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Méthodes de dosage d’un antigène par ELISA. ( E nzyme- l inked i mmuno s orbent a ssay). Principe général Dosage d’un antigène par le test ELISA en sandwich (sans compétition). Jeffrey M. Vinocur. Fixation de l’anticorps de capture (+ lavage) Ajout de l’échantillon à tester (+ lavage)
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Méthodes de dosage d’un antigène par ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay)
Principe généralDosage d’un antigène par le test ELISA en sandwich(sans compétition) Jeffrey M. Vinocur Fixation de l’anticorps de capture (+ lavage) Ajout de l’échantillon à tester (+ lavage) Ajout d’un anticorps de détection (+ lavage) Ajout de l’anticorps secondaire lié à l’enzyme (+ lavage) Ajout du substrat de l’enzyme => mesure du signal et report sur la courbe d’étalonnage => dosage
Principe généralDosage grâce au test ELISA par compétition Source : BMedia
Applications • Dosage de protéines en recherche (nécessité de contrôles) • Dosage d’allergènes alimentaires • Dépistage de nombreuses pathologies en particulier du VIH • Exemples d’enzymes utilisées : peroxydase, béta-galactosidase plaque de microtitrage à 96 puits
Avantages • Test simple, rapide, peu coûteux • Détection spécifique • Technique sensible • Pas besoin d’appareil spécialisé pour détecter le signal
Inconvénients • Dépendante des conditions du milieu • Limité par la disponibilité en anticorps spécifique • Risque de faux positifs • Limite de détection moins bonne qu’en RIA