혈소판 약물반응 검사

1. 혈소판 약물반응 검사 2006-7-19 김 한규

2. 혈소판 약물 반응검사(아스피린, P2Y12) [코드명 : B60Q36, B60Q37, B60Q38] 1. 측정방법 검사원리 : Turbidimetry 1) Aspirin Assay citrated whole blood 2ml 검체를 Cartridge와 결합시켜 cartridge내 Detection chamber내에서 agonist인 Arachidonic acid와 human fibrinogen이 코팅되어 있는 microbeads들과 응집을 일으켜서 빛의 투과성을 측정하여 그 결과를 ARU(Aspirin Reaction Unit) 값으로 출력한다. 검사 대상 환자는 아스피린을 복용하고 있는 환자(아스피린 내성측정) 와 복용하지 않은사람( bleeding tendency 예측)이 될 수 있다.

3. 2) P2Y12 Assay citrated whole blood 2ml 검체를 Cartridge와 결합시켜 cartridge내 first Detection chamber내에서는 agonist인 ADP, prostaglandin E1(PDE1)와human fibrinogen이 코팅되어 있는 microbeads들과 응집을 일으켜서 빛의 투과성을 측정하여 그 결과를 PRU(Plavix Reaction Unit) 값으로 출력한다. Second Detection chamber내에서는 Agonist인 iso-TRAP (Thrombin Receptor Activating Peptide)와 human fibrinogen이 코팅되어 있는 microbeads들과 응집을 일으켜서 빛의 투과성을 측정하여 그 결과를 PRU (Plavix Reaction Unit) 값으로 출력한다. 검사환자는 ADP P2Y12 receptor에 작용하는 Antiplatelet Drug(clopidogrel, ticlopidine 등)을 복용하는 환자를 대상으로 하고 있다.

4. VerifyNow™ Aspirin mimics optical aggregometry Mixing Chamber Increase in light transmittance with agglutination of beads. Rate and extent of change measured. Reported as ARU Light Source Agonist + Platelets in whole blood maximally activated by agonist in mixing chamber Agglutinated beads aggregate in clusters Fibrinogen-coated beads

5. No Light Light Uninhibited Specimen Inhibited Specimen How VerifyNow™ assay works Light source

6. 2. 채혈 및 주의사항 1) 전용채혈튜브(sodium citrate 3.2% 2ml )를 준비하여 처음 채혈된 검체는 폐기한다. 2) 두 번째부터 채혈된 검체로 검사가 가능함. 검사 Order 내용에 맞게 채혈한다. - 혈소판약물반응검사(Aspirin & P2Y12) :검체수 2 - 혈소판약물반응검사(Aspirin) :검체수 1 - 혈소판약물반응검사(P2Y12) :검체수 1 *채혈기준선까지 채혈되도록 해주십시오 3) 채혈한 뒤 항응고제인 sodium citrate가 혈액과 잘 희석되도록 5회 정도 부드럽게 흔들어줍니다. 4) 신속한 검사를 위하여 검체를 검사실로 보냅니다.(채혈 후 검사가능시간: 30분~4시간) 5) 동일한 환자의 검체와 재 채혈 검체라 하더라도 채혈시간을 기록하여 바코드 라벨을 부착해 주십시오.

7. 6) 검체거절기준 ㄱ) 응고된 검체 ㄴ) Hct. 수치가 낮은 검체(Aspirin 29% 미만, P2Y12 33% 미만) - 선행된 CBC Data가 없으면 CBC검사 요구됨. ㄷ) 항응고제의 비율이 부정확한 검체 ㄹ) 채혈 후 4시간 이상 경과한 검체 ㅁ) GP IIb/IIIa 저해제(ReoproⓇ) : 복용환자의 검체(투여중단 후 14일 이후 검사처방) ㅂ) 냉장 또는 냉동된 검체

8. 3. 사용시약 1) Aspirin Assay device(Cartridge(aspirin)) : agonist - Arachidonic acid 2) P2Y12 Assay device (Cartridge(P2Y12)): agonist - ADP/PGE1, iso-TRAP 3) 보관온도 : 2℃~25℃ 4. Calibration 방법 카트리지 제조 시에 제조공장에서 직접 Calibration을 시행하며 그 Data는 생산되는 Lot.별로 Cartridge 포장겉면에 바코드 형태로 기록된다. Analyzer에서 새로운 Lot.가 검사를 위해 장착될 때 바코드를 Reading 시키라는 메시지를 띄운다. 이때 포장겉면의 바코드를 Reading 창에 인식시키면 Calibration절차는 완료된다.

9. 5. 정도관리 EQC(Electronic Quality Control) 매일 EQC 수행을 권장하나, 해당기관의 선택에 따라 매 6시간, 8시간, 12시간, 매일,매주, 매월 단위로 EQC를 수행할 수 있다. 편의를 위해, EQC 카트리지는 제품본체의 우측면의 보관소에 보관되어 있다. EQC는 재사용이 가능하며, 제품의 광학적 성능, 시약의 혼합, 기체역학을 조사하는데사용한다. EQC 결과는 약 3분후 표시된다.

10. 6. 장비사용방법 1) 전원스위치를 “on"으로 켠다. 2) 아이콘을 누른 후 우측 EQC 보관소에서 EQC device를 꺼내 EQC를수행 한 다. (약 3분소요) (EQC는 스위치 “on"후 1일1회 시행) 3) 검사 아이콘을 누른다. 환자ID입력 화면에서 환자ID를 입력한다. 4) 환자 ID를 입력한 후에 다음 키를 누른 후Assay device (카트리지)삽입 화면이 나타나면 카트리지 포장을 개봉한다. (Humidity indicator의 색을 확인하여 양면이 동일색상일 경우 다른 카트 리지 사용) 5) 개봉한 카트리지를 바늘 덮개를 제거하고 본체에 삽입한다. (탈칵 소리가 날 때까지) 6) (신규 로트 제품일 경우, 바코드 스캔 화면이 나타나면 바코드 입력창에 정렬 스캔한다.) - 두 번째 카트리지부터는 생략됨. 7) 샘플투입 화면이 나타나면 샘플 튜브를 4-5회 부드럽게 흔들어 준다. 8) 흔들어준 샘플을 기 삽입된 카트리지에 고무마개가 아래쪽으로 향하도록 삽입한다. ( 튜브가 완전히 삽입하면 삐 하는 소리가 두 번 울린다) 9) 카운트다운 화면이 나타나며 5 분정도 검사 시간이 소요된다.

11. 10) 환자 검사 결과가 나타나면 기록하거나 출력한다. 11) 검사가 끝나면 카트리지를 쭉 뺀다. (카트리지로터 샘플 튜브를 별도로 제거하지말아야 한다) 12) 다음검사를 위해 아이콘을 누른다. 13).검사 아이콘을 눌러 다른 환자 샘플 검사를 한다. 7. 장비점검 1) 1일 : EQC 시행 2) 한달 : Cleaning - Cartridge 삽입구에 먼지 등을 제거하기 위해 제공하는 CleaningDevice를 활용하여 Cleaning 한다. 3) 기타 : Analyzer 환풍구 확인(먼지과다로 막힐 수 있음)

12. One System for Monitoring Platelet Function VerifyNow™ Aspirin VerifyNow™ IIb/IIIa VerifyNow™ P2Y12 The only rapid platelet function system correlated to clinical outcome

13. Mixing Chambers/ Detection Well

14. 8. 참고 치 : 아스피린 검사결과 해석 >= 500 ARU < 500 ARU 아스피린 복용하지 않는 환자 정상 혈소판 응집능 저하 아스피린 복용환자 아스피린 저항증 정상아스피린 반응군 P2Y12(플라빅스) 검사결과 해석 I . PRU : < 1 ~ 386 PRU II. % inhibition : 1) 40% ~ 60% -> 적절한 약물 효과 (Optimal response) 2) <20% -> 부적절한 약물효과 (Suboptimal response)

15. If a patient result is <550 ARU, then platelet dysfunction has been detected, indicating that Aspirin IS working. If a patient result is >550 ARU, then no platelet dysfunction has been detected, indicating that the anti-platelet effect may not have been achieved or Aspirin IS NOT working Results are based on the extent of platelet aggregation measured and are reported in Aspirin Reaction Units (ARU)

16. TRAP-mediated platelet activation = Baseline PRU Clopidogrel-induced % platelet inhibition Baseline PRU – Post-PRU Baseline PRU = X100

17. 9. 임상적 의의 : 혈전증 예방 및 치료에 처방되는 아스피린과 ticlopidine, clopidogre 등의 혈소판 억제제의 효과를 정량적으로 측정하는 혈소판 약물반응검 사입니다. 그 구체적인 적응증으로서, 혈소판 약물반응 검사(아스피린) 아스피린 복용전 혈소판 기능 진단 아스피린 복용 환자에서 아스피린 저항성 진단 수술 및 침습적 시술 시 혈소판 기능 및 지혈기능평가 - 혈소판 약물반응 검사(플라빅스) 플라빅스 복용하는 환자에서 약제 효과 측정 수술 및 침습적 시술 시 혈소판 기능 및 지혈 기능 평가

18. 10. 주의사항 1) 검사 전 검사처방 내용을 정확히 파악하여 불필요한 Cartridge 소모가 없도 록 한다. 2) 검체거절 기준에 따라 재 채혈요청 등 적절한 조치를 취한다. 3) Cartridge는 검사 전에 미리 포장지를 제거하여 방치하지 말아야한다. 4) 부득이하게 처방된 Assay와 다른 Cartridge를 개봉하였을 경우 즉시 내용물 과 함께밀봉하여 보관한 뒤 다음 검사에 활용한다. 5) Troubleshooting시와 검사완료 후 검체를 따로 Cartridge에서 분리하지 말 고Cartridge 손잡이를 잡고 함께 장비에서 제거 폐기 또는 보관한다. 6) 어떠한 이유에서든 장비외관을 손상시키거나 수리를 목적으로 뜯어보지 않 는다. 7) 장비를 직사광선이 드는 곳이나 너무 밝은 조명아래 두지 않는다. 8) 장비가 ON 상태일 때Cartridge 투입구를 막거나 덮어놓지 말아야한다.

19. Thanks for your attention!