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8. Automatisation de l'hmogramme La chronologie par tapes
11. Deux principes trs diffrents:
12. La variation d'impdancePrincipe Coulter
13. Construction des histogrammes de distribution volumtrique: 1-amplification des impulsions (V en mV)2-tri des impulsions selon des seuils lectroniques3-Rpartition des impulsions dans des canaux lectroniques (256 ou 128) en fonction du niveau dimpulsion donc du volume cellulaire 4-comptage des impulsions dans un intervalle de volume cellulaire
14. Numration des Globules Rouges et des Plaquettes Bac de comptage des GR/PLT Comptage et mesure du volume partir d'une suspension cellulaire dilue en solution isotonique: taux de dilution lev (1/10 000 1/20 000 ), ce qui permet de rendre ngligeable une interfrence des GB
Un seul bac de comptage:
Toute particule d'un volume suprieur 25 fl (et infrieur 250 fl) est compte comme un GR
Toute particule dun volume suprieur 2 fl (et infrieur 25 fl) est compte comme une PLT
Chaque particule est place dans un histogramme de distribution volumtrique
15. Numration des Globules Rouges Histogramme des GR Mise en vidence de fragments de cytoplasme ou de grandes plaquettes par l'analyse de l'histogramme partir de 24 fl.
16. Numration des Globules Rouges Les paramtres calculs L'IDR ou RDW (Red Cell Distribution Width)
L'IDR est une valeur statistique correspondant au CV % calcul sur la distribution des rouges = coefficient d'anisocytose.
17. Numration des Plaquettes Histogramme des PLT et paramtres calculs
18. Numration PLT Existent des seuils variablespermettant limination risques dinterfrences et numrations justes
19. Numration des globules blancs Bac de comptage des GB Comptage partir d'une suspension cellulaire dilue en liquide hmolytique: taux de dilution faible, (1/200 1/300)
Un bac de comptage rserv
Toute particule d'un volume suprieur 35 fl est compte comme un globule blanc.
Les globules rouges sont lyss (ammonium quaternaire, ferri cyanure, cyanure de K+), permet la libration de Hb CyanMetHb
Une partie de la dilution des leucocytes passe dans une cuve spectrophotomtrique pour la mesure 540 nm
20. Le rsultat de numration est assujeti une correction dite "correction de concidence".
Occasionnellement deux ou trois cellules peuvent traverser l'orifice de comptage en mme temps.
Une impulsion de grande amplitude est gnre.
La frquence de ces passages en concidence est statistiquement prvisible en fonction du nombre de cellules. Cette correction est ralise automatiquement par les analyseurs. Correction de passage en concidence Doublet ou triplet cellulaires
21. LA FORMULE LEUCOCYTAIRE automatiseTROIS POPULATIONS ou CINQ POPULATIONS (5 Diff)
23. Formule 3 populationsRle de la lyse diffrentielle (Cytolyse mnage)
24. Histogramme diffrentiel volumtrique de GB Dtermination de 3 sous-populations Reconnaissance des cellules d'aprs le volume rsultant, par variation dimpdance
3 sous populations : Lymphocytes, Monocytes, Granulocytes.
Les anomalies de distribution sont signales par des alarmes.
26. Hydrofocalisation
27. La mesure optique
29. Formule 5 Populations : critres de reconnaissance Les automates associent divers principes technologiques permettant laccs divers critres de reconnaissance Variation Impdance (= Volume cellulaire)
Principe Coulter pour le volume, ou mesure optique pour la taille
Diffraction lumineuse (= taille cellulaire et Granularit)
Diffraction de la lumire par la cellule (diffrents angles)
Cytochimie slective
Coloration dun lment de la cellule, par simple affinit (ex:coloration des granulations osinophiles) ou par activit enzymatique chromogne slective (ex: peroxydase des granulations)
Conductivit (opacit) Courant Radio Haute Frquence (RF)
Structure de la cellule par un conduction courant haute frquence
Cytolyse
Lyse slective de populations. Ex: tous les GB sauf PB. (videmment dans tous les cas de FL complte automatise, la lyse de GR est obligatoire
30. Dtermination de la formule 5 populationsChaque socit sur ses automates combine plusieurs technologies et donc plusieurs critres de reconnaissance Impdance + Conductivit HF + Diffraction lumineuse
BeckmanCoulter Automates MAXM, HmX, GenS, LH500, LH750
Impdance + Cytolyse + Cytochimie (Actvit peroxydasique)
BayerDiagnostics Automates Advia120, Technicon H2, H3
Impdance + Cytolyse + Cytochimie (Coloration des granulationsEo.)
HoribaAbx Automates Pentra60, Pentra80, Pentra120
BayerDiagnostics Automates Advia70
BeckmanCoulter Automates ACT 5Diff
Diffraction lumineuse + Cytochimie (Eosino) + Cytolyse
Sysmex SF3000, XE2100
Diffraction lumineuse multi-angulaire sans cytolyse
AbbottDiagnostics Automates CELL-DYN 3200, 3700, 4000
31. Horiba ABX Impdance/Cytolyse/Cytochimie
33. Horiba ABX Impdance/Cytolyse/Cytochimie
34. Horiba ABX Impdance/Cytolyse/Cytochimie
37. Beckman Coulter Impdance/ConductivitHF/Diffraction
39. Beckman CoulterImpdance/ConductivitHF/Diffraction Analyse en 3D
41. Abbott DiagnosticsDiffraction Laser multi-angulaire
42. Abbott Diagnostics Diffraction Laser multi-angulaire Angles de diffraction et critres de reconnaissance
43. Abbott Diagnostics Diffraction Laser multi-angulaire Diffractogrammes
47. Bayer-Technicon Diffraction/Cytolyse/Cytochimie Diffraction lumineuse enregistre sous deux angles diffrents
49. Bayer-Technicon Diffraction/Cytolyse/Cytochimie Diagramme Perox et Diagramme Basophiles
50. SysmexVolume/RF/Cytolyse
51. Volume/RF/Cytolyses
52. Volume/RF/Cytolyses Matrice RF/Volume et Histogrammes Eo et Ba
53. Le marquage dautres types cellulairesLes RticulocytesMarquage fluorescent sur ARNs rsiduels
54. RticulocytesFluorescence vs Complexit
55. Diffraction lumineuse + Cytolyse Sysmex
56. SysmexDiffraction lumineuse/Cytolyse
57. Diffraction lumineuse/CytolyseEnregistrement de deux angles de diffraction
58. Diffraction lumineuse/CytolyseFormule Ly, Mo, Eo, Ne+Ba
59. Diffraction lumineuse/CytolyseDtermination de la 5 me pop : les Neutrophiles
60. Diffraction lumineuse avec ou sans cytolyse complmentaire Abbott
61. RticulocytesNouveau bleu de mthylne
62. Cytolyse complmentaire Abbott (CD 3200)
63. Cytolyse : le NOCCD 3200
64. Diffraction lumineuse + Marquage Abbott
65. Marquage l'iodure de propidium CD 4000
66. Analyse de la fluorescence Marquage des noyaux accessibles
67. LE MARQUAGE D'AUTRES TYPES CELLULAIRESRETICULOCYTESCD4/CD8
68. Lymphocytes T4/T8Marquage des sites CD4/CD8 par cytosphres (Ag-Ac)