1 / 12

IgG

Биотехнологические методы получения иммуноглобулинов и применение их в научных исследованиях и медицине. IgG. Гибридомная технология. Методика получения лимфоидных гибридом, позволяющая получать моноклональные антитела практически на любой антиген в необходимых количествах.

roy
Télécharger la présentation

IgG

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Биотехнологические методы получения иммуноглобулинов и применение их в научных исследованиях и медицине. IgG

  2. Гибридомная технология. • Методика получения лимфоидных гибридом, позволяющая получать моноклональные антитела практически на любой антиген в необходимых количествах. • Технология лимфоидных гибридом была разработана в 1975 году Мильштейном и Келлером • 1984 году Келлер и Мильштейн были удостоены Нобелевской премии.

  3. Гибридомная технология. Гибридомная технология строилась на основе следующих разработок: • 1) имелись линии миеломных клеток мышей balb/c (дефектные по некоторым ферментам метаболизма нуклеиновых кислот) • 2) Линии этих раковых клеток-носителей, имели дефект гена кодирующий одтн из ферментов (тимидинкиназе (ТК) или гипоксантингуанинфосфорибозилтрансферазе (ГГФРТ)) • 3) Технология слияния клеток с помощью вирусов (вирус Сендай) и полиэтиленгликоля

  4. Гибридомная технология.

  5. Гибридомная технология.

  6. Конструирование комбинаторной библиотеки Фаговый дисплей. Натуральные библиотеки антител - наивные библиотеки (naïve library) - иммунные библиотеки (immune library) Collect RNA Convert RNA to DNA PCR amplify antibody genes Light Chain genes Heavy Chain Genes

  7. E.coli TG1 E.coli TG1 E.coli TG1 E.coli TG1 E.coli TG1 Ori M13 PlacZ RBS Vh Vl pHEN2 His Apr pIII ColE1 Конструирование комбинаторных библиотек • Фаговый дисплей Линкер Ser(Gly4Ser)2AlaArgGlySerGly4Ser

  8. Фаг M13 Фаговый дисплей.

  9. Vh Vl Фаговый дисплей Получение индивидуальных одноцепочечных антител Несупрессорные штаммыE.coli: C-myc C-myc 6×His 6×His VhVl pIII Vl Vh Vh VlpIII TAG TAG Gln amber аминокислота стоп-кодон Одноцепочечное антитело ковалентно связано с белком рIII фаговой частицы

  10. Фагмида Фаг-помощник Геном фага Фагмида Фагмида Инфицирование E.coli фагом-помощником Фаговый дисплей

  11. Фаговый дисплей Аффинная селекция (биопеннинг) Следующий раунд Элюция V V V V V V V V V V антиген антиген Амплификация в E.coli

  12. Ренатурирование in vitro Плазмида Агрегировавшие АТ Цит. тельце включения Секреция Функциональное scFv Частичный лизис внешней мембраны Функциональное scFv Продукция антиген-связывающих фрагментов антител в E.coli Фаговый дисплей.

More Related