150 likes | 154 Vues
TB-LAMP Office of Disease Prevention and control 1, Chiang Mai, Thailand. 28 May 2019. Reference Laboratory ODPC1 Chiang Mai. Loop-mediated isothermal amplification : LAMP. เป็นวิธีเพิ่มปริมาณสารพันธุกรรม (DNA) สำหรับการตรวจหาเชื้อวัณโรค (MTB). 1.
E N D
TB-LAMP Office of Disease Prevention and control 1, Chiang Mai, Thailand 28 May 2019 Reference Laboratory ODPC1 Chiang Mai
Loop-mediated isothermal amplification : LAMP เป็นวิธีเพิ่มปริมาณสารพันธุกรรม (DNA) สำหรับการตรวจหาเชื้อวัณโรค (MTB) 1 ใช้ Primer 4 หรือ 6 ชุดที่จำเพาะกับ DNA Target 2 มีความแม่นยำสูง วิธีทำง่าย รวดเร็ว ราคาถูก 3 4 สามารถอ่านผลได้ด้วยตาเปล่า Reference Laboratory ODPC1 Chiang Mai
บทความ : ประสิทธิภาพของ isothermal amplification วิธีใหม่ในการตรวจวัณโรคได้ผลเร็ว เปรียบเทียบระหว่าง non-LAMP และ LAMP test กรมวิทยาศาสตร์การแพทย์
TB-LAMP Method Reference Laboratory ODPC1 Chiang Mai
การเตรียมตัวอย่าง - นำเสมหะใส่ในภาชนะที่มีพร้อมในชุดการทดสอบ - นำเสมหะมาต้มที่ 90 °c นาน 5 นาที เพื่อ inactivate และแตกเซลล์ mycobacterium - เป็นขั้นตอนการทำให้เซลล์แตกเพื่อให้ได้ DNA ของเชื้อออกมา (วิธีนี้เป็นวิธีทดสอบโดยสังเขปเท่านั้น ควรศึกษาวิธีโดยละเอียดจากคู่มือที่แนบมากับชุดน้ำยา) Reference Laboratory ODPC1 Chiang Mai
การทำ DNA ให้บริสุทธิ์ โดยใส่ใน Adsorbent tube ซึ่งมี สารที่จับกับเศษเซลล์เพื่อให้ได้ DNA ให้บริสุทธิ์ (ใช้เวลาประมาณ 5 นาที) (วิธีนี้เป็นวิธีทดสอบโดยสังเขปเท่านั้น ควรศึกษาวิธีโดยละเอียดจากคู่มือที่แนบมากับชุดน้ำยา) Reference Laboratory ODPC1 Chiang Mai
การเพิ่มประมาณ DNA - Incubate ตัวอย่างใน Heat Box ที่อุณหภูมิ ประมาณ 60-65 oC - ใช้เวลาประมาณ 40 นาที (วิธีนี้เป็นวิธีทดสอบโดยสังเขปเท่านั้น ควรศึกษา วิธีโดยละเอียดจากคู่มือที่แนบมากับชุดน้ำยา) Reference Laboratory ODPC1 Chiang Mai
การอ่านผล ดูการเรืองแสง Fluorecentภายใต้ black light ด้วยตาเปล่า (วิธีนี้เป็นวิธีทดสอบโดยสังเขปเท่านั้น ควรศึกษาวิธีโดยละเอียดจากคู่มือที่แนบมากับชุดน้ำยา) DNA Extraction (PURE) รายงานผล TB + - Reference Laboratory ODPC1 Chiang Mai
TB-LAMP Facility 1.ความพร้อมเรื่องสถานที่ ห้องเตรียมตัวอย่าง เนื่องจากขั้นตอนนี้ เชื้อยังมีชีวิตอยู่ ต้องทำใน Biosafety Cabinet (เช่นเดียวกับ การเตรียมตัวอย่างทำ Xpertและการทำ AFB) Reference Laboratory ODPC1 Chiang Mai
TB-LAMP Facility 1.ความพร้อมเรื่องสถานที่ ห้องทำ Amplification - ควรเป็นห้องแยกจากห้องอื่นๆ - แม้จะใช้อุปกรณ์เพียงเล็กน้อย แต่ต้องเน้นเรื่องความสะอาด เนื่องจาก DNA ที่สกัดได้นั้นมีความ เบา ฟุ้งกระจายง่าย และอาจเกิดการ ปนเปื้อนไปยังตัวอย่างอื่นๆ Reference Laboratory ODPC1 Chiang Mai
TB-LAMP Facility 2.ความพร้อมเรื่องบุคลากร • ต้องเป็นบุคลากรที่มีความชำนาญ เนื่องจาก • การเติมสารต่างๆ ใช้ปริมาณน้อยมากๆ มีความเสี่ยงในการเติมสารขาดหรือเกินได้ Reference Laboratory ODPC1 Chiang Mai
TB-LAMP Facility 3.ความพร้อมเรื่องอุปกรณ์ • ใช้อุปกรณ์หลักเพียงเครื่องให้ความร้อน • (Heat Box หรือ Water Bath) และ Auto Pipette ดูดสารซึ่งเป็นอุปกรณ์ที่ห้องปฏิบัติการโรงพยาบาล • ส่วนใหญ่มีใช้อยู่แล้ว Reference Laboratory ODPC1 Chiang Mai
เปรียบเทียบข้อดี-ข้อเสีย LAMP/Xpert/AFB
เปรียบเทียบข้อดี-ข้อเสีย LAMP/Xpert/AFB * หมายเหตุ เป็นข้อมูล ณ วันที่นำเสนอ
Office of Disease Prevention and Control 1, Chiang Mai Thank You For Attention Reference Laboratory ODPC1 Chiang Mai