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LASERS. FUENTES. 543. 405. 633. 405. 488. UV. UNIDAD DE BARRIDO. No tocar!! (Se desalinean los lásers ). X. X. Llave Vertical (dos posiciones, una para cada set de lásers). Abajo : 405/488/543 Arriba : 633/488/543. Llave de Espejo Dicroico. Canal 2. Canal 1. >570. < 570.

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Presentation Transcript

  1. LASERS FUENTES 543 405 633 405 488 UV

  2. UNIDAD DE BARRIDO No tocar!! (Se desalinean los lásers). X X Llave Vertical (dos posiciones, una para cada set de lásers) Abajo : 405/488/543 Arriba : 633/488/543

  3. Llave de Espejo Dicroico Canal 2 Canal 1 >570 < 570 Llave de filtros - adentro: se interpone el filtro afuera: no se filtra >510 430 - 460 Llave de filtros 560-600 >660 Laser 488 Laser 633 Llave vertical Laser Laser Laser 405 (UV) Objetivo Plano del preparado Arriba Abajo

  4. En suma: Llave Vertical Dos posiciones, una para seleccionar con qué set de lásers se va excitar la muestra: Abajo : 405 – 488 – 543 Arriba : 633 – 488 – 543 Llave de Espejo Dicroico Tres posiciones, para seleccionar con cuál canal se va a detectar la emisión: - Adentro: Canal 1 - Afuera: Canal 2 - Intermedia: Ambos (< 570 va a Canal 1 y >570 va a Canal 2). Llaves de filtros Para filtrar la luz emitida según el espectro del fluoróforo. Dos posiciones: adentro: se interpone el filtro afuera: no se filtra Los filtros instalados son: Canal 1: 430-460 (por ej DAPI) Canal 2:560-600 (por ej. TRICT) >510 (por ej. FICT) >660 (por ej. Cy5) NOTAR QUE: Si está acostumbrado a chequear con el software la configuración, tenga en cuenta que para FICT y afines le va a seguir indicando los filtros 510 y 530, aunque ahora sólo usaremos el 510

  5. Hay 10 combinaciones posiblesLas 7 combinaciones básicas y3 másLas 7 básicas se pueden combinar en simultaneo con luz transmitida

  6. Llave de Espejo Dicroico: Afuera Opción 1: Quiero ver una marcación Con texas red o similar (rojo) Láser 543 prendido Llave vertical irrelevante Shutter abierto (software) Registro en canal 2(Llave Espejo Dicroico Afuera) Filtro Rojo activo 560-600 Canal 2 >570 Filtro Rojo (560-600) Llave vertical objetivo Plano del preparado

  7. Llave de Espejo Dicroico: Adentro Opción 2: Quiero ver una marcación Con FITC o similar (verde/amarillo) Laser 488 prendido Llave vertical irrelevante Shutter abierto (software) Registro en canal 1(Llave Espejo Dicroico Adentro) Filtro Verde Activo Canal 1 < 570 Laser 488 objetivo >510 Plano del preparado

  8. Llave de Espejo Dicroico: Adentro Canal 1 < 570 Opción 3: Quiero ver azul (i.e. DAPI) Laser UV prendido Llave vertical abajo Shutter abierto (software) Registro en canal 1(Llave Espejo Dicroico Adentro) Filtros azul activo Llave vertical Laser uv objetivo 430 - 460 Plano del preparado

  9. Llave de Espejo Dicroico: Afuera Opción 4: Quiero ver Rojo lejano Laser 633 prendido Llave vertical para arriba Shutters abierto (software) Registro en canal 2(Llave Espejo Dicroico Afuera) Filtro rojo lejano activo Canal 2 >570 Filtro Rojo (> 660) Laser 633 Llave vertical Laser 610 633 objetivo >660 Plano del preparado

  10. Llave de Espejo Dicroico: Intermedia >660 >510 Canal 2 Canal 1 Opción 5: Quiero ver doble marcado FITC y Rojo lejano Laser 633 prendido Laser 488 prendido Llave vertical para arriba Shutters abiertos (software) Registro en canal 1 y 2(Llave Espejo Dicroico Intermedia) Filtros rojo lejano y verde activos < 570 >570 Llave vertical Laser 488 Laser 633 objetivo Plano del preparado

  11. Llave de Espejo Dicroico: Intermedia Opción 6 (menos especifica que la anterior): Quiero ver doble marcado Con texas red o similar (rojo) Y con FITC o similar (verde amarillo) Laser 488 prendido Laser 543 prendido Llave vertical irrelevante Shutters abiertos (software) Registro en canal 1y 2(Llave Espejo Dicroico Intermedia) Filtros Rojo y Verde activos Canal 2 Canal 1 < 570 >570 560-600 >510 Laser 488 objetivo Plano del preparado

  12. Llave de Espejo Dicroico: Intermedia Opción 7 : Quiero ver texas red y fluorescente azul (i.e. DAPI) Decir los problemas Laser UV (405) prendido Laser 543 prendido Llave vertical para abajo Shutters abiertos (software) Registro en canal 1 y 2(Llave Espejo Dicroico Intermedia) Filtros azul y rojo activos Canal 2 Canal 1 < 570 >570 Laser 546 Llave vertical Laser UV objetivo 560-600 Plano del preparado 430 - 460

  13. Tres opciones masDos de triple marcado y una de cuádruple marcado

  14. Opción 8 (para triple marcado): Quiero ver FITC, Rojo lejano y AZUL Láser 633, 488 y UV (405) prendidos Primera pasada Shutters 633 y 488 abiertos (software) Filtros rojo y verde activos Llave vertical para arriba Registro en canal 1 y 2 (Llave Espejo Dicroico Intermedia) Segunda pasada Llave vertical para abajo Shutters UV (405) abierto (software) Registro en canal 1 (Llave Espejo Dicroico Adentro) Filtro Azul activo Canal 2 Canal 1 < 570 >570 >660 Laser 488 Laser 633 Llave vertical Llave vertical Laser 610 >510 Laser UV objetivo objetivo Plano del preparado 430 - 460

  15. 2 fluorocromos y luz transmitida

  16. Canal 2 Canal 1 Opción 9 (poco probable porque TxR y Rojo lejano cerca): Quiero ver texas red, rojo lejano y azul (i.e. DAPI) Laser UV (405), 543 y 633 prendidos Primera pasada Llave vertical para abajo Shutters UV, 543 abiertos (software) Registro en canal 1 y 2: (Llave Espejo Dicroico Intermedia) Filtros azul y rojo activos Segunda pasada Llave vertical para arriba Shutter 633 abierto Registro en canal 2: (Llave Espejo Dicroico Afuera) Filtro rojo activo >570 < 570 560-600 Laser 546 Laser 633 Llave vertical Llave vertical 430 - 460 Laser 610 Laser uv Laser UV objetivo objetivo >660 Plano del preparado

  17. Canal 2 Canal 1 Opción 10: Ud es exigente y quiere ver todo Todos los Lasers prendidos Primera pasada Shutters 546 y UV abiertos Llave vertical para abajo Registro en canal 1 y 2: (Llave Espejo Dicroico Intermedia) Filtros Rojo y UV activos Segunda pasada Shutters 633 y 488 abiertos Llave vertical para arriba Registro en canal 1 y 2: (Llave Espejo Dicroico Intermedia) Filtros rojo lejano y verde activos o si Ud prefiere al revés puede ser también Llave vertical >570 < 570 Laser 488 Laser 546 Llave vertical Laser 610 Laser uv Laser 633 Laser UV objetivo objetivo Plano del preparado

  18. Sequential scan con canales virtuales 3 o 4 fluorocromos y luz transmitida NOTAR que el programa no acepta ingresar más de dos fluorocromos, el tercero se especifíca después (cuando se agrega el canal virtual)

  19. 6

  20. Si tiene cualquier duda o piensa que necesita algún cambio de configuración CONSULTE a la COMISIÓN. No haga cambios sin avisar al resto!! Así evitaremos pérdida de tiempo y hasta de preparados de todos.

  21. Por cualquier consulta a la hora de usar el microscopio me peden encontrar de lunes a jueves de 13 a 17hs y los viernes de 9 a 13 hs en el interno 123 del IIBCE. Mi mail es marce_d@yahoo.com Marcela Díaz Investigadora contratada Grado 1 del servicio de microscopia confocal IIBCE

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