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Propiedades químicas de aminoácidos, péptidos y proteínas

Propiedades químicas de aminoácidos, péptidos y proteínas. Enlace peptídico. R 1 R 2. Secuencia: AlaGluGlyLys o AEGK. COO-. COO-. NH 2. NH 2. NH 2. COO-. Análisis químico. Composición? Detección?. Secuencia?. Reacciones del enlace peptídico

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Propiedades químicas de aminoácidos, péptidos y proteínas

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Presentation Transcript

  1. Propiedades químicas de aminoácidos, péptidos y proteínas

  2. Enlace peptídico R1R2

  3. Secuencia: AlaGluGlyLys o AEGK

  4. COO- COO- NH2 NH2 NH2 COO-

  5. Análisis químico Composición? Detección? Secuencia? • Reacciones del enlace peptídico • Reacciones del grupo amino terminal • Reacciones del grupo carboxilo terminal

  6. Reacciones del enlace peptídico y de detección proteica • Hidrólisis ácida (ClH 6M a 100 C, 24hs). • Reacción de Biuret ( SO4Cu/tartrato alcalino 540nm). Baja sensibilidad. • Reacción de Lowry et al. (Reactivo de Folin-Ciocalteau = mezcla de óxidos de tungsteno y molibdeno) 720-750 nm • Coomassie Brillant Blue • Plata

  7. Reacciones del grupo amino (terminal) • Ninhidrina (570 nm) Pro a 440nm • Fluorescamina (producto fluorescente). Alta sensibilidad • 1-Fluoro-2,4 dinitrobenceno(FDNB, reactivo de Sanger) • Cloruro de dansilo • o-ftalaldehído (en sn con mercaptoetanol, producto fluorescente). Alta sensibilidad

  8. Reacciones del grupo Carboxilo • Hidrazina (H2NNH2) • Carboxipeptidasa

  9. Secuenciación • Purificación de la proteína o péptido • Ruptura de los puentes disulfuro • Determinación de los extremos amino-terminales y carboxilo-terminales • Corte específico de la secuencia principal en fragmentos menores, al menos en dos formas distintas • Purificación de cada segmento y secuenciación • Determinación de la secuencia total

  10. 2 Ruptura de –S-S-

  11. DTNB ( ácido ditio-bis-nitrobenzoico) nitrotiobenzoato

  12. 3 Determinación de extremos

  13. Producto púrpura

  14. 4 Cortes y producción de fragmentos Métodos enzimáticos

  15. 4 Cortes y producción de fragmentos Métodos químicos

  16. 5 Secuenciación de fragmentos

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