LY TRÍCH DNA BẰNG cách CỘT SILICA

1. LY TRÍCH DNA B?NG ph??ng pháp C?T SILICA bây gi? cách ly trích DNA b?ng bí quy?t s? d?ng c?t silica ?ang t? ra siêu th? m?nh mau chóng và ??n gi?n h?n so v?i bí quy?t tách chi?t th? công. t?t c? nh?ng cách ly trích DNA ??u nh?m ??n m?c ?ích là gi?i phóng và tinh s?ch DNA, trong nh?ng bi?n pháp thì c?t silica ?em l?i s?n ph?m sau ly trích ??t ???c ?? tinh s?ch cao. quá trình ly trích DNA b?ng c?t silica. giai ?o?n ly trích phá màng. m?c ?ích c?a giai ?o?n này là phá b? màng t? bào và màng nhân c?a t? bào VSV, gi?i phóng DNA/ RNA ra không tính dung d?ch t?o ti?n ?? cho vi?c thu nh?n và tinh s?ch DNA. Vi?c ly trích s? s? d?ng các lo?i hóa ch?t Có th? bi?n tính phá v? màng t? bào phê duy?t vi?c phá v? các c?u trúc ??m. các hóa ch?t ly trích có thành ph?n và n?ng ?? ??m ly gi?i thay ??i tùy theo m?c tiêu tách chi?t là ADN ho?c ARN, nh?ng v? c? b?n ??u ch?a nh?ng mu?i chaotropic (guanidine HCL, guanidine thiocyanate, urea và lithium perchlorate) ? n?ng ?? cao, làm m?t tính v?ng b?n c?a liên k?t hydro, l?c Van der Waals và các liên quan k? n??c. Do ??c tính này, các ch?t chaotropic có 1 s? tác d?ng sau: Ly gi?i màng t? bào, Bi?n tính ??m, ADN và nh?ng ??i phân t? khác, B?t ho?t nuclease, thúc ??y quá trình g?n acid nucleic vào silic. ngoài ra, 1 s? ch?t g?t r?a (detergent) và enzyme (th??ng tiêu dùng là proteinkinase ho?c lysozyme) c?ng ???c s? d?ng nh?m t?ng hi?u qu? hòa tan ??m và giai ?o?n ly gi?i. Trong quá trình ly trích DNA plasmid, nh?ng ch?t chaotropic ko ???c thêm vào dung d?ch ly gi?i v?i m?c ?ích tách plasmid kh?i ADN h? gen tr??c, tránh ví nh? c? plasmide và ADN h? gen ??u ???c gi?i phóng cùng m?t lúc vì c?c k? khó ?? phân tích ADN m?ch vòng nh? v?i ADN h? gen có tr?ng l??ng phân t? cao. công ?o?n g?n c?t. Sau lúc bi?n tính phá v? c?u trúc t? bào, DNA/ RNA ???c gi?i phóng ra ngoài dung d?ch, ti?p ?ó dung d?ch này s? ???c di chuy?n qua c?t silica ?? nh?ng DNA/ RNA Có th? liên k?t v?i các h?t silica và ???c gi? l?i, các thành ph?n khác s? ?i qua và chuy?n sang ?áy tube t? ??y tách ???c DNA/ RNA ra kh?i dung d?ch. ? b??c này các hóa ch?t theo b? test s? có nhi?m v? là t?ng c??ng ái l?c gi?a h?t silica và DNA/ RNA h? tr? giai ?o?n g?n k?t, ??ng th?i có tách d?ng r?a DNA/ RNA giúp lo?i b? các thành ph?n xác t? bào và hóa ch?t ly trích ? b??c tr??c ??y. C?n th??ng ???c tiêu dùng ?? t?ng n?ng l?c g?n c?a acid nucleic vào silica, th??ng tiêu dùng là ethanol ho?c ?ôi khi là isopropanol. N?ng ?? c?n s? ???c t?i ?u hóa ?? ??m b?o các DNA/ RNA ko b? ?nh h??ng, quá r?ng rãi ethanol s? làm ??t gãy ADN, ng??c l?i quá ít ethanol s? ko th? h? tr? cho quá trình r?a. R?a. ?ây là b??c lo?i b? các thành ph?n còn sót l?i t? quá trình ly trích nh? protein, polysaccharide, nh?ng lo?i v?t ch?t n?i bào nh?m ??t hi?u n?ng tách chi?t và tinh s?ch ADN/ ARN cao. V? c?n b?n có 2 cách r?a m?u.

2. (1) ví nh? m?u ch?a r?ng rãi ??m và m?u ly trích có màu (VD : gan, phân, lá cây…) bu?c ph?i t?ng c??ng ly trích nh? v?i hóa ch?t ? n?ng ?? ph?i ch?ng. (2) M?u không ch?a ?a d?ng protein nh? công ?o?n tách chi?t ADN plasmid ho?c tinh s?ch s?n ph?m PCR, thì Có kh? n?ng ch? bu?c ph?i s? d?ng ethanol ?? th?c hành công ?o?n r?a. Sau khi r?a th?c hành ly tâm làm khô c?t nh?m lo?i ethanol. n?u c?t l?c v?n còn sót l?i ethanol, ch?t này s? ?i vào trong ph?n ?ng PCR/ Real time PCR sau ?ó làm thúc ??y t?i hi?u su?t ph?n ?ng. Ethanol còn sót l?i trong m?u tách chi?t không th? ???c nh?n bi?t ???c thông qua K?t c?c UV 280/260. do v?y ?? ?ánh giá ethanol còn sót l?i là d?ch DNA sau ly trích s? ko ?ông ?á hoàn toàn lúc b?o qu?n ? – 20oC. Bài vi?t ??y ??: https://visitech.vn/ly-trich-dna-bang-phuong-phap-cot-silica/ https://visitech.vn/ly-trich-dna-bang-phuong-phap-cot-silica/