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Lab. 3: BACTERIAS. BIOL 3052 Instructora: MILENA BENAVIDES-SERRATO. OBJETIVOS. Entender la clasificación de las bacterias y las características usadas para colocarlas en reinos y dominios. Describir las estructuras de las bacterias. Practicar técnicas de cultivos de bacterias.
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Lab. 3: BACTERIAS BIOL 3052 Instructora: MILENA BENAVIDES-SERRATO
OBJETIVOS Entender la clasificación de las bacterias y las características usadas para colocarlas en reinos y dominios. Describir las estructuras de las bacterias. Practicar técnicas de cultivos de bacterias.
Sistema de Cinco Reinos • Robert Whittaker (1969) • Procariotas: célula con ADN libre en el citoplasma, no hay núcleo celular diferenciado. • Reino Monera • Eucariotas: célula con ADN confinado a un núcleo celular diferenciado. • Protista • Fungi • Plantae • Animalia
Sistema de tres dominios • Aceptado después de 1970 • Procariota • Bacterias • Archaea • Eucariota • Eukarya
PROCARIOTA Archaea Bacteria • Composición diferente en el ARNr. • Las Archeas, tienen lípidos peculiares y diferentes en la composición de su membrana. • Los procariotas viven en grandes extensiones, y en cualquier lugar: sitios fríos, cálidos, alcalinos o ácidos. • Pueden realizar el proceso de la fotosíntesis, aunque la mayoría son organismos heterótrofos, absorbiendo nutrientes del ambiente que los rodea.
BACTERIAS • Las bacterias son relativamente pequeñas, pero tienen un enorme impacto en nuestro mundo, ya que algunas son causantes de enfermedades graves. • Las bacterias son benéficas y nos pueden ofrecer muchos beneficios tales como la Descomposición y biorremediación, síntesis de vitaminas y antibióticos, industria de alimentos (Yogurt), equilibrio ecológico,fijación de nitrógeno,flora natural del cuerpo entre otros.
BACTERIAS: Características • Procariotas. • Unicelulares. • Carecen de organelos rodeados por membranas. • Pared celular de peptidoglucano. • DNA en forma de anillos – plásmidos. • No tienen cromosomas.
BACTERIAS: Características • Reproducen por fisión binaria (duplicación: dar origen a dos células o más). • Presentan estructuras especializadas Pili (Intercambio de material genético) Flagelos (Movimiento) Cápsulas (Protección del medio ambiente)
BACTERIAS: Características • Autótrofas (prod. su propio alimento) • Fotosintéticas o quimiosintéticas • Heterotrofas • Absorben nutrientes del ambiente • Hábitat • Suelo, aire, cuerpos de agua • Condiciones normales o extremas
MORFOLOGÍA • Forma de caña (Bacilos). • Redondos, en líneas (Estreptococos*). • Redondos, en cúmulos (Estafilococos*). • Redondos, en pares (Diplococos*). • En forma de espirales (Espirilos). • En forma de coma (Vibrios). *Todos son la forma de cocos
IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS • Tinción Gram: Las bacterias reaccionan por las pruebas de: • Gram + • Gram – • Gram Variable • La respuesta de las células a la tinción se debe a diferencias en la complejidad y química de su pared celular, la cual contiene un polímetro llamado Peptidoglicano. • La pared celular de las bacterias Gram – , contienen menor cantidad de peptidoglicano comparado con las bacterias Gram +.
EJERCICIO 1: Morfología de colonias • Lea en su material técnicas de asepsia (recordar • para el examen y quiz de la semana entrante) y • póngalo en práctica durante este laboratorio. • Lea los materiales a usar (página 323). • Observe las colonias bacteriales de la caja de Petri • por medio de un microscopio, siga la figura 13.1 • (página 324); dibuje las colonias que observa.
EJERCICIO 2: Laminillas • Observe en un microscopio compuesto laminillas • preparadas, utilize aceite de inmersión al 100 %. • Describa las formas que observa: las tres básicas: • COCOS • BACILOS • ESPIRILOS • Observa alguna otra forma? Cual?
EJERCICIO 3: Identificando bacterias por Tinción Gram • Obtener y observar células bacterianas presentes en la boca • Procedimiento: • Preparar laminilla con UNA gota de agua. • Frotar el interior de la boca con un palillo de madera. • Esparcir por la laminilla. • Sujetar la laminilla y secar en mechero.
EJERCICIO 3: Identificando bacterias por Tinción Gram • Teñir con 3-4 gotas de cristal violeta. • Esperar 1 minuto. • Lavar con agua. • Secar suavemente. • Observar bajo el microscopio (utilizar aceite de inmersión al 100%). • Dibujar.
EJERCICIO 4: Bacterias ambientales • Tomar placa con agar • a. Exposición al ambiente • b. Muestreo de superficies • c. Muestreo de agua • Hacer estriado en placa. • Sellar la placa con parafina. • Rotular. • Incubar 48 hrs (Incubadora 25ºC). • Anotar observaciones y dibujar.
Control de crecimiento bacteriano • Importancia: • Bacterias crecen en una variedad de ambientes • Crecimiento descontrolado o en exceso puede causar daños ambientales o enfermedades. • Agentes de control bacteriano: • Antibióticos • Antisépticos • desinfectantes
Antibióticos • Químico producido por una bacteria u hongo que puede controlar el crecimiento de otra bacteria u hongo. • Antiséptico • Controla crecimiento bacteriano en tejidos vivos. • Desinfectantes • Controla el crecimiento bacteriano en objetos inanimados.
** los antisépticos y desinfectantes no matan todas la bacterias como ocurre en esterilización. ** reducen el número de bacterias en la superficie.
EJERCICIO 5: Controlando el crecimiento de bacterias • Dividir el plato petri en cuatro cuadrantes. • Marcar cada cuadrante: control, antiséptico, antibiótico y desinfectante. • Sumergir el isopo estéril en el caldo de bacterias (ojo! Asepsia). • Estriar en plato.
EJERCICIO 5: Controlando el crecimiento de bacterias • En cada cuadrante rotulado colocar: • 1. Disco estéril (grupo control). • 2. Disco con antibiótico. 3-4. Disco con desinfectante y antiséptico. • Sellar con parafina. • Incubar 48 hrs (37ºC) • Observar resultados. 1 2 4 3
EJERCICIO 5: Controlando el crecimiento de bacterias • Observar inhibición de crecimiento. • Medir halo de inhibición en mm. • Halo de inhibición – área alrededor del disco donde el crecimiento bacteriano ha sido inhibido. • Anotar resultados (Lab 4) y traerlos al próximo laboratorio (Lab 5) • INDIVIDUAL
PARA LA PRÓXIMA SEMANA • Traer bata. • Quiz del laboratorio de Bacterias. • Se observarán los resultados del laboratorio de bacterias. • Informe: Control de crecimiento bacteriano: • INDIVIDUAL. • Portada y título. • Introducción (1 página). • Materiales y Métodos (en forma detallada y debe ir • en pasado. • Resultados. • Discución. • Conclusiones. • Revisión de literatura.