残留量的测定 • 有机磷农药残留量检查 1-敌敌畏 2-速灭磷 3-久效磷 4-甲拌磷 5-巴胺磷 6-二嗪农 7-乙嘧硫磷 8-甲基嘧啶硫磷 9-甲基对硫磷 10-稻瘟净 11-水胺硫磷 12-氧化喹硫磷 13-稻丰散 14-甲喹硫磷 15-克线磷 16-乙硫磷 十六种有机磷农药的气相色谱图

  35. §6 黄曲霉毒素的检查 • 黄曲霉毒素（aflatoxin） • 极强的毒性和致癌性 • 在紫外线照射下，能发出荧光 • 耐热，在280℃时发生裂解 • 低浓度时易受紫外线破坏，被氧化或遇碱被破坏 • 在水中溶解度低，易溶于油及氯仿、丙酮、甲醇等有机溶剂 • 测定方法 • 微柱色谱法、薄层色谱法、高效液相色谱法、荧光分析法、免疫化学分析法等

  36. §6 黄曲霉毒素的检查 • 测定方法 • 微柱色谱法 （测定黄曲霉毒素的总量） • 原理及分析方法 杂质 → 氧化铝吸附 aflatoxin → 硅镁型吸附剂吸附 对照品溶液：每1ml含0.005µg、0.01µg、0.025µg、0.05µg、 黄曲霉毒素B1氯仿溶液 供试品溶液：氯仿提取 微柱色谱：上样1ml，+1ml 丙酮-氯仿（10:90）展开，365nm 波长紫外光下观察荧光 ※ 本法测定的是黄曲霉毒素的总量，灵敏度为10µg/kg。 ※ 使用的试剂和棉花中不得含有荧光物质。 ※ 无水硫酸钠、中性氧化铝、硅镁型吸附剂应为60-120目，使用前应灼烧脱水或活化。 ※ 实验完毕后，应及时消毒（安替福民溶液或5%次氯酸钠溶液） 中性氧化铝 硅镁型吸附剂

  37. §6 黄曲霉毒素的检查 • 测定方法 • 薄层色谱法 • 原理：黄曲霉毒素B1在365nm紫外光照射下产生蓝紫色荧光 • 分析方法 • 黄曲霉毒素标准液的制备 每1ml含0.04µg、0.2 µg、0.5 µg、1µg，溶剂为苯-乙腈(98:2) • 样品处理 • 薄层层析（两次展开） • 首先：无水乙醚, 展开12 cm • 然后：氯仿-丙酮(92:8)，展开10 cm ※ 本法最低检出量为0.0004µg，灵敏度为5µg/kg。 ※ 如样品中杂质干扰严重，可采用双向展开。 ※ 层析硅胶可加入热盐酸(1:4)处理，使得斑点集中，且黄曲霉毒素B1荧光不易消失。

  38. §6 黄曲霉毒素的检查 • 测定方法 • 高效液相色谱法 • 原理：黄曲霉毒素经衍生后得到能产生强荧光的物质，可用 荧光检测器进行检测。 • 衍生的方法：柱前三氟乙酸（TFA）衍生，柱后碘衍生和柱后过溴化溴化吡啶（PBPB）衍生 • 分析方法 • 标准溶液的配制 • 黄曲霉毒素衍生标样的配制 • 样品提取、净化 • 衍生物的制备 • 色谱条件（甲醇-水的磷酸缓冲体系） ※ 本法灵敏度为0.2μg/kg

  39. §5 黄曲霉毒素的检查 • 测定方法 • 荧光分析法 黄曲霉毒素B1α-香豆素钠盐 （荧光） （无荧光） • 激发波长360nm，发射波长450nm • 免疫化学分析法 • 放射免疫法 • 亲和层析法 • 酶连免疫法（ELISA） NaOH HCl

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