精品课程项目七组培的研究方法与配方设计咸宁职业技术学院

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研究方法 组织培养配方设计组培的研究方法与配方设计

一、组培的研究方法 在建立一个新的实验体系时，为了能研制出一种适合的培养基，最好先由一种已被广泛使用的基本培养基（如MS培养基或B5培养基）开始。当通过一系列的实验，对这种培养基做了某些定性和定量的小变动之后，即有可能得到一种能满足实验需要的新培养基，选择最佳培养基。常用试验方法主要有单因子试验、多因子试验、逐步添加和逐步排除的试验方法及广谱实验等。

1、单因子试验 在单因子试验中，由于培养基中其他成分都维持在一般水平上，所以只变动一个因子，就可以找出这一因子对试验的影响和影响的程度。例如MS基本培养基的其他成分和用量都不变，只变动NAA用量对某一培养物生根的影响，这种只研究一个因素的试验就是单因子试验。

1、单因子试验 试验中要求对照组与试验组中的试验个体，即植物组织块或其他培养物，必须在遗传性、生理状态、前培养条件等方面，尽可能完全一致。以保证试验结果是来源于试验因子，而不是由于试验材料的不一致导致的。试验中各处理一般都要设有一定的重复，以取得可靠的试验结果。随试验规模和要求不同，大多每个项目要有4～10瓶，每瓶至少3块培养物或3丛小幼苗。

2、多因子试验 对培养基中两个或两个以上因素进行研究的试验称为多因子实验，试验可采用完全试验方案，也可选用正交设计方案，完全试验方案具有均衡完全的特点，各个因子的每个水平都相互搭配，构成了所有可能的处理组合，如研究NAA和6－BA的最佳浓度组合，每个因子各设5个浓度水平（0，0.5，2.5，5，10µmol/l ），这两种因子各种浓度的所有组合，就构成了一个具有25项处理的试验见下表。

2、多因子试验 • 2种激素5种浓度的实验组合

2、多因子试验 完全试验方案试验因子越多，处理数越多，试验越复杂，消耗的精力、物力越多。为了减少试验处理，但又能准确全面地获得试验信息，通常采用正交试验。正交试验可用于同时探求培养基中适宜的几种成分的用量，如细胞分裂素、生长素、糖和其它成分的用量。

3、逐步添加和逐步排除的试验方法 在植物组织分化与再生的研究中，在没有取得可靠的分化与再生之前，往往添加各种有机营养成分，而在取得了稳定的再生之后，就可以逐步减少这些成分。在逐步添加时是使试验成功，在逐步减少时是缩小范围，以便找到最有影响力的因子，或是为了实用上的需要竭力使培养基简化，以降低成本和利于推广。在寻求最佳激素配比时，也经常用到这种加加减减的简单方法。

4、广谱实验法 在广谱实验法中，把培养基中所有组分分为4大类：无机盐、有机营养物质（蔗糖、氨基酸和肌醇等）、生长素、细胞分裂素。对每一类物质选定低（L）、中（M）、和高（H）3个浓度。4类物质各3种浓度的自由组合即构成了一项包括81个处理的实验。在这81个处理中最好的一个可用4个字母表示。

4、广谱实验法 例如，一个包含中等浓度无机盐，低等浓度生长素、中等浓度细胞分裂素和高等浓度有机营养物质的处理即可表示为MLMH。达到这个阶段，再试用不同类型的生长素和细胞分裂素即可找到培养基的最佳配方。这是因为不同类型的生长素和细胞分裂素对不同植物的活性有所不同。

二、组培的配方设计 组培的配方设计步骤：收集资料最佳组培　方案筛选　预备试验正交试验参观咨询

1、技术资料收集 查：学名、品种及商品名，文献资料（近3-5年）。查不到时，查相近的、同属内其他文献。信息：　　　外植体取材时间、类型；初始培养基、继代、生根培养基；　　　培养基类型，附加成分，激素及特殊成分，pH；培养条件，尤其温度；驯化营养土配方及驯化条件。

2、预备试验 分析收集信息，结合自身工作经验，针对关键因素，拟定方案。一般接种到现有培养基上，观察和判断，找出突破口。原则：基本成分不变，一般取全量，先摸索最佳的激素配比。

3、正交试验 1. 确定试验目的。 2. 选择质量特性指标。 3. 选定相关因素。 4. 确定水平。 5. 选用正交表。 6. 配列因素水平，制定实验方案。 7. 实施实验方案。 8. 实验结果分析，选出最佳组培方案。步骤

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