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Immunological Laboratory in Clinical Practice: Diagnostic Techniques and Interpretation

Understand the basic and specific immunological laboratory tests, techniques for interaction visualization, and interpretation of results for various diseases. Learn about quantitative and qualitative techniques with practical applications.

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Immunological Laboratory in Clinical Practice: Diagnostic Techniques and Interpretation

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Presentation Transcript

  1. LABORATORIO INMUNOLOGICO EN LA PRACTICA CLINICA

  2. Que solicitamos y cuando?? DIAGNOSTICO PRESUNTIVO LABORATORIO BASICO LABORATORIO INMUNOLOGICO ESPECIFICO

  3. LABORATORIO BASICO HEMOGRAMA VSG (ERS) PROTEINOGRAMA ELECTROFORETICO

  4. LABORATORIO INMUNOLOGICO ESPECIFICO INMUNODEFICIENCIAS ENFERMEDADES INFECCIOSAS ENFERMEDADES ALERGICAS ENFERMEDADES AUTOINMUNES ENFERMEDADES ONCOLOGICAS

  5. Distintas tecnicas para visualizar la Interacción especifica AG- AC

  6. INTERACCION AG- AC EIA (ELISA) PRIMARIAS RADIOCOMPETITIVOS (RIA) INMUNOMARCACION (CITOMETRIA DE FLUJO) IDR SECUNDARIAS AGLUTINACION/ PRECIPITACION INMUNOELECTROFORESIS AC bivalente y AG multivalente Epitope repetitivo o epitopes distintos

  7. PROPIEDADES DE LAS TECNICAS INMUNOLOGICAS • Sensibilidad (prueba positiva en pacientes que tienen la enfermedad)VP • Especificidad (prueba negativa si la enfermedad no esta presente) VN • Técnicas cuantitativas TITULO • Técnicas cualitativas SI/NO • Técnicas semi-cuantitativas

  8. Interacción secundaria

  9. INMUNODIFUSIÓN RADIAL (IDR) Reacción de precipitación en medio gelosado TÉCNICA CUANTITATIVA ¿QUE PUEDO DETERMINAR? • Concentración sérica de IgG, IgA o IgM • Concentración sérica de los componentes del sistema del complemento: C1-C9, factor H, factor I, factor B y C1 inhibidor.

  10. Aglutinación/Precipitación Formación de la red Ag-Ac EFECTO PROZONA Ag particulados: aglutinación Ag solubles: precipitación Ag y Ac deber ser al menos bivalentes y deben estar en concentraciones del orden de mg/ml a fin de visualizar el fenómeno. Suelen ser técnicas de baja sensibilidad.

  11. Aglutinación activa o directa Ag particulado Ac específico ¿PARA QUÉ ?  Detección/titulación de Ac específicos o antígenos  Cuantificación de Ag (IHA) TÉCNICA CUALlTATIVA O SEMI-CUANTITATIVA (cuando se determinan Ac) TÉCNICA CUALITATIVA O CUANTITATIVA (cuando se determinan Ag por IHA o aglutinación reversa) Aglutinación

  12. Determinación de grupos sanguíneos sistema ABO TÉCNICA CUALITATIVA +

  13. BANCOS DE SANGRE(Resolución Ministerial 865/06) el uso de dos técnicas de Elisa (de antígeno de lisado u homogenato total y de antígenos recombinantes) es recomendable.Hemaglutinación indirecta (HAI):Chagas (IgG) • El suero del paciente contiene Ac anti-T.cruzi que inducen la aglutinación de glóbulos rojos recubiertos o sensibilizados con antígenos del parásito INTERPRETACION DE RESULTADOS DILUCIÓN DEL SUERO 2 4 8 16 32 64 128 256 512 Paciente 1 Paciente 2 Paciente 3 Titulación de Ac anti T cruzi

  14. INMUNODEFICIENCIAS • IgG, IgA, IgM .IgE. (ELISA, IDR, PRIST, RAST) • Anticuerpos específicos (difteria, tétanos).(ELISA) • Recuento de linfocitos T: CD3, CD4,CD8.(CITOMETRIA DE FLUJO) • Complemento.(IDR, NEFELOMETRIA, ELISA) • Test de nitroblue de tetrazolio. • Serología para VIH. (ELISA, WESTER BLOT)

  15. GAME ANTICUERPOS ESPECIFICOS DIFTERIA, TETANOS ISOHEMAGLUTININAS INMUNIDADCELULAR INTRADERMOREACCION

  16. SIFILIS ( screening, diagnostico y seguimiento) FTAbs-TPHA -EIA (AGLUTINACION,IF,ELISA) Vdrl (aglutinacion) Utiliza como antígeno cardiolipina. Se informa la dilución máxima positiva de la aglutinación. • Detecta anticuerpos específicos dirigidos contra T. pallidum.Se informa reactivo o no reactivo. Screening y respuesta al tratamiento según el titulo Perduran toda la vida aún cuando el paciente haya resuelto la infección Ambos tipos de anticuerpos son evidenciados a través de ensayos de aglutinación. Titulacion.

  17. INFECCION AGUDA VS CRONICA Ig M Ig G ESPECIFICA SEROCONVERSION Producción de anticuerpos específicos frente a un microorganismo, detectables en el suero, durante el curso de una infección o en respuesta a una inmunización.

  18. Interacción secundaria

  19. ELISA (interacción primaria) Determinación de Ag Detección o titulación de Ac TÉCNICA CUALITATIVA O CUANTITATIVA TÉCNICA CUALlTATIVA O SEMI-CUANTITATIVA

  20. ENFERMEDADES ALERGICAS Cuantificación de IgE total (ELISA) Titulación de IgE específica de Ag Las concentraciones de Ac IgE, totales y específica para un alérgeno, pueden también determinarse por ELISA (semi-cuantitativas).

  21. Ig E SINONIMO DE ALERGIA??

  22. INMUNOMARCACIÓN (interacción primaria) Detección de Ac Titulación de Ac Detección de Ag de superficie o intracelulares Detección de poblaciones celulares ¿PARA QUÉ ? TÉCNICA CUALlTATIVA O SEMI-CUANTITATIVA

  23. Inmunomarcación en portaobjetos Depósito de complejos inmunes Determinación cualitativa de los complejos inmunes depositados en piel, riñón u otros tejidos. Muestra: BIOPSIA. Determinación de presencia de IgG. Determinación de presencia de C3a y/o C5a. Método: inmunofluorescencia indirecta. Inmunomarcación en cortes de riñón Detección de IgG con anti-IgG humana Paciente con Síndrome de Goodpasture

  24. Citometría de flujo • ¿Qué tipo de información obtenemos? • Su tamaño • Su granularidad • La presencia de moléculas de superficie celular e intracelulares (mediante el uso de fluorocromos)

  25. APLICACIONES

  26. ANALISIS DE LOS DATOS Histograma monoparamétrico Histograma biparamétrico(dot plots) Selección de una población mediante la determinación de una región o “gate” para posterior análisis (por ejemplo, células linfoides).

  27. DOT PLOTS

  28. Evaluación de estallido respiratorio TÉCNICA CUALITATIVA Reducción NBT NBT (incoloro) + PMN (activados con PMA) formazán (NBT reducido) AZUL microscopio 95% azules: SANO 20-80% azules: Enf. Granul. Crónica Individuo normal Paciente con EGC

  29. transplante CROSS MATCH CONTRA PANEL CULTIVO MIXTO LINFOCITARIO Detecta la presencia de ANTICUERPOS en contra de otros HLA que están directamente relacionadas con el rechazo de órganos. Las transfusiones, el embarazo y trasplantes previos son situaciones que exponen a un paciente a que se generen dichos Ac. CROSS MATCH CONTRA DADOR

  30. Reacción Mantoux – intradermorreacción (PPD) ¿PARA QUÉ SIRVE? Respuesta a vacuna BCG en niño Evaluación de contacto reciente con TBC en adultos Estudio de la respuesta inmune celular in vivo (pacientes sospechados de padecer IDP) Estudio de pacientes con hipersensibilidad

  31. Western Blot TÉCNICA CUALlTATIVA ALTAMENTE ESPECÍFICA QUE PERMITE DETECTAR Ac O Ag. EN DIAGNÓSTICO SE EMPLEA EXCLUSIVAMENTE COMO TÉCNICA CONFIRMATORIA PARA INFECCIÓN POR HIV Extracción de proteínas SDS-PAGE Transferencia a membranas (reactivo comercial) + anti-IgG humana marcada con enzima + sueros de pacientes Tiras de nitrocelulosa con Ag virales revelado DETECCIÓN DE Ac EN PACIENTES CON ELISA POSITIVO CONFIRMA DIAGNOSTICO

  32. ANTICUERPOS MONOCLONALES

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