1 / 21

HPLC High Performance Liquid Chromatography

HPLC High Performance Liquid Chromatography. Nejdokonalejší LC : ú činnost N > 10 4 ; R f = ≥ 10 -2 Detekční limit 1 : 10 9 -10 15 Použití: analytické - ng x preparativní – 100g Vysoká reprodukovatelnost Vyšší T I netěkavé látky Vznik  Teorie

ilori
Télécharger la présentation

HPLC High Performance Liquid Chromatography

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. HPLCHigh Performance Liquid Chromatography Nejdokonalejší LC: účinnost N>104; Rf = ≥ 10-2 Detekční limit 1 : 109 -1015 Použití: analytické - ng x preparativní – 100g Vysoká reprodukovatelnost Vyšší T I netěkavé látky Vznik  Teorie Přístrojová technika (GC, detektory) Sorbenty

  2. Srovnání HPLC a LC  

  3. HPLC chromatograf

  4. Peristaltické čerpadlo • Tok: 0.01 – 10.0 (max.30) ml/min • Tlak: 28 - 42 MPa Výhody: • Jednoduchá konstrukce • Sterilita • Ne styk FM s kovem Nevýhody: • Tlakové rázy  Druhé čerpadlo s opačným rázem

  5. Short Column Chromatography Biotechnologické provozy

  6. CoulArray – elektrochemický detektor • 4,8,12 nebo 16 senzorů v serii • Potenciálový rozsah ± 2 V v 1 mV krocích • Pracovní V 0,5 μl • Proudový rozsah 10 pA -1mA • Citlivost pg –ng ox./red. látky na elektrodě  3D detekce

  7. Příklad 3D-detekce 27 látekCoulArray ESA,Inc T (min.)

  8. Discovery Zr– High pH + High T HPLC 3 μm a 5 μm částice ZrO2 Zr vázané fáze: • Zr-C18 - jako silicaC18 • Zr-PBD – polybutadien, jako silicaC18 • Zr-PS - polystyren

  9. ZrO2 jako iontoměnič Zr – elektrofil, Lewisova HA  Váže Lewisovy BOH (PO4 3- , F- ,citrát)  2 druhy interakce: • ω nebo KD • q

  10. Rychlé dělení nesteroidních protizánětlivých léků na Zr-CarbonC18

  11. Monolitické FS - nová éra LC ChromolithTM - monolitický silikagel Struktura: • Makropóry – 2 μm, propustné pro FM • Mikropóry – 13 nm, plocha adsorpce Výhody: • Vysoké průtoky (9ml/min) • Rychlost (min) • Účinnost (N = 104) • Vysoká reprodukovatelnost

  12. Chromolith – rychlost dělení

  13. Testování účinnosti kolon Chromolithu

  14. CIM monolytyConvective Interaction Media IEC, RP, AfC Analytické i preparativní, pro velké biomolekuly CLC– (Conjoint LC) multidimensionální, 4 disky Výhody: • Rychlé • Vysoké rozlišení • Nízký tlak • Vysoká reprodukovatelnost • Jednoduché zacházení • pH 1 - 14 Polymer na bázi methakrylátu nebo polystyrenu

  15. Příklad dělení oligonukleotidů na CIM

  16. Použití HPLC • Univerzální – preparativní i analytické • Všechny principy LC Jediná podmínka - rozpustnost v FM Výroba léků (inzulin, monoklonální protilátky, Ig) Rutinní analýzy • Potravinářský průmysl (obsah vitaminů, pesticidů, transMK) • Farmaceutický průmysl (rutinní výstupní kontroly) • Klinická biochemie (kontrola metabolizmu, HC) • Doping sportovců • Ekologie (pitná voda, freony v ledovcích)

  17. Monoklonální protilátky FPLC(Fast Protein, Polypeptide, Polynucleotide LC) Speciální silikagel pro IEC, agarosa pro AfC MAbs • Čištění z ascitu • Čištění z malého množství bakteriální kultury • Monitorování fermentace a produkce Protein A Sepharosa pro FPLC Výhody Protein A Superosy: • Vysoce specifické – v jednom kroku požadovaná čistota • Snadno se čistí a regenerují

  18. Výroba insulinu Provozní kontrola obsahu proinsulinu v kritických frakcích insulinu pomocí FPLC (Polyanion SI HR5/5)

  19. SPESolid Phase Extraction Příprava vzorků pro rutinní analýzu, náhrada vytřepávání Pro: HPLC, TLC, GC, ElFo, RIA, spektromerii Princip: Selektivní adsorpce, μl – l, jednorázové Výhody: • Rychlé • Práce v serii (12, 24, …) • Vysoká reprodukovatelnost • Levné , malé množství odpadu, ekologické • databáze

  20. Postup SPE

  21. Použití Univerzální • Farmaceutický průmysl • Potravinářský průmysl • Klinická biochemie (narkotika v moči, HC, ..)

More Related