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TEMA 2 PURIFICACI N DE ENZIMAS

channery
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TEMA 2 PURIFICACI N DE ENZIMAS

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Presentation Transcript

    8. This flow chart is more simplified than the other one. What do you think? For separation graphic show image of the chromatographic apparatus instead of a box. Combine fractions box: Graphic of little tubes pouring into a bigger beaker. We need to fit in a short text block with a description of the steps in order using numbers to label the steps.This flow chart is more simplified than the other one. What do you think? For separation graphic show image of the chromatographic apparatus instead of a box. Combine fractions box: Graphic of little tubes pouring into a bigger beaker. We need to fit in a short text block with a description of the steps in order using numbers to label the steps.

    9. FACTORES QUE INACTIVAN LAS ENZIMAS DURANTE SU AISLAMIENTO Y PURIFICACIN

    15. Tamao Dilisis (membranas semipermeables)

    16. Tamao Ultrafiltracion Centrifugacin en gradiente de densidad Gradientes continuos de sacarosa? tubo de centrifuga Los componentes de la mezcla se separan por: Peso Tamao Densidad Forma

    17. Coeficiente de sedimentacin S = M (1-V?) N f M: peso molecular V: Volumen espcifico ?: densidad de la solucin N : numero de avogadro F: coeficiente de friccin Las proteinas migran de forma proporcional a este coeficiente

    18. Cromatografa de filtracin Las columnas rellenas polimeros inertes Sephadex: polimeros de dextrano Sepharose: agarosa Superose: agarosa entrecruzada Sephacryl: dextrano-bisacrilamida Superdex: agarosa y dextrano

    19. Exclusin molecular

    21. Tarea La enzima pepsina y grupo de marcadores fueron eluidos de una columna de sephadex. Los volumenes de elucin junto con los marcadores moleculares son los siguientes. Determina el peso molecular de la pepsina

    22. Solubilidad Muy utilizados en los primeros pasos de la purificacin Mantiene nativa a la proteina Redisolucion sin perdida de actividad

    23. Interacciones mencionadas dependen de: pH Fuerza inica Disolvente Temperatura

    24. Solubilidad-pH La carga neta de las protena depende del contenido de aa cidos y de aa bsicos Cuando el valor del pH donde la carga neta de la protena es cero ? pI Solubilidad es minina Ej: ?contenido de aa cidos ?pI bajo (4-5)

    25. Solubilidad-pH

    26. Solubilidad-Fuerza inica Solubilidad a baja fuerza ionica (0.001 0.02 M) aumenta con la [ sales] ? Salting in La solubilidad a alta fuerza inica (mayor a 0.02 M) disminuye con la [sales] ? Salting out La alta [sal] elimina la esfera de solvatacin de la protena Las protenas en H2O tienden a formar COMPLEJOS electrostticos ? precipitan

    27. Solubilidad-Disolventes Adicin de disolventes neutros miscibles en agua (ACETONA, ETANOL) Se usan en distintas proporciones Bajan el poder de solvatacin de las soluciones acuosas

    28. Solubilidad- Temperatura 0-40 oC >T > solubilidad. 40-50oC aumenta la inestab y DESNATURALIZAN (? solubilidad)

    29. Carga

    37. TCNICAS DE PURIFICACIN Diseo de enzimas: La fusin de un gen de inters a secuencias promotoras eficientes hace que una protena se sobreexprese. Dirigir la protena sintetizada de novo al periplasma de la clula. Adicin de colas de afinidad.

    38. Tarea Despus de la extraccin y purificacin de una enzima microbiana, esta es muy poco estable para su uso industrial. Qu piensas que se puede hacer para aumentar la estabilidad?

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