DETERMINACI N DE PAR METROS DE LA CONTAMINACI N MICROBIANA PRESENTE EN UN REA DE FABRICACI N DE MEDICAMENTOS EST RILES

2. DETERMINACIÓN DE PARÁMETROS DE LA CONTAMINACIÓN MICROBIANA PRESENTE EN UN ÁREA DE FABRICACIÓN DE MEDICAMENTOS ESTÉRILES A BASE DE ANTIBIÓTICOS ?-LACTÁMICOS

3. ANTECEDENTES CLASIFICACIÓN Y NORMAS DE CUARTOS LIMPIOS Norma Federal 209 E (1.992) Norma Británica 5295 (1.989) Norma ISO 209. Manual de Buenas Prácticas de Manufactura, Serie de Informes Técnicos No 823 (Informe 32) de la OMS (1992) y Guía de Buenas Prácticas de Manufactura de la Comunidad Europea EU.(1997)

4. ANTECEDENTES NORMA FEDERAL 209 E (1.992) Número partículas ? 0.5 ?m / m3. 1963: “Cleanroom and Work Station Requirements, Controlled Environments” Revisiones: 1966(A),1973(B),1987(C),1988(D),1992(E) 209 E: Informa sobre: límites de partículas para especificar la calidad de aire y métodos para verificar dicha calidad.

5. CLASIFICACIÓN DE CUARTOS LIMPIOS (CLEANROOM) FEDERAL STANDAR 209 E

6. CLASIFICACIÓN SEGÚN PARTÍCULAS TRANSPORTADAS POR EL AIRE FEDERAL STANDAR 209 E

7. CLASIFICACIÓN SEGÚN PARTÍCULAS TRANSPORTADAS POR EL AIRE FEDERAL STANDAR 209 E

8. CLASIFICACIÓN SEGÚN PARTÍCULAS TRANSPORTADAS POR EL AIRE FEDERAL STANDAR 209 E

9. ANTECEDENTESNORMA FEDERAL 209 E (1.992) Clasificación de las áreas : As Built At Rest Operational

10.  ANTECEDENTES NORMA BRITÁNICA 5295 (1989) Esta norma está dada en 5 partes: Parte 0: Introducción general, términos y definiciones para áreas limpias y dispositivos de aire limpio. Parte 1: Especificaciones para áreas limpias y dispositivos de aire limpio Parte 2: Métodos para especificar el plan, construcción y funcionamiento de áreas limpias y dispositivos de aire limpio. Parte 3: Guía de procedimientos operacionales y disciplinas aplicables a áreas limpias y dispositivos de aire limpio.

11.  Parte 4: Especificaciones para el monitoreo de áreas limpias y dispositivos de aire limpio para demostrar el cumplimiento con BS 5295 (1.989). Los cuartos se clasifican según: As Built Unmanned Manned

12. CLASIFICACIÓN AMBIENTAL SEGÚN LA NORMA BRITISH STANDARD 5295:1989

13. ANTECEDENTES NORMA ISO 209 Documento mundial internacional Clasificación de partículas Cn = 10N x (0.1/D)2.08 Clasificación y estándar microbiológico

14. CLASIFICACIÓN PARA CUARTOS LIMPIOS (CLEANROOMS) Y ZONAS LIMPIAS ISO 209

15. ANTECEDENTES MANUAL DE BUENAS PRACTICAS DE MANUFACTURA SERIE DE INFORMES TÉCNICOS NO. 823 (INFORME 32) DE LA OMS Y GUÍA DE BUENAS PRÁCTICAS DE MANUFACTURA DE LA COMUNIDAD EUROPEA EU Enero 1997. Aparte del estándar relevante para designar las áreas limpias Para la manufactura de productos estériles normalmente existen 4 grados que se designan: Grado A: La zona local para alto riesgo de operaciones como llenado aseptico Grado B: En caso de preparaciones asépticas, alrededores zona A. Grados C y D: Almacenamiento

16. CLASIFICACIÓN DE ZONAS DE CUARTOS LIMPIOS MANUAL DE BUENAS PRACTICAS DE MANUFACTURA

17. LIMITES MICROBIOLÓGICOS PARA LA CLASIFICACIÓN DE LOS CUARTOS LIMPIOS MANUAL DE BUENAS PRÁCTICAS DE MANUFACTURA

18. NIVELES DE ACEPTACIÓN EN LA CONTAMINACIÓN MICROBIOLÓGICA

19. NIVELES DE ACEPTACIÓN EN LA CONTAMINACIÓN MICROBIOLÓGICA

20. NIVELES DE ACEPTACIÓN EN LA CONTAMINAIÓN MICROBIOLÓGICA

21. NIVELES MICROBIOLÓGICOS DE CONTAMINACIÓN DE AIRE PARA AREAS LIMPIAS SEGÚN LAS NORMAS

22. NIVELES MICROBIOLÓGICOS DE CONTAMINACIÓN DE AIRE PARA AREAS LIMPIAS SEGÚN CADA NORMA

23. ANTECEDENTESANTIBIÓTICOS ?-LACTÁMICOS Los antibióticos ?-Lactámicos inhiben la síntesis de la pared de peptidoglucano de la bacteria. La ceftriazona Cefalosforinico de tercera generación. Menos activa contra cocos grampositivos. Mas activa contra Enterobacterias y cepas productoras de ? - lactamasa Una sola dosis diaria ha sido eficaz contra otras infecciones por mos. productores de penicilinasa.

24. ANTECEDENTESREQUERIMIENTOS DE INSTALACIÓN Instalaciones Equipo Sistemas de apoyo crítico: Gas Nitrógeno Agua Aire: Definir: Proceso productivo Parámetros de diseño / Clase de aire requerida Condiciones ambientales externas Personal

25. ANTECEDENTESMONITOREO MICROBIOLÓGICO CLASE DE AREAS: Areas de Procesamiento Aséptico (Clean Room). Areas de preparación de soluciones parenterales de gran y pequeño volumen. Controlar: Aire Superficies (instalación - Equipo) Sistemas de ventilación Operarios

26. ANTECEDENTESESTABLECIENDO UN PROGRAMA PROGRAMA DE MONITOREO AMBIENTAL. Incluye: Localización de las áreas de muestreo Frecuencia Métodos de ensayo aceptables Niveles de alerta y acción Plan de acción con documentación Detección-Identificación de microorganismos

27. OBJETIVO GENERAL Determinar parámetros de la contaminación microbiológica del área estéril de producción de medicamentos a base de antibióticos ?-Lactámicos para caracterizar cada una de las subáreas e implementar un sistema de monitoreo ambiental.

28. OBJETIVOS ESPECÍFICOS Determinar el flujo de actividades que se realiza en el área estéril a fin de establecer el sistema de muestreo. Establecer protocolos para los ensayos microbiológicos del área estéril de producción de medicamentos a base de antibióticos ? - lactámicos Determinar puntos críticos de control (PCC) microbiológicos del área estéril Determinar límites de confianza y niveles de aceptación para cada parámetro evaluado en el área estéril Establecer criterios microbiológicos de aprobación y de rechazo del área estéril, retando los resultados de los análisis contra los limites de confianza y niveles de aceptación ya establecidos.

29. OBJETIVOS ESPECIFICOS Clasificar las zonas del área estéril de acuerdo a la función que cumplen en la producción, según el grado de contaminación microbiológica. Determinar la posibilidad de la existencia de microorganismos patógenos en el ambiente del área estéril. Implantar el monitoreo de control ambiental de contaminación microbiológica en el área estéril, en donde se establecen frecuencias de muestreo, puntos críticos, recursos (medios, equipos, personal). Elaborar Procedimientos Operativos Estándar del sistema de monitoreo ambiental microbiológico.

30. OBJETIVOS ESPECIFICOS Dar recomendaciones sobre manejo de procedimientos, minimización de riesgos microbiológicos y adecuación de instalaciones, para asegurar la continuidad del plan del monitoreo ambiental. Documentar los límites de aceptación, caracterización e implantación del sistema de monitoreo ambiental.

31. JUSTIFICACIÓN Calidad , pureza y seguridad. Por reglamentación legal el Instituto Nacional de Vigilancia de Medicamentos y Alimentos (INVIMA), es de obligatorio cumplimiento implementar la Buenas Prácticas de Manufactura (BPM) de acuerdo a lo establecido en el artículo 12 del decreto 677 de 1995, para todas las plantas farmacéuticas de Colombia. Elaboración, manipulación y producción de preparados estériles: antibióticos. Debido a la obligación del cumplimiento de las BPM, la industria farmacéutica se ve sujeta a reestructurar su planta física. El área en estudio es una planta nueva de fabricación de medicamentos estériles a base de antibióticos ?-lactámicos, en donde se debe empezar a establecer monitoreos y límites de control microbiológico ambiental. Certificación ante el INVIMA en BPM.

32. SELECCIÓN DE RECURSOS(MATERIALES) Cajas de petri de 90 mm?, con Agar Casoy y Agar Saboraud Hisopos Caldo de Peptona de Caseina-Lecitina-Polisorbato Placas Count-Tact de 55 mm ?, con Agar Triptona Soya Irradiado Aplicador Count-Tact Soporte en acero inoxidable Metodo de identificacion rapida API Equipos de Laboratorio

33. DESARROLLO DEL PROYECTODescripción del área

34. DESARROLLO DEL PROYECTOMETODOLOGIADescripción del área

35. DESARROLLO DEL PROYECTOMetodología Se realizaron muestreos diarios antes, al tiempo y después del proceso de producción en el área en estado de reposo y en operación, durante un mes para recuento de microorganismos mesófilos aerobios, mohos y levaduras. AMBIENTE INTERNO Y SISTEMAS DE VENTILACIÓN: Método de sedimentación en placa,1 hora de exposición, en cajas de petri de 90 mm ?, con Agar Casoy y Agar Saboraud. El sistema de ventilación se muestreo a 15 cm de distancia.

36. DESARROLLO DEL PROYECTOMetodología El número de puntos de muestreo debe ser el menor valor entre A y B A. A = área en m2/25 B. B = área en m2/(NC)0.5 A= área del piso de la zona limpia en m2 NC=clasificación numérica del área limpia (ej. Clase 100) 0.5= Tamaño de la partícula C = El menor valor entre A y B + 1 Los puntos de muestreo deben ser mínimo de dos (2) para cualquier zona limpia. Fuente FDS 209E

37. DESARROLLO DEL PROYECTOMetodología SUPERFICIES DE INSTALACION Y UNIFORMES: Método de contacto con placas, Count-Tact de 55 mm ?, con Agar Triptona Soya Irradiado, recuperando microorganismos mesófilos aerobios y hongos al mismo tiempo, estandarizando la toma de muestra con una presión de 500 ?50 g , durante 10 segundos.

38. DESARROLLO DEL PROYECTOMetodología EQUIPOS: Método del hisopo impregnado con Caldo de Peptona de Caseina-Lecitina-Polisorbato, sobre un área de 25 cm2, y sembrando sobre cajas de petri de 90 mm ?, con Agar Casoy y Agar Saboraud.

39. DESARROLLO DEL PROYECTOMetodología DETERMINACIÓN DE PUNTOS CRÍTICOS DE CONTROL (PCC) DE CONTAMINACIÓN MICROBIOLÓGICA

40. DESARROLLO DEL PROYECTOMetodología LÍMITE ÓPTIMO, DE ALERTA Y DE ACCIÓN, ANÁLISIS ESTADÍSTICO EMPLEADO MUESTREO DE ÁREAS:es no probabilístico, denominado “Muestreo por Juicio” o de “expertos” ANÁLISIS DE FRECUENCIAS: Frecuencia Relativa de Cada Clase=A/B LIMITE ÓPTIMO: LIMITE DE ALERTA LIMITE DE ACCIÓN:

41. DESARROLLO DEL PROYECTOMetodología APROBACIÓN Y RECHAZO DEL ÁREA Reto de los resultados de los muestreos microbiológicos contra los límites óptimo, de alerta y acción. Diseño de formato de aprobación y rechazo, evaluación del diseño, mantenimiento e higienede cada una de las zonas del área.

42. DESARROLLO DEL PROYECTOMetodología CLASIFICACIÓN DE ZONAS DEL AREA Se realizó con los resultados obtenidos de los muestreos microbiológicos de acuerdo a la función que cumple cada zona y comparando la contaminación microbiológica con los límites establecidos por las normas explicadas.

43. DESARROLLO DEL PROYECTOMetodología IDENTIFICACIÓN Y RECUENTO DE MICROORGANISMOS BACTERIAS Exámen macroscópico de las colonias Exámen microscópico: Coloración de Gram Bioquímicas:API STAPH MOHOS Exámen macroscópico de las colonias Exámen microscópico: Azul de Lactofenol - Técnica de Rush-Munro: Identificación de la especie por claves

44. ANÁLISIS DE RESULTADOSFLUJO DE ACTIVIDADES EN EL ÁREA

45. ANÁLISIS DE RESULTADOSFLUJO DE ACTIVIDADES EN EL ÁREA

46. ANÁLISIS DE RESULTADOSFLUJO DE ACTIVIDADES EN EL ÁREA

47. ANÁLISIS DE RESULTADOSFLUJO DE ACTIVIDADES EN EL ÁREA

48. ANÁLISIS DE RESULTADOSMUESTREO MICROBIOLÓGICO

49. ANÁLISIS DE RESULTADOSMUESTREO MICROBIOLÓGICO, PUNTOS CRÍTICOS Y LÍMITES ÓPTIMOS, DE ALERTA Y DE ACCIÓN.

50. ANÁLISIS DE RESULTADOSMUESTREO MICROBIOLÓGICO, PUNTOS CRÍTICOS Y LÍMITES ÓPTIMOS, DE ALERTA Y DE ACCIÓN.

51. ANÁLISIS DE RESULTADOSLIMITES OPTIMO, DE ALERTA Y ACCION PARA AMBIENTES AJUSTADOS A LAS NORMAS. UFC/ hora

52. ANÁLISIS DE RESULTADOS LIMITES OPTIMO, DE ALERTA Y ACCION PARA SUPERFICIES AJUSTADOS A LAS NORMAS. UFC / 25 cm2

53. ANÁLISIS DE RESULTADOSLIMITES OPTIMO, DE ALERTA Y ACCION PARA SUPERFICIES DE EQUIPOS AJUSTADOS A LAS NORMAS. UFC/25cm2

54. ANÁLISIS DE RESULTADOSLIMITES OPTIMO, DE ALERTA Y ACCION PARA UNIFORMES DESPUES DEL USO AJUSTADOS A LAS NORMAS. UFC/25 cm2

55. ANÁLISIS DE RESULTADOSMUESTREO MICROBIOLÓGICO, PUNTOS CRÍTICOS Y LÍMITES ÓPTIMOS, DE ALERTA Y DE ACCIÓN.

56. ANÁLISIS DE RESULTADOS LIMITES OPTIMO, DE ALERTA Y ACCION PARA DUCTOS AJUSTADOS A LAS NORMAS.UFC/hora

57. ANÁLISIS DE RESULTADOSCRITERIOS DE APROBACIÓN Y RECHAZO DEL AREA ESTERIL DE ANTIBIOTICOS ?-LACTAMICOS.

58. ANÁLISIS DE RESULTADOSCRITERIOS DE APROBACIÓN Y RECHAZO DEL AREA ESTERIL DE ANTIBIOTICOS ?-LACTAMICOS.

59. ANÁLISIS DE RESULTADOSCLASIFICACIÓN ACTUAL DE ZONAS DEL ÁREA ESTÉRIL

60. ANÁLISIS DE RESULTADOSIDENTIFICACIÓN Y RECUENTO DE MICROORGANISMOS Staphylococcus xylosus 99.4% Staphylococcus se encuentran generalmente en la piel y las mucosas del hombre y otros animales. Staphylococcus xylosus: seres humanos, primates no humanos y causa de infecciones.

61. ANÁLISIS DE RESULTADOSIDENTIFICACIÓN Y RECUENTO DE MICROORGANISMOS Micrococcus kristinae 99.9 % Micrococccus se encuentran en el ambiente y como flora transitoria en la piel del hombre y varios otros mamíferos. Se propusieron varios cambios en la taxonomía de estos microorganismos, como el genero M. Kristinae, por Kocuria kristinae

62. ANÁLISIS DE RESULTADOSIDENTIFICACIÓN Y RECUENTO DE MICROORGANISMOS Aspergillus fumigatus Exámen macroscópico de la colonia: Color demateáceo:azul - verdoso Forma de carpeta Bordes irregulares Tamaño variable Aspecto aterciopelado Reverso amarillo Olor a tierra seca Exámen microscópico: Azul de Lactofenol De una célula troncal, sale un conidióforo sin ramificar que termina en una vesícula que origina el esterigma en forma de botella. En un esterigma secundario se desarrollan cadenas de conidios en forma de abanicos.