DIAGÓSTICO DE HIV

1.  DIAGÓSTICO DE HIV LIC. RICARDO SALDAÑA

2.  PRUEBAS DE LABORATORIO • Métodos Directos: Evidencian/cuantifican la presencia de antígenos en la muestra. • PCR cualitativa, • PCR cuantificada • cultivo y aislamiento viral, • antigenemia P-24) Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

3.  PRUEBAS DE LABORATORIO • Métodos Indirectos: • Evidencian la presencia o ausencia de anticuerpos totales en la muestra. • Son los más utilizados. • Pruebas rápidas • ELISA Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

4.  Diagnóstico de VIH • Se usan dos niveles de prueba serológicas: • Pruebas de Tamizaje: • Ensayos inmunoenzimáticos • Test de aglutinación • Test de detección rápida • Tienen alta sensibilidad. • La posibilidad de tener falsos negativos es bajo. Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

5.  Pruebas rápidas disponibles en el mercado Multispot HIV-1/HIV-2 Uni-Gold Recombigen OraQuick Advance Reveal G2 Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

6.  PRUEBAS DE ELISA: • Primera Generación: Los antígenos utilizados provienen del lisado viral de un cultivo • Segunda Generación: Los antígenos corresponden a proteínas recombinantes o Péptidos sintéticos. • Tercera Generación: Péptidos recombinantes sintéticos de VIH-1, 2, 0. • Cuarta Generación: Se adicionó el p24. Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

7.  Continuación… • Pruebas de confirmación: Tienen alta especificidad • Western Blot • Inmunofluorescencia Indirecta. • Radioinmunoprecipitación • PUEDEN SER UTILIZADAS PARA DISMINUIR LA POSIBILIDAD DE OBTENER RESULTADOS FALSO POSITIVO. Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

8.  Western Blot • Prueba de confirmación • Principio: Ensayo inmunoenzimático • Detecta anticuerpos contra proteínas específicas del VIH 1 • Interpretación: visual • Muestras: suero y plasma • Volumen: 20 µl • Tiempo: 3.5 hrs • Sensibilidad: 100% • Especificidad: 100% Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

9.  Nomenclatura de las bandas en Western Blot Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

10.  Ventajas de las pruebas rápidas de VIH • Versatilidad y existencia de diferentes principios inmunológicos así como en las muestras biológicas que se pueden utilizar. • No necesitan un laboratorio muy sofisticado para utilizarlas. • La realización y la interpretación de los resultados obtenidos es fácil. • Los resultados preliminares se obtienen en poco tiempo, y cuando se combinan los resultados definitivos los podemos obtener en menos de una hora • Personal a nivel técnico las puede realizar con la debida capacitación y supervisión de un profesional con experiencia. Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

11.  Fortalezas de las pruebas rápidas de VIH • Algunas se pueden almacenar a temperatura ambiente. • Se optimiza el uso de los recursos y el tiempo comparado con el ELISA. • Los resultados obtenidos son igual de confiables que los resultados del ELISA y con menos limitaciones técnicas. • Algunas requieren poca inversión económica. Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

12.  Debilidades de las pruebas rápidas de VIH • El costo comparado de estas pruebas con el ELISA puede a veces ser mayor. • Presencia de falsos positivos por lo que necesitan confirmación de los resultados obtenidos. • El periodo de ventana es mas largo por lo que podemos tener resultados falso negativo comparado con el ELISA de cuarta generación. Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

13.  Causas de resultado falso-positivo: • Relativas al suero: • Relativo a la calidad y manipulación de la muestra: • Calidad, extracción, almacenamiento y contaminación de la misma, estabilidad y calidad de los reactivos. • Relativas a la presencia de auto anticuerpos: • Presencia de enfermedades autoinmunes (AR, LES). • Relativas a otras condiciones: • Vacunaciones, Enf. Virales, I Renal, Cirrosis, Enfermedades hemato -oncológicas, alcoholismo, embarazo, etc. Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

14.  Causas de resultado falso- negativo: • Periodo de ventana • Tratamiento con inmunosupresores • Procesos malignos • Trasplante de médula ósea • Disfunciones de las Células B • Factores reumatoides • Pérdida de estabilidad de los reactivos • Reactivos que detectan principalmente p24 • Pobre respuesta inmune Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

15.  Selección de pruebas rápidas de VIH apropiadas • Es necesario tomar en cuenta tres factores: • El objetivo de hacer la prueba. • Sensibilidad y especificidad de la prueba. • Prevalencia de la infección de VIH en la población que será tamizada con las pruebas. Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

16.  Elección de Pruebas rápidas de VIH • Los tres objetivos para hacer un tamizaje de anticuerpos contra VIH son: • Tamizaje de donadores de sangre u órganos. • Para fines epidemiológicos • Diagnóstico de personas infectadas. Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

17.  Sensibilidad y especificidad de la prueba • Estos dos factores son críticos para diferenciar entre una persona infectada y una que no está infectada. • Pruebas alta mente sensibles disminuyen la posibilidad de obtener resultados falsos negativo. • Las pruebas altamente específicas disminuyen la posibilidad de tener resultados falsos positivo. • La mejor elección dependerá del objetivo de hacer la pruebas. • Los estándares mínimos son: Sensibilidad >99% y especificidad >95% preferiblemente validadas en nuestra población. Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

18.  Sensibilidad y especificidad de las pruebas Resultados De la prueba Sensibilidad = a / (a + c) Especificidad = d / (b + d) VPP = a / (a + b) VPN = d/ (c + d) Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

19.  Detección de anticuerpos contra el VIH Pruebas de Tamizaje Pruebas de Confirmación Sensibilidad Especificidad Falsos positivos es bajo Falsos negativos es bajo Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

20.  Prevalencia de la infección de VIH • Definición: Casos positivos * 100% población total • La prevalencia puede variar de población a población o en un hospital de servicio a servicio. • A > prevalencia > VPP y < VPN • A > prevalencia > VPN y > VPP Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

21.  Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

22.  Estrategia I • Utilizada en: • Donadores de sangre, órganos, emergencias • Estudios de prevalencia • Donde la P > 10% • Diagnostico: • Signos o síntomas clínicos de infección por VIH y la P > 30% Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

23. Utilizada en: Estudios de prevalencia Donde la P < 10% Diagnostico: Signos o síntomas clínicos de infección por VIH y la P < 30% Pacientes asintomático con P >10%  Estrategia II Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

24.  Estrategia III • Diagnóstico de Pacientes asintomático donde la P < 10% Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

25. Tamizaje en labor y partos • Fase preanalitica: Antes de realizar la prueba • Se ha hecho pruebas de VIH anteriormente • Tenemos los insumos y el personal necesarios • Que tan cerca est’a del momento del parto • Que muestra usar’e para hacer la prueba • Sistema de identificaci’on de muestras Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

26. Tamizaje en labor y partos • Fase analitica: proceso de realizaci`on de la prueba: • Es suficientemente sensible • Que tan rapido tendremos el resultado • Necesitamos equipo muy complejo para hacer la prueba • Que nivel de especializaci’on tiene que tener la persona que realiza las pruebas • Ayudar’a nuestro trabajo a disminuir el riesgo de trasmisi’on materno fetal Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

27. Tamizaje en labor y partos • Fase Post analitica: Despues de realizar la prureba< • Registro adecuado de resultados en libro de trabajo. • A quien le doy el resultado, al medico, a la paciente. • Tengo otras pruebas para confirmar resultados positivos. Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

28.  Bioline VIH ½ 3.0Estándar Diagnostic • Principio: Análisis Inmunocromatográfico • Prueba de 3ra. generación • Interpretación:Visual • Muestras: Suero, plasma y sangre (EDTA) • Volumen de muestra:10µl • Tiempo:20 minutos • Sensibilidad: 100.0% • Especificidad: 99.4% Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

29. Experiencias Performance of a Rapid Immunochromatographic Screening Test for Detection of Antibodies to Human Immunodeficiency Virus Type 1 (HIV-1) and HIV-2: Experience at a Tertiary Care Hospital in South India Theophilus-Sunder Vijayakumar, Shoba David, Kavitha Selvaraj, Thiruppavai Viswanathan, Rajesh Kannangai, and Gopalan Sridharan* Department of Clinical Virology, Christian Medical College, Vellore, Tamil Nadu PIN 632004, India *Corresponding author. Mailing address: Department of Clinical Virology, Christian Medical College, Vellore 632 004, Tamil Nadu, India. Phone: 91-416-2282312. Fax: 91 (416) 2232035. E-mail: g_sridharan/at/yahoo.com. Received March 16, 2005; Revised May 9, 2005; Accepted May 16, 2005. Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

30.  Pruebas de laboratorio validadas en Guatemala Instanscreen Oraquick Determine Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

31.  DETERMINE: Prueba rápidaCaracterísticas: • Principio: Análisis Inmunocromatográfico • Interpretación:Visual • Muestras: Suero, plasma y sangre (EDTA) • Volumen de muestra:50µl • Tiempo:30-35 minutos • Sensibilidad: 99.6% • Especificidad: 99.4% Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

32.  Immunocomb IICaracterísticas: • Principio: Ensayo inmunoenzimático Indirecto. • Interpretación:Visual • Muestras: suero y plasma • Volumen:50µl • Tiempo: 60 minutos • Sensibilidad: 100% • Especificidad: 99.4% • No necesita equipo automatizado Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

33. ORAQUICKCaracterísticas • Principio: Análisis Inmunocromatográfico • Interpretación:Visual • Muestras: Suero, plasma y sangre completa y fluído oral. • Tiempo:30-35 minutos • Sensibilidad: 99.6% • Especificidad: 99.4% Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

34.  PROCESAMIENTO DE LAS MUESTRAS Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

35.  Recomendaciones de bioseguridad • Uso de bata • Uso de guantes • Orden en la mesa de trabajo • Recipiente especial para transporte de muestras de sangre. NO TRANSPORTAR MUESTRAS EN GUANTES. • Descarte adecuado de desechos (agujas, jeringas y tubos) Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

36.  Diagnostico de casos de VIH positivos • 2 pruebas de tamizaje: diferente principio inmunológico con resultados iguales. • Prueba Rápida + ELISA • ELISA + Prueba Rápida • ELISA + ELISA • Prueba Rápida + Prueba Rápida Recomendación en: Protocolo Nacional para el Tratamiento Antirretroviral del VIH-SIDA. Capítulo 3, página 38. Comisión de acceso a tratamiento, Programa Nacional de SIDA, Ministerio de Salud Pública y Asistencia Social, Guatemala, Junio 2002. Recomendación: OMS Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

37.  Consideraciones Especiales del Diagnóstico de VIH • Niños < de 18 meses hijos de madre VIH positiva: • Todas las pruebas de anticuerpos dan resultados Positivos. • Un resultado positivo con pruebas de anticuerpos no siempre indica infección por VIH. • El diagnostico se establece con métodos directos de diagnóstico y sospecha clínica. • Se debe dar seguimiento con pruebas de anticuerpos hasta los 18 meses Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

38.  Consideraciones Especiales del Diagnóstico de VIH • Primoinfección por VIH • Las pruebas que detectan anticuerpos darán resultados negativo. • Un resultado negativo con pruebas de anticuerpos no descarta infección por VIH • El diagnostico se establece con métodos directos de diagnóstico. • La especificidad de los métodos directos de diagnóstico dependerá del tiempo de inicio de la infección. Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

39.  Carga Viral y apoyo al diagnostico de VIH • La sensibilidad es alta • La especificidad: • Primoinfección 97(%2-4 sem) • Neonato: < 97%: (4 sem) • Tomar en consideración cargas virales > 30,000 • Y no se deben tomar decisiones medicas con una sola determinación de CV Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

40. ALGORITMO PARA DIAGNOSTICO DE VIH  Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

41.  Tamizaje de VIH en la Emergencia de la Maternidad Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

42. ¿Dudas? Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

43.  Hospital Roosevelt Ciudad de Guatemala 2008

44.  Muchas Graciaspor su atención. Julio 2008