E N D
38. Exemple dune immunoraction sandwich en 4 tapes avec application successive :
1 de lanticorps primaire
2 dun anticorps secondaire, ajout en concentration leve de faon ce que cet anticorps se fixe prfrentiellement par un seul bras sur lanticorps primaire, laissant lautre bras capable de fixer lanticorps tertiaire
3 un anticorps tertiaire dirig contre le traceur
4 le traceur (enzyme, fluorochrome )?
NB : lanticorps secondaire doit tre capable de lier les anticorps 1 et 3 : on utilisera le plus souvent des anticorps produits chez la mme espce. Dans le cas o ces anticorps sont despces diffrentes on peut les ponter par la protine A ou G (voir plus loin).
Ce schma ractionnel gnral est peu utilis. Les variantes ci-aprs sont plus courantes. Exemple dune immunoraction sandwich en 4 tapes avec application successive :
1 de lanticorps primaire
2 dun anticorps secondaire, ajout en concentration leve de faon ce que cet anticorps se fixe prfrentiellement par un seul bras sur lanticorps primaire, laissant lautre bras capable de fixer lanticorps tertiaire
3 un anticorps tertiaire dirig contre le traceur
4 le traceur (enzyme, fluorochrome )?
NB : lanticorps secondaire doit tre capable de lier les anticorps 1 et 3 : on utilisera le plus souvent des anticorps produits chez la mme espce. Dans le cas o ces anticorps sont despces diffrentes on peut les ponter par la protine A ou G (voir plus loin).
Ce schma ractionnel gnral est peu utilis. Les variantes ci-aprs sont plus courantes.
39. Dans le cas o lanticorps primaire et lanticorps marqu ne peuvent tre reconnus par le mme anticorps de pontage (espces trop loignes) ont pourra raliser le pontage par la protine A ou la protine G.
NB :
1 - les protines A et G ne reconnaissent pas tous les anticorps avec la mme affinit : il existe des diffrences importantes entre les affinits pour des anticorps de diffrentes espces animales ainsi que pour diffrents isotypes chez une mme espce
2 Il y a 5 sites de liaison des Ig sur chaque protine A ou G : lutilisation de protine A ou G doit en principe pouvoir rsulter en une immunoraction plus intense que celle obtenue en utilisant des immunoglobulines comme ractif de pontage.Dans le cas o lanticorps primaire et lanticorps marqu ne peuvent tre reconnus par le mme anticorps de pontage (espces trop loignes) ont pourra raliser le pontage par la protine A ou la protine G.
NB :
1 - les protines A et G ne reconnaissent pas tous les anticorps avec la mme affinit : il existe des diffrences importantes entre les affinits pour des anticorps de diffrentes espces animales ainsi que pour diffrents isotypes chez une mme espce
2 Il y a 5 sites de liaison des Ig sur chaque protine A ou G : lutilisation de protine A ou G doit en principe pouvoir rsulter en une immunoraction plus intense que celle obtenue en utilisant des immunoglobulines comme ractif de pontage.
40. Le marqueur (complexe anticorps-traceur) peut tre prpar lavance ce qui permet galement de rduire le nombre dtapes ractionnelles 3.
Cest le cas du complexe PAP popularis par LA Sternberger et coll. et trs couramment utilis.
Des complexes peuvent tre raliss avec dautres traceurs. A notre connaissance seul le complexe APAAP (Alcaline Phosphatase Anti- Alcaline Phosphatase) est actuellement commercialis.Le marqueur (complexe anticorps-traceur) peut tre prpar lavance ce qui permet galement de rduire le nombre dtapes ractionnelles 3.
Cest le cas du complexe PAP popularis par LA Sternberger et coll. et trs couramment utilis.
Des complexes peuvent tre raliss avec dautres traceurs. A notre connaissance seul le complexe APAAP (Alcaline Phosphatase Anti- Alcaline Phosphatase) est actuellement commercialis.