130 likes | 583 Vues
Plūsmas citometrija. Andra Radziņa ar06035 LU BF MSP 1.kurss. Ievads. Plūmas citometrija ir biofizikāla metode, ar kuras palīdzību iespējams veikt fluorescences un gaismas izkliedes mērījumus individuālai šūnai. . Vēsture. Plūsmas citometrija attīstījās no mikroskopijas
E N D
Plūsmas citometrija Andra Radziņa ar06035 LU BF MSP 1.kurss
Ievads • Plūmascitometrija ir biofizikāla metode, ar kuras palīdzību iespējams veikt fluorescences un gaismas izkliedes mērījumus individuālai šūnai.
Vēsture • Plūsmas citometrija attīstījās no mikroskopijas • 1930. gadi AndrewMoldavanizveido fotoelektrisku šūnu skaitīšanas aparātu • 1947 F.T. Gucker izveidot pirmo aparātu baktēriju noteikšanai lamināra gaisa plūsmā • 1953.gadā Crosland-Taylor izmantoja hidrodinamisko šūnu centrēšanu šķidruma strūklā • 1950. gadi WallaceCoulterizveido instrumentu, ar kura palīdzību iespējams elektroniski noteikt šūnu daudzumu
Koultera princips Tehnoloģija tika izveidota, lai ātri saskaitītu asins šūnas, mērot izmaiņas elektrovadītspējā, kas rodas šūnām, kuras izšķīdinātas elektrolītā, plūstot caur nelielu atveri. Ar šo metodi iespējams mērīt jebkura materiāla daļiņas, kas izšķīdinātas elektrolītā.
Parametri, ko iespējams noteikt ar plūsmas citometrijas palīdzību Bez reaģentu palīdzības Ar reaģentu palīdzību • Šūnas izmērs (forwardscattering) • Granulu izmērs un forma citoplazmā (sidescattering) • Fotosintētiskie pigmenti • DNS saturs • RNS saturs • Šūnas virsmas un intracelulārie receptori • DNS sintēze • DNS degradācija • Gēnu ekspresija
FACS Fluorescence ActivatedCellSorting Šūnas ir specifiski iezīmētas ar antivielu, kurai pievienota fluorescenta krāsa Šūnas tiek šķirotas atkarībā no tā, kāda iezīme tām pievienota
Dati un to apstrāde • Katras individuālas šūnas fluorescences kvantus uztver vairāki detektori • Tie pārvērš gaismu elektriskos impulsos • Elektriskie signāli tiek amplificēti un digitalizēti
Pielietojums • Gan zinātnē, gan medicīnā • Šūnu skaitīšana • šūnu šķirošana • Imunofenotipēšana • Šūnas cikla analīze • Apoptoze • Šūnu proliferācija
Jautājums... • Kādas ir trīs galvenās plūsmas citometra sastāvdaļās?