90 likes | 426 Vues
Roman Štukelj. Medicinska fakulteta, Univerza v Ljubljani. Mikrovezikli izolirani iz periferne krvi – klinično pomemben artefakt izolacije. Mentorica: izr. prof. dr. Veronika Kralj-Iglič Somentorica: doc. dr. Helena Abramovič. Namen dela.
E N D
Roman Štukelj Medicinska fakulteta, Univerza v Ljubljani Mikrovezikli izolirani iz periferne krvi – klinično pomemben artefakt izolacije Mentorica: izr. prof. dr. Veronika Kralj-Iglič Somentorica: doc. dr. Helena Abramovič
Namen dela izboljšanje razumevanja mehanizmov vezikulacije membran izboljšanje razumevanja presnove holesterola (hol) primerjava koncentracije mikroveziklov (MV) v izolatih iz periferne krvi pri zdravih prostovoljcih in bolnikih z rakavimi obolenji povezava med koncentracijo holesterola v krvi in koncentracijo MV v izolatih vpliv temperature med izolacijo na koncentracijo in velikost mikroveziklov
Mikrovezikli (MV) • z membrano obdani nanodelci (< 1 µm) • odcepijo se od membrane v zadnji fazi brstenja in so več ali manj prosto gibljivi s cirkulacijo (kri,limfa) • prenašajo genetski material, receptorje, infektivne delce, holesterol, ... • predstavljajo dodatno zalogo holeterola v krvi Slika: prikazuje brstenje membrane eritrocita (A) in mikrovezikle (B), slikano z vrstičnim el. mikroskopom.
Materiali in metode • IZOLACIJA MV IZ PERIFERNE KRVI (modificirana metoda po Diamant in sod. 2002) • merjenje št. MV s pretočnim citometrom • MERJENJE KRVNEGA HOLESTEROLA (encimski kolorimetrični test - standardna metoda) • statistična obdelava podatkov • STATISTIČNA OBDELAVA PODATKOV • SLIKANJE Z VRSTIČNIM ELEKTR. MIKROSKOPOM
Rezultati • MIKROVEZIKLI IN PRESNOVA • Povprečna koncentracija MV je za 50 % večja po uživanju hrane kot po postu (p = 0,0010). • Koncentracije skupnega Hol, LDL-hol in HDL-hol so po obroku ostale v okviru 2 % od prvotnega stanja. • Koncentracija MV po obroku je negativno korelirala s koncentracijo skupnega holesterola, oz. koncentracijo LDL-hol po postu (p = 0,03 in p = 0,05).
Rezultati Graf: Povprečna vrednost števila mikroveziklov izoliranih iz vzorcev krvi pri različnih temperaturah. VPLIV TEMP. NA KONC. MV V IZOLATIH IZ PERIFERNE KRVI
Rezultati III. PRIMERJAVA KONC. MIKROVEZIKLOV V IZOLATIH IZ PERIF. KRVI PRI ZDRAVIH PROSTOVOLJCIH IN BOLNIKIH Z RAKAVIMI OBOLENJI Graf: Povprečnekoncentracije MV v različnihskupinahbolnikov. Povprečne koncentracije MV v izolatih (s standardnimi deviacijami) v populacijah bolnikov z rakom prebavnih organov, bolnikov z drugimi boleznimi prebavnih organov in zdravih prostovoljcev.
Sklepi Po jedi se znatno in statistično pomembno poveča koncentracija mikroveziklov v izolatih iz periferne krvi. V okviru obstoječih možnosti predlagamo izboljšavo protokola. Postopek izolacije mikroveziklov daje manj artefakta pri temperaturi 37 ºC kot pri sobni temperaturi. Bolniki z rakom prebavnih organov imajo v izolatih iz krvi statistično pomembno več mikroveziklov kot osebe z drugimi boleznimi prebavnih organov in več kot zdrave osebe.