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외인성 cholesterol (free,ester)

콜레스테롤 대사. 외인성 cholesterol (free,ester). 소장의 점막에서 흡수 → triacylglycerol → chylomicron → 흉관 ( 대순환 ) apo-E 수용체 ( 간 ) 결합하여 간으로 . Liver (chylomicron) → cholesterol → 담즙산으로 전환 → 소장으로 분비 , 일부는 간에서 합성된 cholesterol 과 합쳐 triacylglycerol 와 함께 VLDL 이 되어 대순환으로 방출된다. 내인성 cholesterol .

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외인성 cholesterol (free,ester)

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Presentation Transcript

  1. 콜레스테롤 대사 외인성 cholesterol (free,ester) 소장의 점막에서 흡수 → triacylglycerol → chylomicron → 흉관(대순환) apo-E 수용체(간) 결합하여 간으로. Liver (chylomicron) → cholesterol →담즙산으로 전환 → 소장으로 분비, 일부는 간에서 합성된 cholesterol 과 합쳐 triacylglycerol와 함께 VLDL이 되어 대순환으로 방출된다 내인성 cholesterol Acetyl-CoA가 간의 HMG-CoA 환원효소에 의하여, 유리형 합성하고, 이 유리형은 세포막, steroid hormon, bile acid의 생성에 사용. cholesterol 합성 조절은 식이양에 의해 조절, 만약 과잉으로 공급되면 간에서 HMG-CoA 환원효소의 합성을 저해, LDL수용체의 생성 저해를 통하여 생성을 차단한다. 수송 단백질은 간에서 만들어진 VLDL의 대사로 형성되는 LDL이다. LDL의 ⅔는 간세포와 기타의 체세포의 표면에 있는 LDL의 apoB-100을 인지하는 수용체와 결합된 후 대사되고, 나머지 ⅓ 의 LDL은 비 의존성 경로(scavenger pathway)로 대사.

  2. Cholesterol 란 • 동맥경화성심혈관 질환 관상동맥질환(CAD) 위험도의 평가. • 신증후군, 췌장, 간 질환, 갑상선질환의 보조진단. • 지방대사의 평가 간염초기,지질대사 이상 증 담도폐쇄, 신증후군, 폐쇄성황달, 췌장염, 갑상선 기능 저하증 저 cholesterol증은 일반적으로  영양실조,  간세포괴사, 갑상선 기능 저하증 Total cholesterol이 100 이하일 경우 호르몬 생산이 안 되기 때문에 문제가 된다.

  3. Total Lipid = Total Cholesterol + Triglyceride + Phospholipid + Free Fatty acid

  4. 지단백(lipoprotein) • 지질과 단백질이 결합 • 체내지방의 운반체 • 카일로미크론, VLDL, LDL, HDL • 밀도 1.006 • 소장 점막에서 합성 • 식이 지방을 간으로 운반 • 중성지방 81, 콜레스테롤 9, 인지질 7, 단백질 2 • 2) VLDL • 밀도 1.006∼1.019 • 간에서 합성(당질, 지방산, 단백질 → 지방) • 다른 조직으로 지방공급 • 중성지방 52, 콜레스테롤 22, 인지질 18, 단백질 7 • 3) LDL • 밀도 : 1.019∼1.063 • 혈관에서 VLDL로 부터 합성 • 콜레스테롤이 많아 동맥 경화 발병률이 높다. • 중성지방 9, 콜레스테롤 22,인지질 18, 단백질 21 • 4) HDL • 밀도 : 1.063∼1.21 (TG 2, Chol 18, PL 30, TP 50 ) • 세포로부터 받은 콜레스테롤을 다른 지 단백으로 옳겨줌 • 많을수록 관상심장병의 발병률이 낮다. 1) Chylomicron

  5. Lehninger Fig. 21-37 (p. 805)

  6. - - + +

  7. 환자준비  지질대사에 관한 검사임을 설명하고 12-16시간 공복, 술, 당, 지방은 24시간 제 한다 아울러 cholesterol 농도에 영향을 주는 약물은 중지 측정시 주의사항 Lysolecithin 리포 단백의 변성 ①채혈 후 실온에 방치하면 방치하면 Free형 이 Ester 화 하므로 Ester치가 높게 된다. ②냉소 보존시 수일, 냉동 보존시 장시간 안정하다. ③부신 피질 홀몬, 경구 피임제, 알코올은 콜레스테롤 를 높게 한다.

  8. CHOLESTEROL 측정법 1단계 법 (직접 비색법) 2단계 법 (추출 + 발색) 3단계 법 (추출 + 검화 + 발색) 4단계 법 (추출 + 검화 + 침전 + 발색) 추 출 : Bloor solvent (ether : ethanol = 1 : 3 ) Sperry (Aceton : Ethanol = 1 : 1 ) Isopropanol, Glacial acetic acid 검 화 : KOH, Digitonide 효 소 법

  9. 1단계 법 (직접 비색법)

  10. 2단계 법 (추출 + 발색) Bloor 법 (Liebermann-Burchard 반응) Serum + 추출액 → Cholesterol 추출 Cholesterol + H2SO4 + 빙초산 + 무수초산 → 청록색 여기까지 Total Cholesterol 측정 Digitonine을 가하면 Free Cholesterol은 불용성, 침전되고 Ester Cholesterol이 분리 → Ester Cholesterol 측정 추출액 : Bloor Solution (Ethanol : Ether = 3 : 1) H2SO4 : 산화제 빙초산 : 유기용매 무수초산 : 발색시약 Digitonine : Free Cholesterol 침전시약 Chloroform : 표준 액 용매 제 청록색 (Green) 620㎚

  11. 2단계 법 (추출 + 발색) Libermann-BuchardMethod- Zukowski, 시 약 • 5% Sulfosalicylic acid, digitonine • Acetic acid (35)l, Acetic anhydride (65), Sulfuric acid (10). • Cholesterol standard sol     250㎎/㎗ ethanol 실 시 ⓐ total cholesterol –Ch … + acetic anhydrous + H2SO4 → 발색(녹색) ⓑ free형 – free Ch + digitonine(반응 간섭 물질 제거제) → digitonized Ch… (침전) digitonized Ch… + acetic anhydrous + H2SO4 → 발색 ⓒ ester형 – 총 클레스테롤에서 free형을 빼서 측정 검체(표준액, 맹검용증류수) 0.1㎖ + L- B정색시약 5㎖ =10min 후 625㎚

  12. 2단계 법 (추출 + 발색) Zak-Henry 법(Kiliani 반응) Carr-Drekter 법 Serum + 빙초산 → Chol 추출. Cholesterol + H2SO4 + 무수초산 → 청록색 Color Rgt : 무수초산 (1Vol) + H2SO4(1Vol) Dehydroting : 무수초산 (3Vol) + H2SO4(1Vol) 빙초산 : 표준액 용매체 및 추출액 청록색 (Green) 620㎚ Cholesterol + H2SO4 + 빙초산 + FeCl3 → 적갈색 H2SO4: 탈수제 Acetic acid: Cholesterol 추출액 및 발색시약 FeCl3(Ferric chloride) :발색반응 방해물질인 Bilirubin 제거 및 산화제(carbonium ion) 적갈색 560㎚

  13. 3단계 법 (추출 + 검화 + 발색) Abell-Kendall 법 4단계 법 (추출 + 검화 + 침전 + 발색) Sperry 법 ①추출 Serum + 추출액 → Cholesterol 추출 ②검화 Cholesterol + KOH → Free Chol ③침전 Free Cholesterol + Digitonine → Free Cholesterol 침전 ④발색 (Liebermann-Burchard ) Ester Cholesterol + H2SO4 + 빙초산 + 무수초산 → 청록색 ①추출 Serum + Alcohol → Chol 추출 ②검화 Cholesterol + KOH → Free Chol ③발색 (Liebermann-Burchard ) Free Cholesterol + H2SO4 + 빙초산 + 무수초산 → 청록색 Sperry Webb 추출액 : (Acetone : Ethanol = 1 : 1) 청록색 (Green), 620 nm

  14. 효 소 법

  15. Chemical 방법 문제점 1) Free, Ester의 발색의 차이가 문제 축출과정에 감화(saponification)과정으로 free/ester 차이 극복 free/ester 발색의 차이 미 극복 ➡ Carr-Drekter, Zak (2단계) 2) Steroid, protein 의 간섭제거 Cholesterol 외 간섭발색 물질의 대책 ➡ (Person, Wybenga, Stern-Mc Gavak Digitonine처리로 반응간섭물질 제거 ➡ Sperry-Webb, long time,복잡 3) Bilirubin, Hemoglobin 간섭제거 4) 시약의 순도,반응 온도 등 반응조건에 따른 민감도 차이

  16. Comparison of Chemical and Enzymatic Method - Sample pretreatment    Direct sample analysis - Large sample volume         Micro-sample volume - Caustic reagent               Biological reagent - Difficult automation          Easily automation - Primary standard               Secondary calibration

  17. 간섭인자 저하시키는 것 estrogen, dilantin, glucagon, heparin, kanamycin, neomycin, niacin, nitrits, p-aminosalicyllic acid 증가시키는 것 , adrenocorticotropic hormon, corticosteroids, androgens,  epinephrine, chlorpromazine, 피임약, salicylates,

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