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美罗培南 HPLC 药物分析

AnalChem.211 10/15/2014 9:06 AM. 美罗培南 HPLC 药物分析. 让我们记住 willon 等人在 2005 年秋 2 个月的辛勤工作。. 美罗培南简介. 条件试验. 方法学. 有关物质检查与含量测定. 美罗培南 (meropenem) 简介. 美罗培南：非肠道的注射用抗生素 对阳性和阴性革兰氏病原体有抗菌作用； 加热时分解，得到开环物 。. Meropenem (300 mg) USP Retail Price: $189.00. 美罗培南简介. 条件试验. 方法学. 有关物质检查与含量测定.

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美罗培南 HPLC 药物分析

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  1. AnalChem.211 10/15/2014 9:06 AM 美罗培南HPLC药物分析 让我们记住willon等人在2005年秋2个月的辛勤工作。

  2. 美罗培南简介 条件试验 方法学 有关物质检查与含量测定

  3. 美罗培南(meropenem) 简介 美罗培南：非肠道的注射用抗生素 对阳性和阴性革兰氏病原体有抗菌作用； 加热时分解，得到开环物 。 Meropenem (300 mg) USP Retail Price: $189.00

  4. 美罗培南简介 条件试验 方法学 有关物质检查与含量测定

  5. 实验仪器及工作条件 1、仪器 Agilent 1100 高效液相色谱仪 50ul微量注射器 pH计，砂芯漏斗，针孔过滤器 2、试剂 乙腈（色谱专用） 三乙胺（A.R.） 浓磷酸（A.R.） 美罗培南试样

  6. 3、HPLC分析条件 色谱柱:ZORBAX Eclipse XDB-C8 4.6×150mm,5µm(Agilent) 柱温：室温 流动相：0.3%三乙胺(用磷酸调节pH=5.0)的水溶液和乙腈(体积比100∶7)；也可以简化用纯水和乙腈(体积比100∶7)作流动相 检测器：DAD 检测波长：220nm 进样体积：20µl定量环，实际每次注射40µl 实验仪器及工作条件 可不是件容易事啊！

  7. 美罗培南简介 条件试验 方法学 有关物质检查与含量测定

  8. 方法学研究 1、空白试验 2、美罗培南与BP及开环物的分离 3、美罗培南检测限、定量限 4、破坏性试验 5、溶液稳定性 6、工作曲线 7、样品的有关物质检测和含量测定

  9. 1、 空白试验 空针进样：基线是否稳定 流动相进样：是否有杂质影响 注意纵轴

  10. 色谱法中的信噪比 较小波长处： 信号和噪声均大 上：199nm N=4 mAU 中：228nm N = 0.35 mAU 下：275nm N = 0.02 mAU 常识大 DEP为例,典型UV吸收光谱

  11. 色谱法中的信噪比 1.5mg/L 的DEP 199nmS=58.8mAU S/N = 14.7 228nm S = 18.3 mAU S/N = 52.3 275nm S = 2.18 mAU S/N = 109

  12. 缓冲溶液对峰形的改善 使用缓冲溶液 不使用缓冲溶液 原因分析：

  13. 2、美罗培南与BP及开环物的分离 美罗培南与中间产物BP分离 折腾好几天啊 BP 美罗培南 流动相改用50%乙腈：50%纯水 BP

  14. 美罗培南与BP光谱比较 多波长检测+ 化学计量学

  15. 美罗培南与开环物分离 计算分离度，理论塔板数

  16. 3、美罗培南测出限、测定限 测出限(LOD:S/N=3) 测定限(LOQ:S/N=10) LOD： 0.19 mg/L LOQ： 0.62 mg/ml 稀释多次 减少污染

  17. 4、破坏性试验(1) 25mg美罗培南，加0.1mol/L HCl 5ml，室温振摇溶解后反应液用0.1mol/L NaOH中和至中性进样 主峰84% • 酸破坏

  18. 4、破坏性试验(2) 25mg美罗培南，加0.01mol/L NaOH 5ml，振摇溶解，室温放置34min后反应液用0.01mol/L HCl中和至中性进样。 主峰95.5% • 碱破坏

  19. 4、破坏性试验(3) 25mg美罗培南，加1％双氧水1ml，振摇，室温放置14min，加热分解剩余的双氧水，加流动相至5ml过滤后进样。 主峰 83.33% • 氧化破坏

  20. 4、破坏性试验(4，5，6) 主峰98.08% 高温破坏 主峰98.50% 光照破坏 主峰96.59% 高湿破坏 今天网络讨论：为什么要破坏性试验？ • 高温/光照/高湿

  21. 5、溶液稳定性 面积百分比 面积百分比 0.5mg/ml 5mg/ml 时间/min 时间/min • 溶液室温放置6h，过程中取样测试稳定性 稀溶液较稳定 • 试验溶液要现配现做，尤其是浓溶液！

  22. 6、工作曲线 美罗培南（0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0）mg/ml 主峰面积作图 R要求0.999 好高的要求,称得要准阿!

  23. 7、样品有关物质检测和含量测定 有关物质检测 粗品、040901-1、040901-2、040901-3、 041001、041002、041003 含量测定 041001、041002、041003 先以USP对照品标定040901-3批 以后都以040901-3为对照品 USP好贵啊！

  24. 美罗培南简介 条件试验 方法学 有关物质检查与含量测定

  25. 有关物质检查和含量测定 1、方法步骤 A 有关物质检测 供试品溶液：5mg/ml，用流动相溶解。 对照溶液：将供试品溶液用流动相稀释制成25µg/ml（1：200）。 记录色谱图至主成分峰保留时间的3.5倍 目的：相同坐标刻度范围看杂质含量

  26. 25ug/ml 5mg/ml 有关物质检测（040901-3批） 峰高占满刻度20%-25% 坐标刻度范围相同

  27. B 含量测定 供试品溶液：0.5mg/ml，用流动相溶解 对照品溶液：0.5mg/ml，用流动相溶解 计算方法：外标法（单点校正） 对照品均为：040901-3批 平行进样至少2针 目的：测试物质含量

  28. 1st A：7199 对照品USP 1st A：7602 供试品040901-3批 2nd A：7612 供试品040901-3批 含量测定（040901-3批） 2nd A：7612

  29. 2、工作内容 影响因素实验样品测定 光照、高温、高湿度考核：5天，10天 长期试验样品（25℃、RH60%） 3月，6月，9月，12月 加速试验样品（40℃、RH75%） 1月，2月，3月，6月 加速试验样品（30℃、RH60%） 1月，2月，3月，6月 • 注意：以上试验分别测试041001、041002、041003批

  30. 后续工作展望 半成品、成品试剂等方法学研究及有关物质检测和含量测定

  31. 路漫漫兮其修远兮！

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