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Tinción Histológica

Universidad de Chile Facultad de Medicina Curso Histopatología 2007. Tinción Histológica. Tutora: TM Solange Zapata Residente: Dr Jorge Chamorro Ruiz 3 de Mayo del 2007. Técnica Histológica. Fijación Deshidratación Aclaramiento Inclusión Corte Tinción Montaje. Seminario Anterior.

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Tinción Histológica

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  1. Universidad de Chile Facultad de Medicina Curso Histopatología 2007 Tinción Histológica Tutora: TM Solange Zapata Residente: Dr Jorge Chamorro Ruiz 3 de Mayo del 2007

  2. Técnica Histológica • Fijación • Deshidratación • Aclaramiento • Inclusión • Corte • Tinción • Montaje Seminario Anterior

  3. Tinción y Montaje • Corte • Desparafinado – Rehidratación • Tinción • Deshidratación • Montaje • Cubreobjetos: funciones • Protección del tejido • ↓ refracción de luz polarizada

  4. Colorantes • ¿Por qué colorear una muestra? Los diversos elementos de los tejidos poseen prácticamente el mismo índice de refracción, lo que hace que el reconocimiento de distintas estructuras sea una tarea difícil.

  5. Definición de Colorante • Un colorante es un cuerpo coloreado que puede comunicar su color a otro cuerpo. • La coloración es la propiedad que tienen ciertos cuerpos de ejercer una absorción selectiva sobre la luz. Dicho de otra manera un cuerpo se ve de tal color porque trasmite por transparencia o por difusión las radiaciones complementarias de las que él absorbe.

  6. Tipos de Colorantes • Colorantes que diferencian los componentes ácidos y básicos de la célula. • Colorantes especializados que distinguen los componentes fibrosos de la matriz extracelular. • Sales metálicas que se precipitan en los tejidos y forman depósitos de metales en ellos.

  7. Tipos de Coloraciones • Directas: se producen por inmersión en el baño colorante. • Indirectas: en este tipo de coloración, el colorante no puede actuar directamente, el objeto a colorear debe ser tratado de antemano por otra sustancia que lo prepare para admitir el colorante, esta se llama mordiente.

  8. Fundamentos Químicos de la Coloración • Clasificación colorantes según afinidad: • Colorantes nucleares o básicos: su componente colorante activo es una base coloreada que se combina con los ácidos nucleicos. • Colorantes citoplasmáticos o ácidos: su componente activo es un ácido coloreado que se combina con el citoplasma. • Colorantes neutros, tanto el ácido como la base son coloreadas.

  9. Colorantes básicos ANILINA+ Cl- • Los colorantes básicos reaccionan con los GRUPOS ANIÓNICOS de los componentes texturales, que son los grupos fosfato de los ácidos nucleicos (ADN y RNA), los grupos SULFATO de los glucosaminoglucanos y los GRUPOS CARBOXILO de las proteínas. La reacción de estos grupos varía según el pH.

  10. Colorantes ácidos Na+ ANILINA- • Los colorantes ácidos se unen primariamente a los componentes texturales por medio de enlaces electrostáticos de manera similar pero opuesta a la de los colorantes básicos. Las anilinas ácidas reaccionan con grupos catiónicos, como los grupos amino ionizados de las proteínas.

  11. Elementos que se tiñan con colorantes básicos (ej. Hematoxilina) son basófilos: La Heterocromatina y los Nucleolos por los grupos Fosfato ionizados. Ergatoplasma por grupos Fosfato ionizados. Matriz del Cartílago por grupos Sulfato ionizados Elementos que se tiñan con colorantes ácidos (ej. Eosina) son acidófilos: La mayor parte del citoplasma no especializado. Filamentos Citoplasmáticos. Fibras extracelulares. Todos estos debidos a grupos Amino ionizados. Entonces:

  12. Metacromasia • Fenómeno por el cual un colorante cambia de color tras reaccionar con un componente textural. • Se debe a que en tejidos con altas concentraciones de POLIANIONES, la molécula del colorante se polimeriza entre si y sus propiedades de absorción son diferentes de las propiedades de las moléculas individuales. Cromótropos: Glucosaminoglucanos sulfatados, nucleoproteínas, cartílago, gránulos de los mastocitos. El cristal violeta también genera metacromasia al teñir amiloide Azul de Toluidina tiñe gránulos mastocito púrpura

  13. Tinción (coloración) de cortes • Diferentes componentes celulares y tisulares poseen diferentes afinidades tintoriales.

  14. Tinción (coloración) de cortes

  15. Hematoxilina-Eosina Técnica de tinción más usada. • Hematoxilina: • Colorante natural. • Propiedades similares a las anilinas básicas. • Tiñe todas las estructuras celulares, pero principalmente el núcleo (Histonas). • Eosina: • Colorante ácido. • Acción es la de una anilina ácida. • Tiñe ppalmente citoplasma celular.

  16. Cortes de piel Tinción Hematoxilina-Eosina

  17. Técnica de Tinción H/E • Tinción con hematoxilina. • Lavado con abundante agua. • Aplicar Borato de Potasio. • Cambia el color generado por la hematoxilina del morado al azul. • Aumenta el contraste de color.

  18. Técnica Tinción H/E II • Diferenciación: • Eliminación selectiva del exceso de colorante. • Se obtiene pasando el corte por un baño de alcohol ácido. • Resalta núcleos. • Azuleamiento: • La tinción queda de color rojizo se vira a azul intenso • Sumerge la placa en agua corriente alcalina o carbonato de litio al 1% en agua. • Eosina • Obtenemos núcleos azules, citoplasma rosado y colágeno y fibras musculares rosado pálido.

  19. Cubre-objeto • Una vez teñido el tejido debe ser protegido con un cubre-objeto. • Deshidratar • Medio de montaje

  20. Limpieza de láminas

  21. Análisis de placas TÉCNICAS ESPECIALES ±10% biopsias DIAGNÓSTICO 80-90% bp

  22. Tinciones Especiales

  23. Tinciones para Amiloide Rojo Congo (cortes ±30 mm) H/E

  24. Tinciones para Amiloide Birrefringencia

  25. c Bacterias c Gram negativo: colonias bacterianas se tiñen rojas a d b a y b Gram positivos: tinción azul d FITE: bacilos ácido resistentes se tiñen rojo

  26. Bacterias II Ambas placas con tinción Ziehl Neelsen Bacilos ácido resistentes se tiñen rojo brillante

  27. Calcio Von Kossa-Azul Toluidina Von Kossa: depósitos de calcio Se tiñen café oscuro-negro

  28. Colágeno I: proteína extracelular, predominante en dermis, función estructural b b e a a y b Picrosirius: Colágeno I color amarillo-rojizo e Van Gieson: colágeno I rojo d c c y d Tricromico Masson: colágeno I verde

  29. Colágeno III: o fibras de Reticulina, en dermis perineural, perivascular Impregnación con Nitrato de Plata: fibras de reticulina se tiñen negras

  30. Eosinófilos Tinción Giemsa, eosinófilos se ven rojos

  31. Fibras elásticas HE Orceína ácida de Pinkus/Giemsa: fibras de coloración pardo oscura

  32. Fibrina ambas, Tinción de Picro-Mallory: Fibrina se tiñe rojo claro También PAS

  33. Hemosiderina a Gránulos de Hemosiderina sin teñir, de colora ción amarillo-café birrefringentes a b Ferrocianuro de Potasio de Perls: azul b

  34. b Hongos b b PAS para Criptococo (rojo) a a Mucicarmin para teñir Criptococo: hongos de coloración azul-violácea c Tinción de PAS evidenciando Blastomicosis c c

  35. Hongos II c Tinción de Gomori para Criptococo c a a PAS esporas fungicas b PAS Coccidiomicosis en ambas, hongos se tiñen rojos b

  36. Lípidos sólo en tj fijadoen formalina + cortes por congelación b b Sudan III: adipocitos rojos a a Sudan IV: adipocitos anaranjados c c Sudan black b: Lípidos azul-negruzcos

  37. Mastocitos ambas, Tinción con Azul de Toluidina: gránulos de Mastocitos azul-púrpura (metacromasia)

  38. Mastocitos ambas, Tinción de Giemsa, donde los gránulos de los Mastocitos son teñidos púrpura

  39. Melanina ambas, Tinción de Fontana Masson pigmento melánico se tiñe negro

  40. Principales colorantes

  41. Tricrómico de Masson • Principal Uso: Colágeno. • Tiñe: • Colágeno Verde. • Núcleo, músculo y nervios  Rojo oscuro. • Citoplasma  amarillo

  42. Van Gieson • Principal Uso: Tejido Fibroso • Tiñe: • Colágeno  rojo. • Núcleo  azul negro • Músculos, nervios  amarillos • (+Verhoeff) fibras elásticas  negro

  43. Fontana Masson • Principal Uso: Melanina • Tiñe: • Melanina  Negro.

  44. Plata Metenamina • Principales Usos: Hongos y Cuerpos de Donovan • Tiñe: • Paredes micóticas  Negros. • Cuerpos de Donovan  negro

  45. PAS • Principales Usos: Glucógeno, MPS neutros y Hongos, Membrana basal. • Tiñe: • Glucógeno  Diastasa lábil. • MPS neutros y Paredes micóticas  Diastasa resistentes.

  46. Reacción positiva para glucógeno y polisacáridos neutros. • Reacción positiva sólo para polisacáridos neutros. + DIASTASA

  47. Azul alcián • Principal Uso: Mucopolisacáridos ácidos • Tiñe • Mucopolisacáridos ácidos (mucina) Azul.

  48. Azul de toluidina • Principal Uso: Mucopolisacáridos ácidos • Tiñe • Mucopolisacáridos ácidos  Purpura metacrómico.

  49. Giemsa • Principales usos: Gránulos mastocitarios, MPS ácidos, eosinófilos, leishmanias, médula ósea • Tiñe: • Gránulos mastocitarios, Mucopolisacaridos ácidos  Púrpura. • Eosinófilos, leishmanias  Rojo. Eosinófilos en mucosa gástrica

  50. Ferrocianuro de Potasio de Perls. • Principal Uso: Hemosiderina • Tiñe: • Hemosiderina  Azul

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