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细胞工程自主实验

细胞工程自主实验. 两种物理方法分离细 胞对细胞活性的影响. 组员：李翠峰 叶成. 1. 实验目的. 2. 实验原理. 3. 实验方法. 4. 实验结果及分析. 目的. 实验目的. 了解不同物理方法 分离小鼠不同组织细胞 对细胞活性的影响. 进一步掌握小鼠细胞 分离方法及细胞活性 测定方法. 实验原理. 细胞在分离 过程中活性 会发生变化， 甚至死亡. 台盼蓝法 和 MTT 法 可以测定 细胞的活性. 通过细胞活性 的比较确定 方法的优劣. 台盼蓝法是利用活 细胞可以组织某些染料， 而死细胞不能就会着色，

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细胞工程自主实验

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  1. 细胞工程自主实验 两种物理方法分离细 胞对细胞活性的影响

  2. 组员：李翠峰 叶成 Company Logo

  3. 1 实验目的 2 实验原理 3 实验方法 4 实验结果及分析 Company Logo

  4. 目的 实验目的 了解不同物理方法 分离小鼠不同组织细胞 对细胞活性的影响 进一步掌握小鼠细胞 分离方法及细胞活性 测定方法 Company Logo

  5. 实验原理 细胞在分离 过程中活性 会发生变化， 甚至死亡 台盼蓝法 和MTT法 可以测定 细胞的活性 通过细胞活性 的比较确定 方法的优劣 台盼蓝法是利用活 细胞可以组织某些染料， 而死细胞不能就会着色， 根据着色情况确定 细胞存活状态 MTT法是琥珀酸脱 氢酶可以使MTT还 原成难溶物，然后 经DMSO溶解，测 吸光度，确定细胞活性 Company Logo

  6. 实验过程 1.取两只生长状况良好的成年雄鼠。 2.解剖小鼠，取肾脏、心脏、脾脏。并称重 3.（1）用注射器分别吹出个脏器细胞； （2）用两百目筛网研磨过滤获得各脏器细胞 4.取两种方法获得的滤液于10ml离心管内，1000rpm/分，离心5min 5.弃去上清液，加入5ml红细胞裂解液，静置3-5min，1000rpm，离心5min，弃上清,，加5mlPBS清洗后,1000rpm,离心5min，再用培养液重新悬浮细胞 Company Logo

  7. 6．不同组织细胞分别计数 7.取不同组织的部分细胞稀释到1-2*106个/ml取干净的1.5mlEP管,在管中加入9滴细胞悬液,再加一滴0.4%台盼兰,混匀后在3min内检测细胞存活率并记录 8.将获得的各组织细胞在1.5ml的eppendorf管中用培养液分别稀释到下表中所示的浓度后按下表所示以每孔100微升加入96孔板中。 Company Logo

  8. 注：肾的研磨和吹打的起始浓度相差较大，故在设置浓度的时候注：肾的研磨和吹打的起始浓度相差较大，故在设置浓度的时候 没有将两者调为一致。 Company Logo

  9. 9.上表中，每个脏器同一个细胞浓度做两个重复，m代表碾磨获取的细胞，c代表注射器吹获取的细胞。9.上表中，每个脏器同一个细胞浓度做两个重复，m代表碾磨获取的细胞，c代表注射器吹获取的细胞。 10.再于各孔中加入50微升2mg/ml的MTT溶液，轻轻混匀后于37度水浴中静置2h。 11．反应完成后，取孔板2000rpm离心10min，小心吸去上清。 12．于各孔中加入100微升DMSO，于室温下静止10min，不时摇晃。 13．于OD490nm下酶标仪测定各孔吸光值。 Company Logo

  10. 实验结果与分析 各器官的大致情况记录如下表 Company Logo

  11. MTT结果 Company Logo

  12. MTT结果分析： 从上表中可以知道： 心脏测得的OD值很小，无法作图分析。 分析原因，心脏细胞紧密连接，不易分离，分离过程中对细胞损伤很大。造成这种数据出现。 Company Logo

  13. 脾脏数据分析： Company Logo

  14. 肾脏数据分析 Company Logo

  15. Thank You !

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