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细菌内毒素检查技术

细菌内毒素检查技术. —— 鲎实验凝胶法 药学组 顾霞. 复习提问. 鲎实验的原理是什么？ 鲎试剂能与内毒素发生凝集反应，产生肉眼可见的凝胶。 鲎试剂的灵敏度（ λ ） ： λ=0.25EU/ml 当溶液中内毒素浓度大于或等于 0.25EU/ml 时可与鲎试剂发生凝胶反应（阳性反应）。 当溶液中内毒素浓度小于 0.25EU/ml 时不能与鲎试剂发生凝胶反应（阴性反应）。. 实验步骤 (2005 药典二部）. 1 、按下表制备溶液 A 、 B 、 C 、 D 。. 注： A 为供试品溶液， B 为阳性对照， C 为供试品阳性对照， D 为阴性对照.

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细菌内毒素检查技术

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Presentation Transcript

  1. 细菌内毒素检查技术 ——鲎实验凝胶法 药学组 顾霞

  2. 复习提问 • 鲎实验的原理是什么？ • 鲎试剂能与内毒素发生凝集反应，产生肉眼可见的凝胶。 • 鲎试剂的灵敏度（λ）：λ=0.25EU/ml • 当溶液中内毒素浓度大于或等于0.25EU/ml时可与鲎试剂发生凝胶反应（阳性反应）。 • 当溶液中内毒素浓度小于0.25EU/ml时不能与鲎试剂发生凝胶反应（阴性反应）。

  3. 实验步骤(2005药典二部） 1、按下表制备溶液A、B、C、D。 注：A为供试品溶液，B为阳性对照，C为供试品阳性对照，D为阴性对照 2、鲎试剂复溶。 3、在鲎试剂中分别加入A、B、C、D各0.1ml。 4、封口，37℃，60分钟保温。观察结果。

  4. 一、溶液的配制 注：A为供试品溶液，B为阳性对照，C为供试品阳性对照，D为阴性对照。

  5. 教材P109

  6. 1.2mlBET水 内毒素溶液的制备 • 标准品：120EU，粉末状 • 标准品溶液：0.5EU/ml ——溶解 ——稀释 0.5ml 0.5ml 1ml 4.5ml 4.5ml 1ml 100EU/ml 10EU/ml 1EU/ml 0.5EU/ml

  7. 二、鲎试剂复溶

  8. 三、分别加入ABCD溶液

  9. 三、分别加入ABCD溶液

  10. 四、封口，60分钟37°保温 胶带在酒精灯火焰上快速通过后，绕安瓿瓶口一圈，捏紧封口。 • 五、结果观察、出报告。

  11. 结果观察 • 安瓿缓慢倒转180°，若管内形成凝胶，且凝胶不变形、不从管壁滑脱者为阳性；未形成凝胶或凝胶不坚实、变形并从管壁滑脱者为阴性。 • 1（供试品）： • 2（供试品）： • 3（阳性对照）： • 4（供试品阳性对照）： • 5（阴性对照）：

  12. 结果判断 • 阴性对照5号为阴性 • 阳性对照3号为阳性 • 供试品阳性对照4号为阳性 1、若3、4、5号管呈上述结果，则实验有效 2、若1、2号管均为阴性则供试品合格 3、若1、2号管均为阳性则供试品不合格 4、若1、2号管一管为阳性、一管为阴性，则复试；复试需平行做4份；4份都阴性则合格，否则不合格。

  13. 试剂组： • 鲎试剂：λ=0.25EU/ml • 细菌内毒素检查用水（BET）： 内毒素<0.015EU/ml 规格：2ml、5ml • 内毒素标准品：120EU 供试品： 氯化钠注射液，内毒素限值0.5EU/ml

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