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Inoculación de fitopatógenos

Inoculación de fitopatógenos. Curso: Diagnóstico de enfermedades vegetales. Ing. Agr. Vivienne Gepp, MSc. 6 de mayo de 2011. Objetivos. Conocer las principales técnicas que se usan para inocular hongos, bacterias, virus y nematodos fitopatógenos. Esquema de la clase. PARTE TEÓRICA

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Inoculación de fitopatógenos

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Presentation Transcript

  1. Inoculación de fitopatógenos Curso: Diagnóstico de enfermedades vegetales. Ing. Agr. Vivienne Gepp, MSc. 6 de mayo de 2011

  2. Objetivos • Conocer las principales técnicas que se usan para inocular hongos, bacterias, virus y nematodos fitopatógenos.

  3. Esquema de la clase PARTE TEÓRICA • Inóculo, calidad y cuantificación. • Métodos de inoculación de hongos, bacterias, virus y nematodos en hojas, raíces, tallo, frutos. PARTE PRÁCTICA • Inoculación LUEGO DE LA CLASE • Observación, análisis e informe de resultados

  4. Hongos: Bacterias: Virus: Nematodos: trozos de micelio esporas esclerotos unidades formadoras de colonias (UFC) partículas en macerado, buffer, etc. larvas, huevos, quistes Inóculo

  5. Calidad del inóculo • Viable – en activo crecimiento (micelio, bacterias), esporas capaces de germinar • Homogéneo: • siembra de hongo en centro de placa vs. suspensión de esporas • “Acostumbramiento a crecer en medio de cultivo” – pérdida de patogenicidad (Ralstonia) o de producción de esporas (Septoria, Cercospora)

  6. Cuantificación del inóculo • Hematocitómetro • Turbidez • Unidades formadoras de colonias

  7. Cuantificación del inóculo en hematocitómetro • Rayado Neubauer: • 2 porciones c/u con 9 cuadrados principales de 0,1 mm3 • divididos en 16 cuadrados menores de 0,05 mm3

  8. Cuantificación de inóculo • Turbidez - bacterias • Escala de McFarland: BaCl2 + H2SO4 • Densidad óptica: colorímetro o espectrofotómetro a 450 – 650 mµ

  9. Cuantificación de inóculo • Recuento de colonias  unidades formadoras de colonias (UFC)

  10. Inoculación al follaje • Penetración por estomas o epidermis - mayoría penetra en 24 hs. en condiciones adecuadas de humedad y 20-24ºC • Métodos: • pulverización: • 0,5% Tween o 0,1% jabón • cereales: 1º frotar hoja con dedos mojados para que se mojen mejor • 0,5% gelatina o 0,1-0,2% agar – adhiere esporas y mantiene humedad • aceite dispersa esporas, mantiene humedad. Oidios pierden infectividad.

  11. Métodos de inoculación al follaje • pulverización: • 0,5% Tween o 0,1% jabón • cereales: 1º frotar hoja con dedos mojados para que se mojen mejor • 0,5% gelatina o 0,1-0,2% agar – adhiere esporas y mantiene humedad • aceite dispersa esporas, mantiene humedad. Oidios pierden infectividad.

  12. Métodos de inoculación al follaje • espolvoreo con talco • royas: humedecer hojas 1º (aspersión) • oidios – seco • rozar o colocar hojas esporuladas sobre sanas (previamente rociadas) • inmersión en suspensión de inóculo

  13. Métodos de inoculación al follaje • infiltración • colocar trozo de micelio

  14. Métodos de inoculación al follaje

  15. Inoculación de virus

  16. Plantas indicadoras • Tabaco, pepino, Chenopodium quinoa, etc. • Sin síntomas • Lesiones locales • Síntomas sistémicos

  17. Plantas indicadoras

  18. Transmisión mecánica • Macerado de planta enferma • Abrasivo (carborundum) • Planta sana = Transmisión “por jugos”

  19. Transmisión por pulgones

  20. Transmisión por propagación vegetativa • tubérculos, bulbos, estacas, etc. • injerto • An overview of the paintings of Christina Brodiehttp://www.microscopy-uk.org.uk/mag/indexmag.html?http://www.microscopy-uk.org.uk/mag/artnov05/cbpaint.html

  21. Inoculación al suelo o raíces • efecto del suelo: microflora conducente o supresivo  reducir variación  sin suelo • humedad muy alta para Pitáceas, • + síntomas a > temp. hasta 28ºC en gral. • Métodos: • infestación de suelo • hidroponia • “cut and dip” • inoculación sin herir raíces (tubos en suelo)

  22. Inoculación al tallo o rama • Generalmente con heridas • Corte longitudinal – inocular inmediatamente – cubrir para evitar deshidratación. (gel, algodón mojado) • Patógenos vasculares

  23. Inoculación al tallo o rama • Patógenos vasculares: • axila - pinchar a través de gota o con aguja o escarbadiente contaminado. • inyección al tallo – evita stress de transplante

  24. Inoculación en órganos carnosos • Pinchazo • Sacabocado • Corte

  25. Condiciones ambientales Antes de inocular: • Patógenos que penetran por estomas • Patógenos que penetran por heridas • Virus

  26. Condiciones ambientales Post-inoculación: • Humedad para bacterias y hongos – factor más importante • Virus

  27. BIBLIOGRAFÍA • DHINGRA, O.D.; SINCLAIR, J.B. 1985. Basic plant pathology methods. • FRENCH, E.R. y HERBERT, T. 1980. Métodos de investigación fitopatológica. • KIRÁLY, Z. 1970. Methods in plants pathology with special reference to breeding for disease resistance. • LELLIOTT, R.A.; STEAD, D.E. 1987. Methods for the diagnosis of bacterial diseases of plants. • THE COMMONWEALTH MYCOLOGICAL INSTITUTE. 1968. Plant pathologist's pocketbook.

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