1 / 26

PODSTAWY BIOCHEMII DLA OCHRONY ŚRODOWISKA

PODSTAWY BIOCHEMII DLA OCHRONY ŚRODOWISKA. Nukleotydy i kwasy nukleinowe. 4. N. 5. 3. 2. 6. 1. N. PIRYMIDYNA cytozyna tymina uracyl. zasada. O. reszta kwasu ortofosforowego. 5’. N. O -. P. CH 2. PURYNA adenina guanina. O -. O. N. 6. N. 7. 5. 1. 8. 2. 9. 4.

kipp
Télécharger la présentation

PODSTAWY BIOCHEMII DLA OCHRONY ŚRODOWISKA

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript


  1. PODSTAWY BIOCHEMII DLA OCHRONY ŚRODOWISKA Nukleotydy i kwasy nukleinowe

  2. 4 N 5 3 2 6 1 N PIRYMIDYNA cytozyna tymina uracyl zasada O reszta kwasu ortofosforowego 5’ N O- P CH2 PURYNA adenina guanina O- O N 6 N 7 5 1 8 2 9 4 4’ 3 1’ N N cukier 2’ 3’ HOCH2 OH O HOCH2 OH O H H 2-deoksyryboza ryboza H H H H H H OH OH H OH Nukleotydy

  3. O O O O O O O- P P P CH2 CH2 CH2 5’ N N O- P CH2 O- O- O- monofoforan nukleozydu O- O 5’ CH2OH wiązanie estrowe 4’ 1’ wiązanie N-glikozydowe O 2’ 3’ nukleotyd 4’ 1’ 2’ 3’ difoforan nukleozydu O O O O- O- O P P P O- O- O- trifoforan nukleozydu nukleozyd Nukleotydy

  4. 5’ O 4’ 1’ cukier zasada zasada 2’ 3’ N N 5’ O wiązanie fosfodiestrowe wiązanie fosfodiestrowe 4’ 1’ cukier zasada 2’ 3’ N O 5’ 4’ 1’ cukier 2’ 3’ fosforan fosforan fosforan Fragment łańcucha kwasu nukleinowego koniec 5’ łańcucha OH koniec 3’ łańcucha

  5. Kwasy nukleinowe RNA DNA kwas deoksyrybonukleinowy kwas rybonukleinowy bierze udział w rozkodowywaniu informacji zawartej w DNA koduje informację o budowie i działaniu całego organizmu

  6. O O O- O P P CH2 CH2 monofoforan nukleozydu O- O- O O O- O P P O- O- trifoforan nukleozydu DNA dATP, dGTP, dCTP, dTTP RNA ATP, GTP, CTP, UTP

  7. G C komplementarne parowanie zasad A T Podwójna helisa DNA

  8. 5’ CTTATG 3’ 3’ GAATAC 5’ 5’ GGTACCAATTCAAAG 3’ 3’ CCATGGTTAAGTTTC 5’ 5’ GGTAC 3’ 3’ C 5’ 5’CAATTCAAAGCTTATG 3’ 3’ CATGGTTAAGTTTCGAATAC 5’ 5’ GGTACCAATTCAA 3’ 3’ CCATGGTTAAGTTTCGA 5’ 5’AGCTTATG 3’ 3’ATAC 5’ Enzymy restrykcyjne 5’ GGTACCAATTCAAAGCTTATG 3’ 3’ CCATGGTTAAGTTTCGAATAC 5’ Alu I AGCT TCGA Hind III AAGCTT TTCGAA Kpn I GGTACC CCATGG

  9. 5’ GGTACCAATTCAA 3’ ||||||||||||| 3’ CCATGGTTAAGTTTCGA 5’ 5’ GGTACCAATTCAA 3’ ||||||||||||| 3’ CCATGGTTAAGTTTCGA 5’ 5’AGCTTATG 3’ ||| 3’ATAC 5’ 5’AGCTTATG 3’ ||| 3’ATAC 5’ Hind III AAGCTT TTCGAA Hind III AGCTTATG 3’ | ATAC 5’ AGCTTATG 3’ | ATAC 5’ 5’ GGTACCAATTCAA |||||||||||||||||||| 3’ CCATGGTTAAGTTTCGA 5’ GGTACCAATTCAA |||||||||||||||||||| 3’ CCATGGTTAAGTTTCGA ligaza AGCTTATG 3’ | ATAC 5’ 5’ GGTACCAATTCAA |||||||||||||||||||| 3’ CCATGGTTAAGTTTCGA

  10. Klonowanie DNA DNA zawierający wstawkę, którą chcemy przeklonować trawienie enzymem restrykcyjnym wektor wstawka trawienie enzymem restrykcyjnym ligacja wektora ze wstawką plazmid ze wstawką gotowy do wprowadzenia do bakterii

  11. Hybrydyzacja jednoniciowa wyznakowana sonda komplementarna do cząsteczki A mieszanina jednoniciowych cząsteczek DNA hybrydyzacja w warunkach łagodnych hybrydyzacja w warunkach ostrych cząsteczki A, C i E tworzą stabilne dwuniciowe cząsteczki tylko cząsteczka A tworzy stabilną dwuniciową cząsteczkę

  12. Hybrydyzacja denaturacja DNA w celu uzyskania jednoniciowych cząsteczek inkubacja błony z jednoniciową wyznakowaną radioaktywnie sondą DNA

  13. dwuniciowy DNA denaturacja GCATATGTCAGTCCAG 5’ 3’ 3’ 5’ jednoniciowy DNA (matryca do sekwencjonowania) GCAT GCATATGTCAGTCCAG 3’ 5’ 3’ 3’ 5’ 5’ 3’ CGTATACAGTCAGGTC CGTATACAGTCAGGTC CGTATACAGTCAGGTC 5’ GCAT 3’ 5’ przyłączenie znakowanego startera Sekwencjonowanie DNA

  14. + dATP, dTTP, dCTP, dGTP ddATP ddTTP ddGTP ddCTP polimeraza DNA polimeraza DNA polimeraza DNA polimeraza DNA GCAT ATGTC GCAT A GCAT ATG GCAT AT GCAT 3’ 5’ 3’ GCAT ATGTCAGTC GCAT ATGTCA GCAT ATGTCAG GCAT ATGT CGTATACAGTCAGGTC 5’ GCAT ATGTCAGTCC GCAT ATGTCAGTCCA GCAT ATGTCAGTCCG GCAT ATGTCAGT elektroforeza w żelu poliakrylamidowym Sekwencjonowanie DNA

  15. ddATP ddTTP ddCTP ddGTP 3’ G A C C T G A C T G T A 5’ Sekwencjonowanie DNA A T C G

  16. sekwencja docelowa dwuniciowa matryca DNA bufor polimeraza Taq starter1 dNTP starter2 Reakcja PCR mieszanina reakcyjna

  17. Cykl syntezy DNA w reakcji PCR etap 1 - denaturacja matrycy etap 2 - przyłączenie starterów etap 3 - wydłużanie starterów

  18. CYKL 1 denaturacja 94C jednoniciowa matryca DNA

  19. starter 1 starter 2 CYKL 1 przyłączenie startera do matrycy 40-65C

  20. CYKL 1 wydłużanie startera 72C powstają cząsteczki dłuższe od sekwencji docelowej starter 1 starter 2

  21. CYKL 2 denaturacja matrycy 94C matryca DNA, który powstał w cyklu 1

  22. CYKL 2 przyłączenie startera do matrycy 40-65C

  23. CYKL 2 wydłużanie starterów 72C powstają cząsteczki dłuższe od sekwencji docelowej powstają cząsteczki o długości sekwencji docelowej

  24. Profil termiczny reakcji PCR cykl podstawowy cykle dodatkowe

  25. 0,35 kb B2 B1 0,6 kb A2 A1 Część praktyczna mieszanina A: startery A1 i A2 mieszanina B: startery B1 i B2 plazmid pUC18/cDNAPPRas2 ze wstawką 0,8 kp

  26. A B 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 - wzorce wielkości 2, 3, 4 - produkty reakcji A, w której jako matrycy użyto lizatu bakterii) 5 - kontrola pozytywna, czyli produkty reakcji A, w której jako matrycy użyto czystego plazmidu 6 - kontrola negatywna, czyli produkty reakcji A, do której nie dodano żadnej matrycy 7 - produkty reakcji B, w której jako matrycy użyto lizatu bakterii) 8 - kontrola pozytywna, czyli produkty reakcji B, w której jako matrycy użyto czystego plazmidu 9 - kontrola negatywna, czyli produkty reakcji B, do której nie dodano żadnej matrycy 10 - wzorce wielkości 1,35 kb 1,08 kb 0,87 kb 0,6 kb 0,6 kb 0,35 kb 0,31kb 0,28 kb 0,23 kb 0,19 kb

More Related