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1. Distância Genética 68% 41% 29% 57% 64% 57% 41% 42% 34% 100% ANÁLISE GENÉTICA DE DIFERENTES NINHOS DE MeliponarufiventrisLEPELETIER, 1836 (HYMENOPTERA, MELIPONINA) EM ÁREAS DE CERRADO EM MINAS GERAIS Bruno Ferreira Bartelli¹,3, Alessandra Novaga Alves2, Silvia Helena Sofia2, Fernanda Helena Nogueira-Ferreira1 1Laboratório de Ecologia e Comportamento de Abelhas - Universidade Federal de Uberlândia - Uberlândia/MG 2Laboratório de Genética e Ecologia Animal - Universidade Estadual de Londrina - Londrina/PR 3brunobartelli@yahoo.com.br INTRODUÇÃO • Análise dos dados. Programas TFPGA 1.3 e Arlequin 3.01. Tabela 1. Descrição dos locos microssatélites, sequências dos primers (F: foward e R: reverse) e temperatura de anelamento (Ta) e concentração ([ ]) de DNA utilizadas nos experimentos. Queimadas Desmatamento Fragmentação do habitat Uso indiscriminado de inseticidas Ação predatória de meleiros Meliponarufiventris até recentemente esteve incluída na lista das espécies ameaçadas de extinção da fauna de Minas Gerais A B Causas Variabilidade genética Tamanho populacional + Endogamia e ocorrência de deriva genética (pequenas populações) Autoria da foto: IB/USP (Projeto VINCES/FAPESP) D E C F ib.usp.br ib.usp.br ib.usp.br eco.ib.usp.br Figura 1.Meliponarufiventris: (A) Operária na entrada de um ninho natural; (B) Operária em um pote de alimento; (C) Operária; (D – E) Macho; (F) Rainha fisogástrica. Estudos sobre a diversidade genética de populações naturais de abelhas sem ferrão Estabelecimento de estratégias de conservação desse importantíssimo grupo de polinizadores *DNA estoque diluído RESULTADOS E DISCUSSÃO Importância Tabela 2. Tamanho (em pares de bases, pb) dos alelos encontrados e frequências alélicas (Fa) para os sete locos microssatélites analisados. • 12 alelos (Ā = 1,71) • P = 24,18% • He = 0,124 • ΦST = 0,26153 • Baixa variação genética? • OBJETIVO: Incrementar o conhecimento sobre a diversidade genética de M. rufiventris através da investigação da estrutura genética e das relações de parentesco entre diferentes ninhos da espécie em áreas de Cerrado. A B C MATERIAL E MÉTODOS • Áreas de estudo. Três áreas naturais de Cerrado em Minas Gerais, localizadas nos municípios de Araguari, Córrego Danta e Guimarânia. • Análise de 13 ninhos (9de Araguari, 3de Córrego Danta e 1de Guimarânia) de M. rufiventris(Figura 1) envolvendo 5 operárias por ninho e utilizando sete pares de primers(fowardereverse) de microssatélites desenvolvidos para MeliponabicolorLepeletier, 1836. Figura 2. Padrão eletroforético em gel de poliacrilamida 8% mostrando alguns dos genótipos observados para os locos (A) Mbi218, (B) Mbi259 e (C) Mbi254. Tabela 3.Genótipos observados para os locos polimórficos de microssatélites (Mbi218, Mbi254 e Mbi259) em cada um dos ninhos de Meliponarufiventris coletados em Araguari-MG (Ar1 – Ar9), Córrego Danta-MG (CD1 – CD3) e Guimarânia-MG (Gm). Figura 3.Dendrograma UPGMA construído com base nas distâncias genéticas (REYNOLDS et al., 1983), calculadas a partir de dados dos sete locos microssatélites analisados, entre os treze ninhos de Meliponarufiventris coletados em Araguari-MG (1 – 9), Córrego Danta-MG (10 – 12) e Guimarânia-MG (13). *Baseada em protocolos de Waldschmidt et al. (1997) e Sofia et al. (2005), com algumas variações. *1Reações de amplificação produzidas em um volume final de 15 μL, contendo: - 2 μL de DNA estoque diluído em diferentes concentrações (Tabela 1); - Água bidestilada; - 1,5 μL de tampão de reação 10x (Biotools); - 1 U de enzima DNA polimerase (TaqBiotools); - 0,75 μL de cada primer (foward e reverse) a 10 μM; - 1,5 μL de cada dNTP a 2,5 mM; - 4,5 μL de MgCl2 a 3,0 mM. Reações constando de: 94ºC para uma desnaturação inicial (4 min); mais 35 ciclos de 94ºC (30 s), temperaturas específicas de anelamento para cada primer (Tabela 1), durante 20 s, 1 min a 72ºC para extensão da cadeia; e uma extensão final a 72ºC (10 min). REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS REYNOLDS, J.; WEIR, B. S.; COCKERHAM, C. C. Estimation of the coancestry coefficient: basis for a short-term genetic distance. Genetics, v. 105, p. 767-779. 1983. SOFIA, S. H.; PAULA, F. M.; SANTOS, A. M.; ALMEIDA, F. S.; SODRÉ, L. M. K. Genetic structure analysis of Eufrieseaviolacea(Hymenoptera, Apidae) populations from southern Brazilian Atlantic forest remnants. Genetics and Molecular Biology, v. 28, p. 479-484. 2005. WALDSCHIMDT, A. M.; SALOMÃO, T. M. F.; BARROS, E. G.; CAMPOS, L. A. O. ExtractionofgenomicDNA fromMeliponaquadrifasciata(Hymenoptera: Apidae, Meliponinae). Brazilian Journal of Genetics, v. 20, p. 421-423. 1997.