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- Allgemeine Aspekte - Spezielle Aspekte

Hämostasediagnostik. - Allgemeine Aspekte - Spezielle Aspekte. Hannover, November 2005. Allgemeine Aspekte. - Testsystematik - Qualitätssicherung - Befundinterpretation. Testsystematik. - Phänotyp-Analytik - Funktionelle Testverfahren - Strukturelle Testverfahren - Genotyp-Analytik

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Presentation Transcript

  1. Hämostasediagnostik - Allgemeine Aspekte - Spezielle Aspekte Hannover, November 2005

  2. Allgemeine Aspekte - Testsystematik - Qualitätssicherung - Befundinterpretation

  3. Testsystematik - Phänotyp-Analytik - Funktionelle Testverfahren - Strukturelle Testverfahren - Genotyp-Analytik - DNA-basiert - RNA-basiert

  4. Funktionelle Testverfahren - Funktionelle Testverfahren bestimmen die biologische Aktivität eines Analyten. - Testmatrix: Vollblut, plättchenreiches Plasma oder plättchenarmes Plasma - „Read-out-System“: - turbidometrisch - koagulometrisch - amidolytisch

  5. Thromboplastinzeit Messprinzip: koagulometrisch Messparameter: Fibrinbildung Messgröße: Gerinnungszeit in Sek. Befundmitteilung: in Prozent bezogen auf Normalplasma Prothrombin-Ratio

  6. International normalized ratio (INR) Patientenwert Prothrombin-Ratio = Normalwert INR = Prothrombin-RatioISI-Wert ISI = International Sensitivity Index

  7. Korrelation „Quick-Wert“ und INR

  8. Koagulometrisches Testverfahren Thrombin Fibrinogen Fibrin Messparameter: Fibrinbildung

  9. Amidolytisches Testverfahren Thrombin H-D-Phe-Pip-Arg-pNA pNA Messparameter: Hydrolyse eines Peptidsubstrats

  10. Thrombinbestimmung: koagulometrisch

  11. Thrombinbestimmung: amidolytisch

  12. TF-induced thrombin formation clot formation

  13. Amidolytische Testverfahren Amidolytische Testverfahren - sind eine Alternative zu koagulometrischen Verfahren. - ermöglichen kinetische Untersuchungen  Endogene Thrombinbildungspotenzial.

  14. Testsystematik - Phänotyp-Analytik - Funktionelle Testverfahren - Strukturelle Testverfahren - Genotyp-Analytik - DNA-basiert - RNA-basiert

  15. Antigenteste Definition: Antigenteste messen die Konzentration und/oder die molekulare Struktur eines Analyten. Beispiele: ELISA-Verfahren Elektrophoresetechniken/Western-Blot HPLC Durchflusszytometrie

  16. Sandwich-ELISA: Prinzip (1) Fänger-Ak Mikrotiterplatte

  17. Sandwich-ELISA: Prinzip (2) Antigen Fänger-Ak Mikrotiterplatte

  18. Sandwich-ELISA: Prinzip (3) * * Detektions-Ak Antigen Fänger-Ak Mikrotiterplatte

  19. Sandwich-ELISA: Prinzip (4) Substrat Farbstoff * * Detektions-Ak Antigen Fänger-Ak Mikrotiterplatte

  20. Allgemeine Aspekte - Testprinzipien - Qualitätssicherung - Befundinterpretation

  21. Testvalidität - Eignung des Tests für die klinische Diagnostik.

  22. Testvalidität: Parameter - Präzision (RiLiBÄK) - Spezifität - Sensitivität

  23. Testpräzision Intra-assay Varianz: Schwankungen eines Messwertes innerhalb einer Messserie. Inter-assay Varianz: Schwankungen eines Messwertes von Serie zu Serie.

  24. Testsensitivität: Definition Die Testsensitivität ist definiert als die Wahrscheinlichkeit mit der erkrankte Personen vom Test als krank erkannt werden.

  25. Testvalidität Krankheits- Testergebnis status positiv negativ positiv richtig positivfalsch negativ negativ falsch positivrichtig negativ

  26. Testsensitivität: Definition RP Sensitivität = RP + FN RP = richtig positiv, FN = falsch negativ

  27. D-Dimer und DVT-Diagnostik Test Sensitivität Negativer prä- (%) diktiver Wert Elisa 97 96 Vidas-DD 98 98 Latex-Assay 83 92 Simplired 85 92 Perrier A, Bounameaux. Thromb Haemost 2001; 86: 475 - 487

  28. Testspezifität: Definition Die Testspezifität ist definiert als die Wahrscheinlichkeit mit der gesunde Personen vom Test als nicht krank erkannt werden.

  29. Testvalidität Krankheits- Testergebnis status positiv negativ krank richtig positivfalsch negativ gesund falsch positivrichtig negativ

  30. Testspezifität: Definition RN Spezifität = RN + FP RN = richtig negativ, FN = falsch positiv

  31. Testvalidität - Eignung des Tests für die klinische Diagnostik. - Evidence-based diagnostics

  32. EBD: Bewertungen Das Ergebnis des diagnostischen Verfahrens ist ... Level 1: diagnoseentscheidend und therapierelevant. Level 2: diagnoseentscheidend oder therapierelevant. Level 3: diagnosehinführend. Level 4: zur Diagnostik und Therapie ungeeignet.

  33. Qualitätssicherung: Ziele - Erkennen von Einflüssen, die unab- hängig von dem Messparameter das Testergebnis beeinflussen. - Sicherung einer gleichbleibenden Ergebnisqualität.

  34. Einflussgrößen Einflussgrößen beeinflussen das Messergebnis unabhängig von der eigentlichen Messgröße.

  35. Einflussgrößen - Physiologische Einflussgrößen - Methodische Einflussgrößen (Analytische Störgrößen)

  36. Analytische Störgrößen - Präanalytische Fehler - In-process Fehler - Interpretationsfehler

  37. Präanalytische Störgrößen - Art der Blutabnahme - Verhältnis Blut : Antikoagulanz - Art des Antikoagulanz

  38. Anti-FXa-Bestimmung: Antikoagulanz

  39. Anti-FXa-Bestimmung: Antikoagulanz

  40. Analytische Störgrößen: Beispiel aPTT Präanalytische Fehler: Abnahme in Serumröhrchen Abnahme aus Heparinzugang In-process Fehler: Fehlende Zugabe von Calciumchlorid Verzicht auf Präzisionskontrollen Interpretationsfehler: Interpretation bei fehlendem Referenz- bereich

  41. Physiologische Einflussgrössen - Alter - AB0-Blutgruppe - Akute-Phase-Reaktion - Geschlecht

  42. vWF-Parameter: Referenzbereiche* Parameter Blutgruppen A/B 0 vWF-Ag: 64 – 150 % 46 – 125 % RiCof: 65 – 165 % 50 – 130 % CBA: 69 – 116 % 61 – 121 % * IHT Uniklinikum Bonn

  43. Referenzintervall*: Definition - Das Referenzintervall bildet die bio- logische Streuung eines Messpara- meters in einer definierten Popula- tion ab. - Die obere und untere Grenze des Referenzintervalls wird durch das 95% Konfidenzintervall bestimmt. * Synonym: Referenzbereich

  44. Referenzgrenzen: Bewertung X 95 % - 2s + 2s

  45. Referenzwerte - Referenzstichprobe - Referenzintervall - Referenzgrenzen

  46. Referenzstichprobe: Selektion Induktiv: Ausgewählte Population ohne Krankheits- merkmale (Blutspender, Krankenhausper- sonal) Deduktiv: Unselektierte Patienten bilden das Basis- material. Durch Ausschlusskriterien wird das Kollektiv der „nicht kranken“ ermittelt. Mathematisch: „Bhattacharya Plot“

  47. Referenzstichprobe: induktiv Population: 100 gesunde Blutspender 50 Frauen/ 50 Männer Berechnung: 95 % Konfidenzintervall* * Fast alle Hämostaseparameter sind nicht normalverteilt.

  48. Referenzstichprobe: Deduktiv Parameter: D-Dimer als Thrombose- indikator Basiskollektiv: Patienten mit thrombose- typischer Symptomatik Selektionskriterium: bildgebende Diagnostik

  49. Allgemeine Aspekte - Testprinzipien - Qualitätssicherung - Befundinterpretation

  50. Transversalbeurteilung Wert in Bezug zum Referenzintervall: - innerhalb: gesund? - außerhalb: pathologisch?

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