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INTERAÇÕES ANTÍGENO-ANTICORPO

INTERAÇÕES ANTÍGENO-ANTICORPO. Detecção, quantificação e caracterização dos anticorpos e seu uso como ferramenta para pesquisa e diagnóstico. INTERAÇÕES. Reações reversíveis . Ligações não covalentes: Pontes de hidrogênio Interações hidrofóbicas Interações de Van der Waals

berny
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INTERAÇÕES ANTÍGENO-ANTICORPO

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Presentation Transcript

  1. INTERAÇÕES ANTÍGENO-ANTICORPO Detecção, quantificação e caracterização dos anticorpos e seu uso como ferramenta para pesquisa e diagnóstico

  2. INTERAÇÕES • Reações reversíveis. • Ligações não covalentes: • Pontes de hidrogênio • Interações hidrofóbicas • Interações de Van der Waals • Ligações iônicas

  3. MÉTODOS • Reagentes não marcados • Reação de precipitação • Reação de aglutinação • 2)Reagentes marcados • RIA • ELISA • Imunofluorescência • Western Blotting

  4. MÉTODOS • PRECIPITAÇÃO - Imunodifusão • AGLUTINAÇÃO - Aglutinação direta e indireta - Inibição da aglutinação - Teste de Coombs • IMUNOENSAIOS - RIA - ELISA - Imunofluorescência e Citometria de Fluxo • Western Blotting APLICAÇÕES - Pesquisa - Diagnóstico - Soroepidemiologia

  5. PRECIPITAÇÃO X AGLUTINAÇÃO • Precipitação: Formação de complexos Ag/Ac. • Aglutinação: É o agrupamento de partículas, usualmente por moléculas de Ac que se ligam a Ag na superfície de partículas adjacentes. • As reações de precipitação e de aglutinação decorrem, respectivamente da ligação entre o Ac e Ag solúvel e particulado.

  6. REAÇÕES DE AGLUTINAÇÃO • Ac + Ag multivalente particulado • Título: maior diluição que ainda causa aglutinação (semi-quantitativo) • Agregação visível de partículas = Eritrócitos, bactérias, fungos e látex

  7. Células ou partículas insolúveis + Ac = Aglutinação Exemplo: tipagem sanguínea em lâminas (sistema ABO) AGLUTINAÇÃO DIRETA 1) Amostra de sangue na placa teste: 2) Reagente (anticorpo anti A, B): 7

  8. AGLUTINAÇÃO DIRETA 4) Mistura-se: 3) Controle negativo: 8

  9. Um resultado positivo é indicado por uma aglutinação visível (aglomeração dos eritrócitos na placa teste), como ilustrado acima. negativo positivo AGLUTINAÇÃO DIRETA 5) Leitura do resultado: 9

  10. + Resultado negativo: (ausência de hCG na urina). Ocorre aglutinação, pois os anticorpos anti-hCG não são bloqueados na incubação inicial, porque não havia o hormônio na urina. Livres, podem aglutinar as partículas revestidas de hCG. Urina Soro anti - hCG Partículas revestidas com hCG Adicionam-se São incubados e colocados numa placa Resultado positivo: (presença de hCG na urina): não ocorre aglutinação. Ac se ligaram no hCG da urina, (ficando bloqueados), na incubação inicial INIBIÇÃO DA AGLUTINAÇÃO Exemplo: presença de hCG na urina (gravidez) 11

  11. TESTE DE COOMBS • Ac antiimunoglobulinas (Robert Coombs); • DHRN – mãe produz IgG anti-Rh; • Não aglutinam os eritrócitos; • Direto: Ac ligados aos eritrócitos fetais; • Indireto: Ac anti-Rh não aglutinantes no soro materno. • Permite detectar incompatibilidades Rh, prevenindo contra DHRN.

  12. IMUNOENSAIOS • Reagentes marcados (enzimas, fluorocromos, isótopos) • Tipos: • RIA • ELISA • IFA / CITOMETRIA DE FLUXO • WESTERN BLOTTING

  13. IMAGENS

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