Transporte e Congelamento de Sêmen

1. Transporte e Congelamento de Sêmen M.V. PhD. Adriana Pires Neves Medicina Veterinária – URCAMP Reprolab - UFRGS

2. Conservação do Sêmen • Retirar a fração gel

3. Filtragem Através de uma gaze estéril ou filtros

4. Após a diluição • Estocagem no próprio frasco • Diluidor - +5oC - Geladeira • Todas as células em contato com o diluente • Tubos • Rotação

5. Tipos de Estocagem • Anaeróbica • Aeróbica –temp ambiente (da Europa…)- INRA 96 • Sem diferença na fertilidade

6. Temperatura Crítica • +20oC a + 5oC • Choque térmico • Danos à membrana do spz.

7. Taxa de Resfriamento • Até 20oC Rápido • 20oC até 8oCLento <0,3oC/min • 8oC até 5oC Rápido

8. Transporte de Sêmen • Temperatura até destino – próxima a +5oC • Vários tipos comerciais de containers • Permanentes ou descartáveis (ambiente) Recuperação

11. Tipos de Transporte • Boa comunicação entre as bases • Identificação do sêmen • Transporte aéreo ou rodoviário – prós e contras

12. Sêmen Congelado

13. Vantagens • Banco genético • Animais em campanha esportiva • Mercado global • Menos transporte de animais e conseqüente risco • Controle sanitário

14. Desvantagens • Má congelabilidade • Menores taxas de fertilidade • Menor tempo de vida do spz • Maior custo da IA

15. Passos para congelar • Aumento de concentração • Diluição em solução crioprotetora • Envasamento • Congelamento • Descongelamento • Inseminação

16. Aumento de Concentração • Coleta Fracionada – 10% do plasma seminal

17. Centrifugação <2% plasma • Concentrações <300x106esp. • Diluição 1+2 • EDTA – Glicose • Centrifugação • 700 a 1000g/5min

18. Centrifugação • Retirar o sobrenadante em um único movimento

19. Diluição • Proteger durante a centrifugação, curva de resfriamento e descongelamento • Diluente de Martin • Lactose 11% 50 ml • EDTA – glicose 25 ml • Gema 25 ml • Glicerol 5%

20. Diluente INRA 82 • Glicose 5g • Lactose 300mg • Rafinose 300mg • Citrato Trisód. dihid. 60mg • Citrato K 82mg • Hepes 952mg • Água 100ml • Leite UHT desn. 100ml • Penicilina 1UI/ml • Gentamicina 0,1g/ml

21. Outros Diluentes • Vidament et al. 2002 • Inra 82 + 2% gema + 3% glicerol • Inra 82 + 2% gema + 2% glicerol • Inra 82 + 2% gema + 2% Dimetil formamida • Papa et al. 2002 • Inra 82 + 5% Dimetil formamida

22. Envasamento • Pellets • Macrotubos 4 ml • Palhetas 0,5ml • Palhetas 0,25ml

23. Envasamento • Palhetas e Macrotubos • 50x106 espermatozóides/ml • Pellets • Diluição 1+2 • Congelamento

24. Congelamento • Palhetas e Macrotubos • 20 minutos a 4 cm do espelho de N2

25. Congelamento • Velocidade de congelamento • +20oC a +5oC = • 5oC/min • +5oC a -15oC = • 10oC/min • -15oC a –150oC = • 25oC/min

27. Congelamento • Deposição em Nitrogênio Líquido • (-196oC)

28. Descongelamento • Pellets • 37oC leite desnatado • Palhetas • 37oC /30s • Macrotubos • 50oC 40s

29. Dose Inseminante • Até 1980 • 200x106 espermatozóides • Após 1980 • 400 a 500x106 espermatozóides

30. Inseminação • Controle folicular rigoroso- 6 em 6 h • IDEAL: • -2h antes ou após a ovulação • Possível • -12 h antes ou 6h • após a ovulação

31. Inseminação intracornual profunda

32. Inseminação intracornual profunda • Endoscopia • Pipeta • 0,2 a 0,02ml • 5x106spz

33. Muito obrigada!!