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实验九 动物细胞的原代培养

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实验九 动物细胞的原代培养

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  1. 实验九 动物细胞的原代培养

  2. 1. 实验目的 • 初步掌握细胞的原代培养技术。 • 了解原代培养的意义。 • 学习台盼兰染色检定细胞死活的方法。

  3. 2. 实验原理 原代培养的两种主要方法: • 消化法:37度,0.125%胰蛋白酶或0.02%EDTA消化20~40分钟。 • 组织块培养法:将组织块培养于平皿中,待组织边缘开始有单层细胞伸展开来,即从组织培养转为细胞培养。

  4. 3. 实验材料、用品 • 实验材料:昆明小鼠 • 实验用品: ①仪器及用具 超净工作台;C02培养箱;普通显微镜;倒置显微镜;水浴箱;离心机;高压灭菌锅;电热干燥箱。 解剖剪、解剖镊、眼科剪、眼科镊、培养皿、培养瓶、离心管、微量加样器、吸管、移液管、血细胞计数板、橡皮吸头、胶塞、酒精灯、试管架、棉球、无菌服、口罩、帽子等。 ②试剂 75%乙醇、RPMI 1640培养液(含小牛血清和青、链霉素)、0.25%胰蛋白酶+0.02%乙二胺四乙酸(EDTA)溶液、Hanks液、7.4%NaHCO3溶液。

  5. 4. 实验步骤 • 小鼠肝细胞的原代培养消毒→拉颈或摘眼球放血法处死小鼠→再消毒→逐层消毒解剖→取肝→清洗→剪碎组织约1mm3→洗涤。 一次消化法:37度下,青霉素瓶中加0.125%胰酶消化30分钟,不时吹打振荡。用加5%血清的D-Hanks终止消化,过滤离心洗涤后即可镜检。 组织块培养法:滴少量血清于平皿底部,抹平,将组织块逐个铺展开,37度倒置培养2~3h,再翻转加培养基即可。 • 小鼠脾淋巴细胞的原代培养取出脾脏后,研磨,过滤,低渗除红细胞,离心收集镜检。 • 台盼兰染色检定细胞死活:一滴悬液加一滴0.5%台盼兰液 。

  6. 5.思考题 • 胰酶和EDTA消化的原理是什么?