1 / 44

AKTIVÁLT KOMPLEX ES*

BIM B Sc 200 7. AKTIVÁLT KOMPLEX ES*. FUNKCION ÁLIS DOMAIN - EK. SZUBSZTRÁT KÖTŐ HELY REGULÁTOR DOMAINEK: Me modulátor (INHIBITOR,AKTIVÁTOR,S,P) Kovalens módositás: foszforilez és glikozilezés proteolizis Katalitikus d omain AKTIV CENTRUM. lehetnek azonosak is.

bess
Télécharger la présentation

AKTIVÁLT KOMPLEX ES*

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. BIM BSc 2007 AKTIVÁLT KOMPLEX ES* FUNKCIONÁLIS DOMAIN-EK SZUBSZTRÁT KÖTŐ HELY REGULÁTOR DOMAINEK: Me modulátor (INHIBITOR,AKTIVÁTOR,S,P) Kovalens módositás: foszforilezés glikozilezés proteolizis Katalitikus domain AKTIV CENTRUM lehetnek azonosak is

  2. ENZIM MODULÁCIÓ

  3. E + S ES E + P + I E I REVERZIBILIS IRREVERZIBILIS DINAMIKUS EI KOMPLEX INHIBÍCIÓ LINEÁRIS INHIBÍCIÓ komplett kP NEMLINEÁRIS INHIBÍCIÓ (HIPERBOLIKUS) részleges βkP „csökkent, maradék aktivitás” 1/V - I ábrázolás DIXON ábrázolás

  4. Irreverzibilisinhibitorok Di-izopropyl-foszfofluoridát: sarin ideggáz prototípusa Irreverzibilisen inaktiválja az acetilkolinészterázt ( ser-proteázokat)a Ser195-tel kovalensen kötödve (aktív centrumban) Hasonlók: Malathion , ethyl parathion (szerves foszfát peszticidek)

  5. S VERSENGÉS S ÉS I KÖZÖTT AZ E AKTÍV HELYÉÉRT, VAGY..... KÖLCSÖNÖS KIZÁRÁS I szubsztrát analóg alternatív szubsztrát termék 1. KOMPETITÍV INHIBÍCIÓ 1. MODELLEK I • MODELL: Klasszikus kompetitív inhibíció • Az I verseng S-sel ugyanazon aktív hely elfoglalásáért

  6. S I MODELLEK 1. KOMPETITÍV INHIBÍCIÓ 2. 2. MODELL: sztérikus gátlásA : I kötődése egy másik kötő helyhez térbelileg gátolja S-nek az aktív helyhez kötését.

  7. I S MODELLEK 1. KOMPETITÍV INHIBÍCIÓ 3. 3. MODELL: sztérikus gátlás B : I és az S verseng egy közös kötő helyért.

  8. 1. KOMPETITÍV INHIBÍCIÓ 3. BIM SB 2001 S I MODELLEK 1 2 3 4 4. MODELL: átlapoló helyek esete :1 és 3 kötő hely képes az i, a 2 és 4 kötő hely pedig az S megkötésére, de egymást kölcsönösen kizárják

  9. I S MODELLEK 1. KOMPETITÍV INHIBÍCIÓ 4. S I I S 5. MODELL: I kötõdése az enzimhez konformáció változást okoz az enzimen és ez megakadályozza S-nek az aktív centrumhoz kötődését. Ilyen a végtermék gátlás (feed back inhibíció) is.

  10. 1. KOMPETITÍV INHIBÍCIÓ 5.

  11. 1. KOMPETITÍV INHIBÍCIÓ 6.

  12. 1. KOMPETITÍV INHIBÍCIÓ 7. Adott S-nél melyik az az I, amelyik 50%-os inhibíciót okoz?

  13. 1/V i K = a tg S æ ö 1 K + ç ÷ 1 V K S S max I è ø V S max S ¥ a S= , tg =0 1/Vmax -K I I DIXON ábrázolás:

  14. K = a tg S æ ö 1 K + ç ÷ 1 V K S S max I è ø V S max ¥ S= 1/V i S tg a =0 1/Vmax -K 0 I I

  15. ALTERNATÍV SZUBSZTRÁTOK : HEXOKINÁZ: glükóz, fruktóz 1. KOMPETITÍV INHIBÍCIÓ 8. S- analógok KEMOTERÁPIA

  16. p-NH2-benzoesav 1. KOMPETITÍV INHIBÍCIÓ 8. PABA átalakulás fólsavvá KEMOTERÁPIA FÓLSAV (baktérium számára szükséges) PABA analóg blokkolja a fólsav szintézist szulfa- metoxazol

  17. Gl-6P-dehidrogenáz (1.1.1.49) S= G6P/NADP inh: PO4 Ki = 10-1 mmol/l Szukcinát-dehidrogenáz(1.3.99.1) S= szukcinát fumarát Ki = 1,9.10-3 mmol/l

  18. k. termék inhibició ANALÓGIÁK kompetitiv inhibició alternativ v. versengő szubsztrátok

  19. KS 2. NEMKOMPETITÍV INHIBÍCIÓ KI KI KS V = kp(ES)

  20. Az inhibitor az enzimnek egy másik kötő helyéhez kapcsolódik és nem befolyásolja a szubsztrát kötődését -- nem változtatja meg az enzimnek a szubsztráthoz való affinitását. • Csak a rapid ekvilibrium körülményei között létezik, Ks=Km.

  21. 2. NEMKOMPETITÍV INHIBÍCIÓ 2. Az inhibitor a látszólagos Vmax értéket változtatja meg, Ks (illetve Km) értékét nem befolyásolja.

  22. 2. NEMKOMPETITÍV INHIBÍCIÓ 3. tg  Km/Vmax -KI I

  23. 2. NEMKOMPETITÍV INHIBÍCIÓ: Dixon

  24. Mekkora I duplázza meg a L-B egyenes meredekségét? Mekkora I okoz 50%-os inhibíciót? I = KI 2. NEMKOMPETITÍV INHIBÍCIÓ 4. Példák:H+ ionok hatása a kimotripszin esetében. Itt az aktív centrumban egy proton akceptor hely van, amely inhibeálható növekvő H+-ion koncentrációval. (A L-B ábrázolás tiszta nemkompetitív inhibíciót mutat, azonban ne feledkezzünk meg a pH-nak komplex enzimbefolyásoló hatásáról ). nehézfém molekulák (-SH reagensek), vagy cianidok. Ezeknél azonban a hatás gyakranirreverzibilis Kreatinkináz (2.7.3.2) S= kreatin/ATP inhibitor: ADP Ki =2.10-3 Fruktóz-bifoszfatáz (3.1.3.11) S=Dfr-1,6biP AMP Ki =1,1.10-4

  25. ALMASZELET levegőn barnulás:o-diphenol oxidase • katechin-oxidázkatechin → o-kinon • (hasonló enzim: tyrosinase tyrosine → melanin.) • ez tovább oxidálódik barna termékekké • kompetitiv inhibitor: para-hydroxybenzoesav (PHBA) (B), • ugynoda kötődik,mint a katechin • nonkompetitiv inhibitor: phenylthiourea rézhez kötődik, • ami elengedhetetlen az enzimműködéshez

  26. I csak az ES-hez kötődik I kötő hely „nem kész” 3. UNKOMPETITÍV INHIBÍCIÓ 1 Ks kp I kötő hely „ kész” Ks kp E + P E + S ES + I ESI S kötő hely eltorzult

  27. 3. UNKOMPETITÍV INHIBÍCIÓ 2 mi változott? l.nemkomp.inh. a komp forditottja, KS csökken Egy unkompetitiv I KS és Vmax értékét ugyanolyan mértékben csökkenti

  28. 3. UNKOMPETITÍV INHIBÍCIÓ 3

  29. DIXON ábrázolás 1/V = f( I ) minden inh. esetében ismert: LINEÁRIS INH. 3. UNKOMPETITÍV INHIBÍCIÓ 4 1/V S nő I

  30. K k S P E + S ES E + P + + l. nemkomp!!! DE KEVERT TIP. INHIBICIÓ K =E.S/ES, ahol I I S a K =EI.S/ESI a S K K I I a K S K =E.I/EI I EI + S ESI a K =ES.I/ESI I I JELENLÉTE MÓDOSITJA S-NEKES-RŐL TÖRTÉNŐ DISSZOCIÁCIÓJÁT E ES ESI E EI ESI

  31. LINEÁRIS KEVERT TIP. INHIBICIÓ 2 L. NEMKOMP!!!

  32. LINEÁRIS KEVERT TIP. INHIBICIÓ 3

  33. INHIBICIÓK ÖSSZEFOGLALÁSA S és I kölcsönösen kizárják egymást az enzimről KOMPETITIV S és I egymástól függetlenül kötődnek az enzimre NEMKOMPETITIV mint előző, de az I megváltoztatja az enzim affinitását KEVERT TIPUSÚ I csak a S után kötődik UNKOMPETITIV

  34. nemkompetitív kompetitív unkompetitív kevert

  35. KOMPETITIV INHIBICIÓ NEMKOMPETITIV INHIBICIÓ 1/V 1/V I I 1/S 0 1/S 0 UNKOMPETITIV INHIBICIÓ KEVERT TIPUSÚ INHIBICIÓ 1/V 1/V I I 0 1/S 1/S 0 LINEWEAVER-BURK ÁBRÁZOLÁS

  36. KOMPETITIV INHIBICIÓ S/V S/V I I -Kmapp -Km S 0 -Km S 0 • KEVERT TIPUSÚ INHIBICIÓ • UNKOMPETITIV INHIBICIÓ I S/V S/V I -Kmapp -Km -Km -Kmapp S S 0 0 • NEMKOMPETITIV INHIBICIÓ Hanes – Langmuir ábrázolás

  37. KOMPETITIV INHIBICIÓ • NEMKOMPETITIV INHIBICIÓ V/S V/S I • Vmax V • Vmaxi • Vmax V • UNKOMPETITIV INHIBICIÓ • KEVERT TIPUSÚ INHIBICIÓ V/S V/S I I • Vmax V • Vmaxi • Vmax V • Vmaxi EADIE- HOFSTEE ábrázolás

  38. -OOC -OOC -OOCCH2CH2COO- CH2 CH E E E CH2 CH -OOC -OOC -OOCCH2CH2COO- Malonsav Borostyánkősav S-inhibíció Normális kapcsolódás SZUBSZTRÁT INHIBICIÓ • -- A szubsztrátnak ahhoz, hogy termékképző átmeneti komplex jöjjön létre, két vagy több helyen kell, hogy az enzimhez kötődjék. Sok S molekula → egy S molekula az egyik, másik S molekula pedig egy másik kötőhelyhez kapcsolódik s így inaktív komplexek jönnek létre (ez is reverzibilis inhibíció).

  39. SZUBSZTRÁT INHIBICIÓ ■-- Nagy S koncentrációnálegy S molekulaolyankötőhelyhez is kapcsolódhatazenzimen, amelynemazaktívcentrumrésze, azilyenkötődésmintegyNEMKOMPETITIV (v. unkompetitiv) módonmegakadályozza a normális S kötődést. ■--Azenzim működéshezszükséglehetegyAKTIVÁTORmolekulára. Ha ezkapcsolódniképes a szubsztráttal, sok S molekula"elvonja" azenzimtől azaktivátort, ígycsökkentveannakténylegesaktivitását. ■--Két (vagytöbb) szubsztrátos reakciókeseténazegyikszubsztrátfeleslegelekötheti a másikszubsztrátkötőhelyeit, megakadályozva a szükségesmásodikszubsztrátkapcsolódását, ígymegintcsakinaktívkomplexekjönneklétre. ■-- Nagy S koncentrációaspecifikusmódon is gátolhatja a reakciót, példáulazionerősségmegnövekedésemiatt.

  40. SZUBSZTRÁT INHIBICIÓ b és c -- disszociációs állandó megváltozását mérő faktorok egyszeres S kötés esetén, a-- kölcsönhatási együttható rendszerint > 1

  41. SZUBSZTRÁT INHIBICIÓ

  42. 1/V V K /V V m max max S 1/S 1 V max

  43. SZUBSZTRÁT INHIBICIÓ Az uncompetitiv inhibició sémájából I=S, tehát Ks kp E + P E + S ES + S Ki SES ha [S] kicsi ha [S] nagy

  44. 0.4 0.3 0.2 0.1 0.0 0 50 100 150 200 250 300 Szubsztrátkoncentráció (mg/L) Vmax=0.9,Ks=50,Ki=10 Vmax=0.9,Ks=50,Ki=100 Vmax=0.9,Ks=50,Ki=50 SZUBSZTRÁT INHIBICIÓ V

More Related