Praktiká 5ZS enterobacteriaceae

1. Praktiká 5ZS enterobacteriaceae • Enterobacteriaceae – charakteristika, štruktúra, typy ochorení, odber materiálu – E. coli, Proteus sp., Klebsiella sp • Mikroskopický dôkaz – E. coli podľa Grama, - dôkaz púzdra K. pneumoniae podľa Burriho • Kultivačný dôkaz – E. coli a K.pneumoniae na krvnom agare a Endovej pôde, - plazivý rast P. mirabilis – Raussov fenomén • Biochemický dôkaz - Enterotesty, - vyhodnotenie Enterotestu E. coli, Kl. Pneumoniae a P. vulgaris., - opakovanie biochemická pôda Hajn • Sérologický dôkaz – dôkaz antigénnej štruktúry neznámeho kmeňa – použitie polyvalentných a monovlaentných sér – sklíčková aglutinácia

2. G- aeróbne paličky • 1) Fakultatívne anaeróbne fermentujúce paličky:Enterobacteriaceae - E. coli, Salmonella, Schigella, Enterobacter, Citrobacter, Serratia, Klebsiella, Proteus, Morganella, Providencia Vibrionaceae - Vibrio, Aeromonas, Plesiomonas Campylobacter, Helicobacter • Najrozsiahlejšia, najheterogénnejši skupina medicínsky dôležitých baktérií • 27 rodov,102 druhov (95% medicínsky významných patrí do 25 druhov) - odlíšenie na základe DNA homológie, biochemických vlastností, sérologických reakcií, ATB citlivostí • Bežne prítomné v prírode (pôda, voda, rastliny) súčasť normálnej flóry čreva. • Obligátne patogénne(Yersinia pestis), podmienečne patogénne (Klebsiella, E. coli, Proteus) • Prenos zo zvieraťa (Salmonelly), od človeka - nosiča (S. typhi), endogénna infekcia (E.coli)

3. Miesta infekcie • CNS - E. coli • IDC - Klebsiella, Enterobacter, E. coli • Septikémia - E. coli, Klebsiella, Enterobacter • GIT - Salmonella, Shigella, Yersinia, E.coli • IMC - E. coli, Proteus, Providencia, Klebsiella

4. Fyziológia a štruktúra • G- paličky, obvykle pohyblivé (bičíky)- okrem Klebsielly, netvoria spóry, fakultatívne anaeróbne, nenáročné nutričné požiadavky, biochemicky aktívne, kataláza +, oxidáza -, cytochromoxidáza COX - = dif.dg.od ostatných G - paličiek • Skvasovanie laktózy + alebo – (patogénne Salmonella, Shigella, Yersinia, a Proteus neskvasujú) rezistencia na žlčové soli (Salmonella), prítomnosť púzdra (Klebsiella) - dif.dg v rámci Enterobacteriaceaei • 3 skupiny antigénov: • - somatický O antigén - najdôležitejší antigén bb. steny, termostabilný, LPS, zložený z 3 súčastí - O polysachrid, kórový polysacharid a lipid A - s endotoxínovou aktivitou • - púzdrový K antigén - termolabilný, skrížene reagujúci s protilátkami proti iným baktériám. U Salmonella typhi sa nazýva Vi antigén. • - bičíkový H antigén - termolabilný, podlieha antigénnym zmenám

5. Laboratórna diagnostika • rastú dobre na neselektívnych médiách • Selektívne média na odlíšenie patogénnych - laktóza negatívnych kmeňov Salmonella, Shigella • Biochemická identifikácia – Hajnov test, Enterotesty – súbor biochemických testov • Sérodiagnostika – odlíšenie antigénnej štrukktúry – Salmonelly, Shigelly, E.coli • Interpretácia výsledkov – vo vzorke zo stolice – Salmonella, Shigella, Yersinia – patogénne, ostatné enterobacteriaceae – podľa stavu eubiózy, pri premnožení - z materiálov za fyziologických podmienok sterilných : moč – IMC, ascendentná infekcia, krv – najčastejšie etiol. agens, rana, spútum – v dostatnočnom množstve, TT,TS - monokultúra

6. Surface of tube medium – aerobe environment, lactose negative bacteria do not ferment, it is alkaline, red Lower part - in anaerobe environment, enterobacteria ferments glycids – acidic – yellow or black H2S . , nonfermenters do not ferment = red – Ps. aeruginosa 1 negative control 2 Ps.aeruginosa : not fermenting - red 3 Shigella sonnei: H2S - negat.,gas – negat., TSI – alcaline/acidic red/yellow lact.negat 4 Salmonella typhi: H2S – pozit., gas–negat., TSI – alcaline/alcaline red/yellow- black 5 Escherichia coli: H2S – negat.,gas -posit., TSI – acid/acidic yellow/yellow 6 Proteus mirabilis: H2S – posit, gas - negat., TSI – acidic /acidice yellow/yellow-black

7. E. coli • Prítomná v GIT • vyvoláva - endogénne infekcie po zlyhaní imunitných bariér, z fyziologickej flóry- bakteriálnu sepsu ( z fokusu v močových cestách alebo GIT najčastejší G- vyvolávateľ sepsí), IMC ( väčšina ambulantných infekov, z GIT, špecifické sérotypy viažúce sa na epitel), - gastroenteritídy – EPEC, EIEC, ETEC - neonatálnu meningitídu - hemolyticko uremický sy – EHEC – O:157, H:7 • Vytvára komplex početných O-somatických, H- bičíkových a K - púzdrových antigénov.

8. Klebsiella • Opúzdrená – mukózny vzhľad kolónií, zvýšená virulencia, nepohyblivá • Klebsiella pneumoniae – pneumónia u pacientov, ktorí nie sú schopný vykašľávaním vyčistiť aspiráty z ústnej dutiny. Nekkrotické deštrukcie alveolárnych priestorov. Sangvinolentné sútum. Infekcie rán, mäkkých tkanív a močového traktu • K. rhinoscleromatis - skleróm • K. ozaenae – atrofické ochorenie nosovej sliznice

9. Proteus • Pohyblivá G- baktéria, Raussov fenomén • P. mirabilis – infekcie močového traktu, produkujú ureázu ( rozklad urey – močoviny, zmena pH, alkalinizácia, podpora tvorby kamienkov a toxicita pre epitel • Proteus vulgaris,

10. Mikroskopia • E. coli – podľa Grama – G- palička • Klebsiella pneumoniae – podľa Burriho – dôkaz púzdra

11. Burriho metóda na dôkaz púzdier • Na podložnom sklíčku sa urobí suspenzia vyšetrovanej kolónie a destilovanej vody • K suspenzii sa pridá kvapka tušu a urobí sa tenký náter • Preparát sa nechá uschnúť a fixuje sa teplom • Potom sa dofarbí kryštálovou violeťou, veľmi opatrne opláchne vodou, nechá okvapkať a prezerá pod imerziou

12. Púzdra • Extracelulárne štruktúry obaľujúce baktérie, pevne priliehajúce k bb. • Polysacharidové ( len B. antracis – polypeptidové) • Nástroj patogenity – antifagocytárne vlastnosti, bráni vstupu antibiotík, má funkciu adhezínov • Niektoré baktérie sú vo forme opúzdrených aj neopúzdrených kmeňov (hemofilus influenzae)– opúzdrené sú virulentnejšie • Púzdro sa môže v starých kolóniách strácať, alebo ho neopúzdrené kmene môžu získať transdukciou z opúzdrených

13. Kultivácia • E. coli na Krvnom agare –šedavé kolónie bez hemolýzy • E. coli na Endovej pôde – vypuklé kolónie s kovovým rastom • K. pneumoniae na KA – lesklé mukózne ťahavé kolónie • K. pneumoniae na Endovej pôde – ružové kolónie bez lesku • Proteus mirabilis – plazivý rast, Raussov fenomén – koncentriký rast od jedinej kolónie

14. Sklíčková aglutinácia • Na podložnom sklíčku – suspenzia s FR • 1) Suspenzia + kvapka polyvalentných sér • s + poly ABC = aggl+ S+ poly DEF = aggl– • 2) Suspenzia + kvapka monovalentných sér • s + mono A = aggl.+ s + mono B = aggl – s + mono C = aggl.– • Výsledok – testovaný kmeň je typ A

15. Biochemické vlastnosti - Enterotest • E.coli – + + + – – + – – – – – + + + + • K.pneumoniae – + – – + – + + + + + + + + + + • P.vulgaris + – + – + + + – – – – – + – + – • H2S LYS IND ORN URE PHE ESL SCI + čierna modrá červená modrá červená zelená čierna modrá • – bezf. Zelená žltá zelená žltá žltá bezf. žltá • MAL INO ADO CEL SUC SOR TRE MAN + modrá žltá žltá žltá žltá žltá žltá žltá • – žltá zelená zelená zelená zelená zelená zelená zelená

16. Testy na skúmanie biochemických a metabolických aktivít baktérie Mikrometodiky, Automatizácia, Číselné kódy – MikroLaTesty, API, BBL Crystal Súbor biochemických testov usporiadaných za sebou tak, aby umožňovali číselnú identifikáciu podľa pravdepodobnosti. Pri pozitívnom teste sa mu pridelí číslo podľa lokalizácie v triplete. Sčítaním jednotlivých hodnôt sa dosiahne štvorciferná kombinácia, ktorá zodpovedá identifikovanému mikroorganizmu uvedenému v zozname. - - - 0 - + + 6 + - - 1 + + + 7 - + - 2 - - + 4 + - + 5 + + -3

17. MikroLaTest Identifikácia Klebsiella pneumoniae – Enterotest + /- + - - +- + + + + + + + + + + /+