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Spettroscopie biologiche

Spettroscopie biologiche. Tecniche di assorbimento IR UV-Vis Dicroismo circolare Assorbimento atomico Tecniche di emissione Fluorescenza Emissione atomica Tecniche di diffusione Light scattering Raman Resonance raman. Spettroscopia vibrazionale (IR). IR transparent Salt Plates.

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Spettroscopie biologiche

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Presentation Transcript

  1. Spettroscopie biologiche Tecniche di assorbimento IR UV-Vis Dicroismo circolare Assorbimento atomico Tecniche di emissione Fluorescenza Emissione atomica Tecniche di diffusione Light scattering Raman Resonance raman

  2. Spettroscopia vibrazionale (IR)

  3. IR transparent Salt Plates

  4. Light Path (shown by red line)

  5. Spettroscopia UV-Vis E s p* hn pp* np* C=C (p-p*) 62 000 cm-1 160 nm H2O (n-p*) 60 000 cm-1 167 nm C=O (n-p*) 34 000 cm-1 295 nm n p s Orbitali di Frontiera HOMO: Highest Occupied Molecular Orbital LUMO: Lowest Unoccupied Molecular Orbital

  6. Spettro di assorbimento della clorofilla: Sono visibili due transizioni principali a 670 nm (rosso) e 430 nm (blu).

  7. ecc I0(n) l I(n) I0(n) C =concentrazione fond Legge di Lambert-Beer:

  8. Cromofori nelle proteine Il legame peptidico (210 nm) Centrato a 280 nm Ponte disolfuro (250 nm)

  9. Dicroismo circolare (CD)

  10. Cromofori in ambienti asimmetrici assorbono in modo diverso radiazioni polarizzate circolarmente in senso opposto

  11. Ellitticità in relazione alla legge di Lambert-Beer A = Al - Ar = llc - rlc =  lc [] = 3298 ∆ • Legame peptidico (180 - 250 nm) • Residui aromatici (250 - 350 nm)

  12. Curve di denaturazione termica di proteine

  13. Fluorescenza

  14. Campione Ioλ1 Sorgente Monocromatori Luce emessa, λ2 Detector Spettrofotofluorimetro

  15. Spettri di eccitazione e spettri di emissione

  16. Typical result: Nuclease Folded protein Unfolded protein

  17. FRET

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