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DNA 的粗萃取

DNA 的粗萃取. 植物部分： 奇異果、洋蔥 動物部分： 豬肝、雞血. DNA 在細胞的哪裡？. ( 一 ) 細胞核內 — 染色體 DNA ( 二 ) 粒線體內 — 粒線體 DNA ( 三 ) 葉綠體內 — 葉綠體 DNA ( 少數植物細胞有 ). 實驗設計. 植物細胞與動物細胞的區別？ -- 細胞壁的有無. 動物細胞. 植物細胞. 細胞成分. 細胞壁成分：纖維素 細胞膜成分：磷脂質. 如何抽取染色體 DNA. 1 . 動物細胞打破細胞膜、核膜。 ( 使用洗碗精去除油脂 — 破壞膜 ) 2. 植物細胞打破細胞壁 ( 果汁機打碎 )

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DNA 的粗萃取

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Presentation Transcript

  1. DNA的粗萃取 植物部分：奇異果、洋蔥 動物部分：豬肝、雞血

  2. DNA在細胞的哪裡？ (一)細胞核內—染色體DNA (二)粒線體內—粒線體DNA (三)葉綠體內—葉綠體DNA (少數植物細胞有)

  3. 實驗設計 植物細胞與動物細胞的區別？ --細胞壁的有無

  4. 動物細胞

  5. 植物細胞

  6. 細胞成分 細胞壁成分：纖維素 細胞膜成分：磷脂質

  7. 如何抽取染色體DNA 1.動物細胞打破細胞膜、核膜。 (使用洗碗精去除油脂—破壞膜) 2.植物細胞打破細胞壁(果汁機打碎) 、細胞膜 、核膜(使用洗碗精去除油脂—破壞膜)。

  8. 如何去除雜質—蛋白質 使用富含蛋白酶的物質 —鳳梨汁(富含蛋白酶以分解蛋白質) (亦可用木瓜汁代替)

  9. 植物DNA粗萃取的步驟--奇異果 1.將奇異果削皮+切丁放入果汁機中，加水適度打碎以破壞細胞壁。(100c.c./一顆) 2.將打好的果汁及果肉一起倒入燒杯中(50c.c.)加入2.5c.c的洗碗精。用玻棒攪拌五分鐘使其混合均勻(破壞細胞膜及核膜)。 3.加入5c.c.的濃食鹽水(5M)並用玻棒攪拌均勻。 4.取來新鮮現榨的鳳梨汁5c.c.加入其中並持續攪拌至少五分鐘(分解部分蛋白質)。 5.以四層紗布過濾上述的混合液此時DNA存於濾下來的水溶液中。 6.收集過濾下來的水溶液約15c.c.放入乾淨的50c.c.量筒中。 7.沿著量筒邊緣慢慢倒入30c.c.的95%冰酒精於水溶液的上層(酒精為DNA水溶液的兩倍體積)。此時在酒精和水溶液的交界處就會慢慢出現如棉絮般的白色物質，這就是我們要的DNA囉！

  10. 動物DNA粗萃取的步驟—雞血球 1.將沉澱下來的雞血上清液(血漿)去除(可用塑膠吸管)。 2.加入10c.c.的蒸餾水混勻，並倒入50ml的量筒內。 3.加入2.5c.c的洗碗精，用玻棒攪拌五分鐘使其混合均勻。(破壞細胞膜及核膜)。 4.加入1c.c.的濃食鹽水(5M)並用玻棒攪拌均勻。 5.取來新鮮現榨的鳳梨汁5c.c.加入其中並持續攪拌至少五分鐘(分解部分蛋白質)。 6.以四層紗布過濾上述的混合液此時DNA存於濾下來的水溶液中。 7.收集過濾下來的水溶液約10c.c.放入乾淨的50c.c.燒杯中。 8.沿著量筒邊緣慢慢倒入25c.c.的95%冰酒精於水溶液的上層(酒精為DNA水溶液的兩倍體積)。此時在酒精和水溶液的交界處就會慢慢出現如棉絮般的白色物質，這就是我們要的DNA囉！

  11. 雞血的製備 一隻雞的血(約180ml) +100ml的10%檸檬酸鈉(抗凝血) ◎為何用雞血而不用人血？ 因為鳥類成熟的紅血球具細胞核 ◎為何檸檬酸鈉可抗凝血？ 因為其可將鈣離子結合， 而干擾凝血酶的活化

  12. 加入95%冰酒精為何DNA析出？ (一)DNA在0.14M食鹽濃度時 ，溶解度最低。

  13. 加入95%冰酒精為何DNA析出？ (二)冷卻的酒精對DNA分子的 凝聚效果較佳。

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