血糖浓度测定

生物化学实验 CQMU 血糖浓度测定 P、105 生物化学与分子生物学实验室 2008.09

实验目的 1．学习用葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度的原理和方法。 2．掌握分光光度计的原理和操作。

实验原理 本实验用GOD-POD试剂盒测定血糖，其原理为：葡萄糖氧化酶（glucose oxidase，GOD）利用氧和水将血清中葡萄糖氧化成葡萄糖酸，并产生过氧化氢。 GOD 葡萄糖 + O2 + H2O 　葡萄糖酸 + H2O2

H2O2 + 苯酚 + 4 - 氨基安替比林醌类化合物 (红色) + H2O POD 过氧化物酶（peroxidase，POD）将H2O2分解为水和氧，产生的氧使4 - 氨基安替比林和酚缩合为红色醌类化合物: 红色的深浅与[G]成正比,可用比色法测定样品和标准G溶液的A值,计算出样品的G mmol/L。

实验步骤 （一）动物准备及取血：取饥饿16小时正常家兔一只（2 kg ~ 3 kg），以耳缘静脉取血，先仔细剪去放血部位耳毛，勿剪破皮肤，用湿棉球反复拭净耳部，再用二甲苯擦拭兔耳朵皮肤，使其血管充血，再用棉球擦干，在放血部位涂一薄层凡士林，再用三菱针刺破耳沿静脉放血，取完后用干棉球压迫血管止血。分离血清。

（二）测定血糖浓度 1．取试管4支，按下表操作：混匀各管，放37℃水浴中保温15min，取出冷却,在波长505nm以空白管调零读取标准管和测定管光吸收值。

血糖(mmol/L)= ×标准管浓度 测定管吸光度标准管吸光度 2. 计算正常参考值： 3.9-6.1mmol/L

临床意义 分生理性或病理性升高和降低1．生理性或暂时性高血糖：餐后1～2h、注射葡萄糖、输葡萄糖液后、情绪紧张时。2．生理性或暂时性低血糖：运动后、饥饿时、注射胰岛素后、妊娠、哺乳期、服降糖药后。

3．病理性高血糖： (1)糖尿病：因胰岛素分泌不足。当空腹血糖水平达7.2-11mmol／L(130-200mg／dl)时可疑为糖尿病；当血糖水平超过11mmol／L(200mg／dl)时可诊断为糖尿病。(2)使血糖升高的激素分泌增加：如垂体前叶机能亢进、肾上腺皮质机能亢进、甲亢,嗜铬细胞瘤等

(3)脑外伤、脑出血、脑膜炎等使 颅内压增高，刺激血糖中枢，引起血糖升高。(4)脱水：如呕吐、腹泻、发高烧等，引起血糖轻度增高(7.2—7.8mmol／L)。(5)麻醉、窒息、肺炎、急性传染病、癫痫、紫痫等疾病可加速肝糖原分解，使血糖增高

4．病理性低血糖：(1)胰岛素分泌过多：如胰岛β细胞瘤。(2)升高血糖激素分泌减少：如垂体机能减退、肾上腺机能减退、甲状腺机能减退。(3)血糖来源减少,肝糖原贮存不足4．病理性低血糖：(1)胰岛素分泌过多：如胰岛β细胞瘤。(2)升高血糖激素分泌减少：如垂体机能减退、肾上腺机能减退、甲状腺机能减退。(3)血糖来源减少,肝糖原贮存不足如长期营养不良、肝炎、肝坏死、肝癌、糖原累积病等。

实验材料与仪器 1．仪器 721-分光光度计，电炉，水浴锅。 2．血糖试剂盒包括酶试剂：葡萄糖氧化酶过氧化物酶磷酸盐缓冲液（pH7.0） 4-氨基安替比林酚试剂：酚

思考题 1．为什么要在饥饿条件下采血？ 2．为什么阿狄森氏病会出现低血糖？ 3．在实验操作过程中有哪些因素可造成血糖测定结果准确？如何纠正？

Let's begin！

血糖浓度测定

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