IVAN Å OÅ A, dr. med.

1. SVEUČILIŠTE U RIJECI MEDICINSKI FAKULTET ZAVOD ZA SUDSKU MEDICINU I KRIMINALISTIKU ODNOS EKSPRESIJE KOŠTANOG MORFOGENETSKOG PROTEINA-9 I PREOBRAŽAVAJUĆEG ČINITELJA RASTA-β KOD RAZLIČITO IZRAŽENIH REGENERATIVNIH PROCESA U LJUDSKOJ JETRI IVAN ŠOŠA, dr. med.

2. Otkriće koštanih morfogenetskih proteina Marshall R. Urist (1965): Bone: formation by autoinduction. Science 159, 893-899. Ugradnjomdemineraliziranogkoštanogmatriksa u potkožnotkivoili u mišićizazvano je stvaranjekosti. Demineraliziranikoštanimatrikssadržiosteoinduktivnetvari. Slijedmorfološkihpromjenakojedovode do stvaranjanovekostisličan je procesimatijekom embrionalnograzvojairastakosti.

3. BMPs i TGF-nadobitelj Chen D i sur. 2004

4. mRNA za BMP-9 je prvi puta izolirana iz jetre miša (Celeste AJ i sur., 1994) • Potiče proliferaciju stanica ljudskog hepatoma i veže se na mišje hepatocite (Song JJ i sur., 1995). Koštani morfogenetski protein -9 Caperuto LC i sur., 2008 • Ima važno mjesto u angiogenezi, hondrogenezi, osteogenezi, hepatogenezi, kolinergijskom usmjeravanju neurona ventralnog telencefalona tijekom embrionalnog razvoja. Utvrđen je i njegov hipoglikemijski učinak te je bio predložen za inzulinu sličnu tvar koju izlučuje jetra ( eng. Hepatic Insulin Sensitizing Substance, HISS).

5. BMP-receptori

6. BMP-9 je ligand za ALK receptor

7. Stereostruktura BMP-9 molekule • Konfiguracija molekule poput leptira • Sadržava AK lizin (Lys60) Brown MA i sur., 2005.

8. Kvantitativna RT-PCR analiza ekspresije BMP9 mRNA u 9 ljudskih tkiva Bidart i sur. 2012

9. Ekspresija BMP-9 mRNA u različitim staničnim populacijama unutar jetre Bidart i sur. 2012

10. Jetra regulira metabolizam glukoze • Učinak sličan inzulinu na metabolizam glukoze i masnih kiselina Chen C i sur., 2003.

11. Zonalna građa jetrenog režnjića Gebhard RL i sur. 1992

12. Regeneracija jetre (Michalopoulos GK., 1997)

13. Hipoteza • Pretpostavka je da je BMP-9 različito izražen u hepatocitima različitih zona jetrenog režnjića te da se to mijenja sukladno oštećenju jetrenog parenhima. • Sukladno dosadašnjim rezultatima koji ukazuju da BMP-9 sintetiziraju hepatociti te da ovaj morfogen potiče njihovu proliferaciju, moguće je da BMP-9 ima regenerativnu ulogu u jetri. • Uzimajući u obzir činjenicu da regenerativne promjene u jetri započinju periportalno, zaočekivati je jaču ekspresiju BMP-9 u regenerativnim hepatocitima cirozom zahvaćene jetre u odnosu na zdravu jetru čovjeka.

14. Utvrditi izraženost i lokalizaciju BMP-9 i TGF-β u tkivu zdrave i različitim stupnjem cirozom zahvaćene jetre u čovjeka (početna ciroza i nodularna ciroza). Istražiti postoji li različita izraženost BMP-9 i TGF-βu hepatocitima jetrenog režnjića prema zobaknoj podijeli jetrenog režnjića. Istražiti da li se izraženost BMP-9 i TGF-β u hepatocitima mijenja sukladno dijelu jetrenog režnjića, u zdravom tkivu i tkivu oštećenom različitim stadijima razvoja ciroze jetre. Analizirati stupanj oštećenosti uzorka tkiva humane jetre mjerenjem aktivnosti enzima matriks-metaloproteinaza (MMP-2 i MMP-9). Kvantificirati razinu izraženosti proteina BMP-9 i TGF-β u tkivu zdrave jetre i u tkivu jetre koja je zahvaćena određenim stadijem ciroze. Analizirati međusobni odnos razine izraženosti proteina BMP-9 i TGF-β u različito oštećenom jetrenom tkivu, gdje nalaz obrnuto razmjernog odnosa ide u prilog regenerativne uloge BMP-9 u humanoj jetri. Ciljevi istraživanja

15. Ispitanici • Ispitivanu skupinu čine uzorci jetrepočetne i nodularne ciroze, dobiveni iz arhivskog materijala Zavoda za Sudsku medicinu i kriminalistiku Medicinskog fakulteta u Rijeci (N=20). Uzorci tkiva jetre dobiveni su tijekom postupka sudskomedicinske obdukcije od oba spola, u rasponu od 25 do 50 godina starosti. • Kontrolnu skupinu čine uzorci zdrave jetre na kojima nisu dokazane gore navedene promjene (N=20). Uzorci su dobiveni iz arhiva Zavoda za Sudsku medicinu i kriminalistiku Medicinskog fakulteta u Rijeci. • Kriteriji za neuključivanje obuhvaćaju: kronične, zarazne bolesti jetre, autoimune bolesti jetre ili sustavne autoimune bolesti, hepatocelularni karcinom, karcinom žučnih kanalića, metastatske bolesti jetre, prirođene kolangiopatije.

16. Metode • Imunohistokemijska analiza • Westernblot analiza • Natrij-dodecil sulfat poliakrilamid gel elektroforeza (SDS-PAGE) – zimografija

17. Statistička analiza • Statistica 8.1 • Normalnost raspodjele - Kolmogorov-Smirnovljev test / usporedba kumulativne s očekivanomraspodjelom podataka • Parametrijski testovi – one-way ANOVA i t-test • Neparametrijski testovi - Kruskal-Wallis test i Mann-Whitney test

18. Etički aspekti istraživanja • Revizija Helsinške deklaracije iz 2008. • Institucionalna i nacionalna regulativa istraživanja na ljudima. • Prikupljanje uzoraka tkiva u skladu s etičkim i bioetičkim principima • Rukovanje humanim tkivom - medicinska tajna - anonimnost - neškodljivost postupka - pravednost i dobročinstvo

19. Očekivani znanstveni doprinos Važnost ovog istraživanja je u mogućnosti razjašnjavanja načina izražaja BMP-9 u cirozom promijenjenom parenhimu jetre. Hepatoregenerativno svojstvo je dokazano inzulinu te je utvrđeno da BMP-9 ima inzulinu sličan promitogeni učinak na hepatocite. Stoga očekujemo veću izraženost BMP-9 na mjestima spontane regeneracije jetrenog parenhima.

20. U nodularnoj fibrozi je zbog porto-kavalnog shunta smanjen dotok inzulina, zbog čega očekujemo kompenzatorno veću produkciju BMP-9 u hepatocitima regeneracijskih čvorića. • Rezultat obrnuto razmjernog odnosa razine izraženosti proteina BMP-9 i TGF- β uz nalaz veće izraženosti BMP-9 na mjestima regeneracije hepatocita, išao bi u prilog regenerativne uloge BMP-9 u humanoj jetri.