Outros Sistemas de Importância Clínica

1. Outros Sistemas de Importância Clínica SistemasKell, Duffy, Kidd, MNS Lilian Castilho, PhD Simpósio Hemopasso Passo Fundo, 24 a 26/03/2008

3. Sistema Kell • Grande importância na medicina transfusional, depois dos sistemas ABO e Rh, pois os antígenos são potentes imunógenos • Anticorpos do sistema Kell • Reação transfusional hemolítica • Doença hemolítica do recém-nascido (DHRN)

4. Sistema Kell • 1946: Coombs et al • ISBT: 006 • Altamente polimórfico • 31 antígenos • Principais antígenos: K, k, Kpa, Kpb, Jsa, Jsb (antitéticos) • Fenótipo null: K0 • Expressos somente nos eritrócitos

5. Sistema Kell • Localização cromossômica: 7q33 • Gene:KEL • Produto gênico:glicoproteína (732 aa) • Proteína Kell interage na membrana da hemácia com a proteína Kx e tem função enzimática • Polimorfismo associado com mutações de ponto (SNPs)

6. Sistema Kell • Localização dos resíduos de aaresponsáveispelopolimorfismoKell

7. Sistemas Kell e Kx • Forte associação entre as glicoproteínas Kell e Kx na membrana da hemácia • Ausência ou redução da glicoproteína Kell resulta na elevação de Kx • Fenótipo McLeod: perda de Kx  enfraquecimento da expressão dos antígenos Kell

8. Antígenos Kell • Expressão alterada dos antígenos • Fenótipo McLeod :Kx Kell • Fenótipo Kmod: Kell Kx • Fenótipo Kp(a+b-)

9. Fenótipo Knull ou K0 • Gene Ko alelo silencioso no locusKell • Fenótipo Kellnull KoKo Kx em abundância • Hemácias Ko tem sobrevida normal • Indivíduos Koalomunizados anti-Ku : RTH e DHRN • Fenótipo raro: porém com maior frequência Finlândia e Japão

10. Sistema Kell • Antígenos Kell são resistentes ao tratamento pelas enzimas mas são sensíveis ao tratamento com DTT

11. Sistema Kell • Alo-anticorpos • anti-K • IgG, raramente IgM • reativos a 37oC e AGH • clinicamente significantes • Auto-anticorpos • anti-Ku

12. Sistema Kell • DHPN: anti-K • título de anti-K e níveis de bilirrubina no líquido amniótico não se correlacionam com a severidade da doença • genotipagem do feto tem um valor clínico importante

13. Sistema Kell FenotipagemGenotipagem

15. Sistema Duffy • 1950: Cutbush et al • ISBT: 008 • 6 antígenos: Fya, Fyb, Fy3, Fy4, Fy5, Fy6 • Fenótipo null: Fy(a-b-) em Caucasianos • Expressão alterada no fenótipo Fyx • Expressos nas hemácias e vários tecidos

16. Sistema Duffy • Localização cromossômica: 1q22-q23 • Gene: FY • Produto gênico: glicoproteína (336/338 aa) • Proteína Duffy: receptor P. vivax e P.knowlesi e quimioquinas (IL-8, MGSA, RANTES, MCP-1)

17. Definido por três alelos comuns: FY*A e FY*B codificam 2 antígenos antitéticos, Fya e Fyb FY*O é o principal alelo em Africanos e ocorre raramente em outras populações Estes alelos dão origem a 4 fenótipos: Fy(a+b–), Fy(a–b+), Fy(a+b+) and Fy(a–b–) Sistema Duffy

18. Fy(a+b–), Fy(a–b+), Fy(a+b+) and Fy(a–b–) Fenotipagem Duffy

19. Fenótipo Fy(a-b-) • Predominante em Africanos • Ocorre devido a uma mutação de ponto no gen promotor GATA-1 • Resistentes a invasão pelos parasitas da malária • Não se ligam a quimiocinas • Genotipados como FY*B/FY*B

20. Fenótipo Fy(a-b-) em Africanos Mutação no sítio de ligação para o fator de transcrição eritróide específico GATA-1 afetando a expressão do antígeno nas hemácias : -33T>C na sequência TTATCT impede a transcrição do gene FY 1572 (nt) GATA-1 box 3’ Ex1 Exon 2 -33 intron 125 A 1 ttacct Ex1 Ex1 Exon 2 mRNA 5’ 3’ AAAn 336 1 COOH NH2 Gp-FY * Em descendentes de Africanos Fy(a-b-), o gene FY codifica FY*B

21. Fenótipo Fy(a-b-) • Por que os indíviduos Fy(a-b-) desenvolvem anti-Fya e não desenvolvem anti-Fyb ? • a maioria tem um alelo FY*B com um GATA box não funcional • Fyb é expresso em outros tecidos

22. Genotipagem Duffy • Genotipagem dos alelos FY*A e FY*B e do gen promotor GATA-1 funcional e não funcional • importante para selecionar os pacientes fenotipicamente Fy(b-) que podem ser transfundidos com hemácias Fy(b+)

23. 3 25 Pacientes Fy(b-) transfundidos com hemácias Fy(b+) Pacientes Unidades Fy(b+) transfundidas Fy(a+b-) FYA/FYB-33 6 a 32 6.5 Fy(a–b–) 1 a 57 FYB-33/FYB-33 Estes pacientes não desenvolveram anti-Fyb ou anti-Fy3

24. Fenótipo Fyx Fyx NH 2 59 Membrana eritrocitária COOH Ala100Thr Arg89Cys 336 Substituição de aminoacido levando a redução dos níveis da proteína na membrana eritrocitária (10%)

25. Antígenos polimórficos:Fya, Fyb (antitéticos) alta prevalência: Fy3, Fy4, Fy5, Fy6 Anticorpos anti- Fya, anti- Fyb, anti-Fy3 IgG/Clinicamente significantes Sistema Duffy

26. Sistema Duffy • Antígenos Fya, Fyb e Fy6 são sensíveis ao tratamento pelas enzimas ficina/papaína mas são resistentes ao tratamento por DTT e cloroquina

27. Sistema Duffy • alo-anticorpos • anti- Fya • IgG, raramente IgM • reativos a 37oC e AGH • clinicamente significantes • auto-anticorpos • mimetizam alo-anticorpos

29. Sistema Kidd • 1951: Allen et al • ISBT: 009 • 3 antígenos: Jka, Jkb, Jk3 • fenótipo null: Jk(a-b-) • expressos nos eritrócitos, neutrófilos e rim

30. Sistema Kidd • localização cromossômica: 18q12 • gene: HUT11 • produto gênico: proteína (391 aa) com função de transporte de uréia Jka/Jkb Asp/Asn *280 Camada bilipídica-membrana eritrocitária

31. Fenótipo null • Fenótipo Jk(a-b-) • Homozigose de um raro gen recessivo ou presença de um gen dominante inibidor In(Jk) • Ausência dos antígenos Kidd • Resistente a lise pela uréia 2M • Desenvolvem anti-Jk3

32. Antígenos Kidd • antígenos Kidd são resistentes ao tratamento por enzimas, DTT e cloroquina

33. Fenotipagem Kidd • Fenotipar sempre os antígenos Jka e Jkb utilizando • anti-soro comercial (monoclonal) e técnica sensível

34. Anticorpos Kidd • Alo-anticorpos • anti-Jka e anti- Jkb • IgG, alguns IgM • reativos a 37oC, AGH, enzimas • clinicamente significantes • Auto-anticorpos • podem ocorrer (anti-Jka mais frequente) associado a AHAI severa

35. Anticorpos Kidd • Difíceis de detectar: • Anticorpos potentes são exceção; maioria é fracamente reativo • Geralmente encontrado no soro com outros aloanticorpos • Necessário métodos sensíveis(ex., AGH com hemácias tratadas com enzimas, gel teste ou polibreno) • Podem não reagir com hemácias Jk(a+b+): efeito de dose • podem “desaparecer” in vivo e in vitro

36. Impacto clínico dos anticorpos Jk: transfusão • Fixam complemento • Causam reações transfusionais hemolíticas imediatas severas e fatais • Associados com reações transfusionais hemolíticas tardias (RTHT): • severas: oliguria, falha renal • Anti-Jka mais comum que anti-Jkb • Causam no mínimo 1/3 das RTHT

37. Impacto clínico dos anticorpos Jk: DHPN • Antígenos Jka, Jkb e Jk3 são bem desenvolvidos nas hemácias de RNs • Raramente causam DHPN: geralmente só fototerapia • Raros casos de DHPN severa e fatal • 1 caso fatal case publicado para anti-Jka • 2 casos fatais publicados para anti-Jkb

38. PAI em 21 de Abril. Nenhum anticorpo detectado (Enz/AGH!) PAI em 29 de Abril. (Observe plasma, pós RTH devido a anti-Jka Transfusão Incompatível anti-Jka 8 dias pós-transfusão

39. Hemólise devido a anti-Jkb Todos os pacientes transfundidos deveriam receber sangue Jk fenótipo compatível?

40. Genotipagem Kidd Recomendada em pacientes politransfundidos, portadores de AHAI e na presença de resultados de fenotipagem duvidosos

42. Sistema MNS • 1927: Landsteiner e Levine • ISBT: 002 • Altamente polimórfico • 46 antígenos: Jka, Jkb, Jk3 • Fenótipos null:S-s-, En(a-), MkMk • Expressos nos eritrócitos, endotélio e epitélio renal

43. Sistema MNS • Localização cromossômica: 4q28.2-q31.1 • Gene:GYPA, GYPB • produto gênico:glicoforina A (GPA) e glicoforina B (GPB) • Antígenos são carreados na GPA, GPB e GPA/GPB híbridas • Polimorfismo associado com mutações de ponto (SNPs) e presença de genes híbridos

44. Antígenos do Sistema MNS Incidência n Antígenos Variavéis4 M N S s Alta 9 Ena ENKT ENEP ENEH ENAV U ‘N’ Baixa 33 He Mia Mc Vw Mur Mg Vr Me Mta Sta Ria Cla Nya Hut Hil Mv Far sD Mit Dantu Hop Nob Or DANE TSEN MINY MUT SAT ERIK Osa HAG MARS

45. GPA e GPB 1 M/N 1 ’N’ 29 S/s camada bilipídica 72 131

46. Variantes MNS

47. Fenótipos null • S-s-: ausência ou alteração da GPB • En(a-): ausência ou alteração da GPA • MkMk: ausência da GPA e GPB

48. Fenótipo S-s- • ~1% dos afro-americanos • 50% apresentam deleção do GYPB • Fenótipo S-s-U- • 50% apresentam mutações no exon 5 do GYPB • Fenótipo S-s-U+var • pode desenvolver anti-U (IgG, clinicamente significante, resistente ao tratamento enzimático

49. Antígenos MNS • antígenos MNS são geralmente sensíveis ao tratamento por ficina/papaína e resistentes ao DTT e cloroquina

50. Fenotipagem MNS • Fenotipagem dos antígenos antitéticos