Les examens de laboratoire en pathologie infectieuse

1. Les examens de laboratoire en pathologie infectieuse Mireille PELLETIER IFSI Sainte MARGUERITE

2. Introduction Une maladie infectieuse est la conséquence d’une agression de l’organisme par un ou plusieurs agents infectieux présents dans notre environnement  sol, air, eau, aliments, animaux, humains. La transmission est: • directe par contact ou ingestion, • indirecte par l’intermédiaire d’un vecteur. Mireille PELLETIER IFSI Sainte MARGUERITE

3. Les agents infectieux • Virus à ADN ou ARN, • Bactéries: les cocci (sphèriques),bacilles (allongés), vibrions (vrillés), spirochètes (spiralés). • Champignons: les levures(unicellulaires), les filaments… • Parasites: protozoaires, métazoaires. Mireille PELLETIER IFSI Sainte MARGUERITE

4. Moyens de défense de l’organisme 1. Anatomophysiologiques • La peau constitue une barrière aux germes, • Les substances chimiques  l’acidité gastrique et buccale limitent le développement des micro-organismes, • Les sécrétions biologiques  urines, bile, sécrétions bronchiques, larmes… permettent l’élimination par une évacuation régulière. • L’aponévrose cloisonne les divers secteurs de l’organisme évitant ainsi la propagation. Mireille PELLETIER IFSI Sainte MARGUERITE

5. Moyens de défense de l’organisme 2. Immunitaires • La réaction inflammatoire Première étape de la réponse immunitaire, elle permet de circonscrire le foyer infectieux grâce à une vasodilatation qui favorisera l’extravasation des globules blancs vers le foyer infectieux. • L’immunité cellulaire (lymphocytes T) • L’immunité humorale (lymphocytes B) Mireille PELLETIER IFSI Sainte MARGUERITE

6. Exploration des mécanismes de défense Face à une symptomatologie faisant évoquer une maladie infectieuse, on explorera ces divers mécanismes de défense grâce à un panel d’examens para cliniques. Mireille PELLETIER IFSI Sainte MARGUERITE

7. Exploration des mécanismes de défense On distingue: • Les examens d’orientation. • Les examens diagnostics. Mireille PELLETIER IFSI Sainte MARGUERITE

8. Cadre législatif Article R. 4311-7 L'infirmier ou l'infirmière est habilité à pratiquer les actes suivants: soit en application d'une prescription médicale…. soit en application d'un protocole écrit……..préalablement établi, daté et signé par un médecin : • 35° Prélèvements de sang par ponction veineuse ou capillaire ou par cathéter veineux, • 37° Prélèvements non sanglants effectués au niveau des téguments ou des muqueuses directement accessibles, • 38° Prélèvements et collecte de sécrétions et d'excrétions, • 39° Recueil aseptique des urines. Mireille PELLETIER IFSI Sainte MARGUERITE

9. 1. Les examens d’orientationen pathologie infectieuse Mireille PELLETIER IFSI Sainte MARGUERITE

10. 1.1. L’hémogramme ou Numération Formule Sanguine NFS Mireille PELLETIER IFSI Sainte MARGUERITE

11. L‘hémogramme Examen de base du bilan hématologique, il renseigne sur les éléments figurés du sang : • érythrocytes ou globules rouges ou hématies • leucocytes ou globules blancs • thrombocytes ou plaquettes. Mireille PELLETIER IFSI Sainte MARGUERITE

12. Mireille PELLETIER IFSI Sainte MARGUERITE

13. Numération érythrocytaire : nombre de globules rouges. C'est le nombre des globules rouges circulant dans un volume donné de sang. Le taux normal est : • Chez l'homme  4,5 à 5,5 Tera/l (1012/l) ou 4,5 à 5,5 millions/mm3. • Chez la femme  4 à 5 Tera/l (1012/l) ou 4 à 5 millions/mm3. Mireille PELLETIER IFSI Sainte MARGUERITE

14. Dosage de l'hémoglobine (Hb) Le taux d'hémoglobine est obtenu par spectrophotométrie après lyse des globules rouges. Le taux normal : • Chez l'homme  130 à 170 g/l (ou 13 à 17 g/dl ) • Chez la femme  115 à 150 g/l (ou 11,5 à 15 g/dl) Mireille PELLETIER IFSI Sainte MARGUERITE

15. L'hématocrite (Ht) • C'est le volume occupé par les globules rouges (G.R) par rapport au volume du sang total (G.R + plasma). Mireille PELLETIER IFSI Sainte MARGUERITE

16. La numération des réticulocytes • Le taux des réticulocytes reflète le taux de production médullaire de l’érythropoïèse et donc le renouvellement érythrocytaire. • Ce sont des érythrocytes jeunes qui contiennent encore quelques ribosomes et mitochondries leur permettant de poursuivre pendant 24 à 48 H une faible synthèse d'hémoglobine. Mireille PELLETIER IFSI Sainte MARGUERITE

17. La numération des réticulocytes Le résultat peut être exprimé : • En pourcentage : taux normal 0,5 à 1,5 % des G.R. • ou mieux en valeur absolue : 20 à 80 giga/l (109/l) • Leur taux dans une anémie permet de préciser si celle-ci est: • régénérative (réticulocytes élevés) ou • arégénérative (réticulocytes bas). Mireille PELLETIER IFSI Sainte MARGUERITE

18. Anémie et infection L’anémie de l’adulte en lien avec une infection peut être associée à plusieurs mécanismes. Elle peut être en rapport avec: • l’inflammation, • l’hémolyse d’origine immunologique: CMV mycoplasme, • l’hémolyse d’origine non immunologique: endocardite sur prothèse de valve cardiaque, septicémie à Clostridium perfringens, paludisme. Mireille PELLETIER IFSI Sainte MARGUERITE

19. LES LEUCOCYTES Ils sont analysés dans l'hémogramme de 2 manières obligatoirement complémentaires. 1) La numération leucocytaire C'est le décompte des G.B circulant dans un volume donné de sang. Le taux normal est de 4 à 10 giga/l (109/l) ou 4000 à 10 000/mm3 2) La formule leucocytaire Contrairement aux G.R, la population leucocytaire est très hétérogène: granulocytes, monocytes, lymphocytes. Mireille PELLETIER IFSI Sainte MARGUERITE

20. VALEURS DE LA FORMULE LEUCOCYTAIRE Mireille PELLETIER IFSI Sainte MARGUERITE

21. Modification du taux des leucocytes • Hyperleucocytose G.B. augmentés > 10 giga/l • Leucopénie G.B. diminués < 4 giga/l Mireille PELLETIER IFSI Sainte MARGUERITE

22. Modification du taux des polynucléaires neutrophiles • Polynucléose P.N. augmentés > 7500/mm3 infections à bactéries pyogènes. • Neutropénie P.N. diminués <1000/mm3  viroses, endocardite subaiguë, infections bactériennes sévères,…. • Agranulocytose P.N. fortement diminués < 500/mm3. Mireille PELLETIER IFSI Sainte MARGUERITE

23. Modification du taux des polynucléaires éosinophiles • Hyper éosinophilie P.E. augmentés > 500/mm3 certaines parasitoses: helminthiases. Mireille PELLETIER IFSI Sainte MARGUERITE

24. Modification du taux des lymphocytes • Lymphopénie Lymphocytes diminués <1000/mm3  implique toujours un déficit en lymphocytes T puisqu'ils prédominent largement par rapport aux lymphocytes B dans le sang périphérique. On la retrouve dans l’infection VIH, la tuberculose, la légionellose, SRAS. Mireille PELLETIER IFSI Sainte MARGUERITE

25. Modification du taux des lymphocytes • Hyper lymphocytose Lymphocytes augmentés > 4000/mm3 chez l’adulte et > 7000/mm3 chez l’enfant. Elle oriente surtout vers une infection virale mais s’observe aussi dans la coqueluche.. Mireille PELLETIER IFSI Sainte MARGUERITE

26. Les monocytes • Monocytose Monocytes > 1000/mm3 Peut se voir au cours: • d’infections bactériennes  endocardite infectieuse, brucellose, salmonellose, tuberculose, • d’infections parasitaires  paludisme, • d’infection virale  MNI Mireille PELLETIER IFSI Sainte MARGUERITE

27. Les plaquettes • Un thrombocyte ou plaquette est un élément figuré du sang, formé dans la moelle osseuse. • Leur durée de vie est d'environ 8 à 10 jours. • Leur lieu de dégradation est la rate. • Elles sont un des composants indispensables à l’hémostase. • Plaquettes : 150 000 à 400 000/mm3 Mireille PELLETIER IFSI Sainte MARGUERITE

28. Les plaquettes • Thrombopénie Plaquettes <150 000/mm3 Au cours des viroses  MNI, VIH, Typhoïde, paludisme. • Thrombocytose ou hyperplaquettose Plaquettes > 450 000/mm3 observée dans les infections chroniques, elle témoigne d’un syndrome inflammatoire chronique. Mireille PELLETIER IFSI Sainte MARGUERITE

29. 1.2. La Vitesse de SédimentationVS Mireille PELLETIER IFSI Sainte MARGUERITE

30. La VS • Est un marqueur de l’inflammation. • La vitesse de sédimentation (VS) des érythrocytes reste encore un test communément utilisé pour déceler et surveiller les maladies s'accompagnant d'un syndrome inflammatoire. • Mesure la rapidité avec laquelle les hématies se déposent, sous l'impulsion de la gravité, dans une colonne de sang (tube gradué) rendue incoagulable. Mireille PELLETIER IFSI Sainte MARGUERITE

31. La VS • Elle est influencée par le nombre de globules rouges, leur volume et la concentration de certaines protéines plasmatiques impliquées dans l'inflammation et responsables de sa viscosité. • Cet examen, sans aucune spécificité, est un excellent examen d'orientation. Un résultat anormal vérifié impose des recherches complémentaires. Mireille PELLETIER IFSI Sainte MARGUERITE

32. La VS • Prélèvement de sang veineux (en général au pli du coude) sur tube de prélèvement contenant un anticoagulant.Le prélèvement est réalisé de préférence à jeun. Mireille PELLETIER IFSI Sainte MARGUERITE

33. La VS Résultats normaux 1ère heure: 3 à 10mm chez l'homme 5 à 20mm chez la femme 2ème heure < 20mm A l'état normal, la VS s'accélère avec l'âge, la grossesse... Mireille PELLETIER IFSI Sainte MARGUERITE

34. VS • La VS s’accroît de manière franche dans les infections à pyogènes. • Cependant, elle peut rester normale ou peu élevée dans la plupart des infections virales et dans certaines infections bactériennes (Brucellose et Salmonellose). Mireille PELLETIER IFSI Sainte MARGUERITE

35. VS • Une VS > à 100 mm/1ère heure est un facteur de gravité dans 95 % des cas. • Une élévation modérée (> 50 mm/ h) doit faire recontrôler la VS tous les 15 jours-1 mois. • Les bactéries augmentent plus la VS que les virus, sauf pour Brucella et Salmonella. • Lors d'une virose, une VS > à 100 mm/h évoque une surinfection bactérienne. Mireille PELLETIER IFSI Sainte MARGUERITE

36. 1.3. La CRP ou Protéine C Réactive Mireille PELLETIER IFSI Sainte MARGUERITE

37. CRP • Est une protéine de l’inflammation plus précoce et plus sensible que la VS. • La C Reactive Protein (CRP) est une protéine sérique spécifique de la réaction inflammatoire, synthétisée par le foie, précocement au cours de la réponse inflammatoire. • Elle a pour rôle de mobiliser les défenses immunitaires de l'organisme, avec des mécanismes encore mal connus. Mireille PELLETIER IFSI Sainte MARGUERITE

38. CRP • Sa valeur normale est inférieure à 10-12 mg/l. • Son taux peut être multiplié par 500 à 1000 lors d'inflammations aiguës. • Elle s'élève dès la 6e heure de l'inflammation (y compris lors de nécroses tissulaires, de traumatismes,...). • En moyenne, elle est franchement pathologique 24 heures après le début de l'inflammation, • Elle se normalise rapidement après sa disparition (en 7 à 14 jours). Mireille PELLETIER IFSI Sainte MARGUERITE

39. CRP Dans le cadre des infections • La CRP reste normale en cas de virose. • Elle ne s'élève qu'en cas d'infection bactérienne et diminue rapidement dans les 48 heures d'une antibiothérapie bien conduite. • L'élévation du taux de CRP est également un facteur pronostic: plus l'élévation est rapide et importante, plus l'inflammation est sévère. Mireille PELLETIER IFSI Sainte MARGUERITE

40. 1.4. La Fibrinémie Mireille PELLETIER IFSI Sainte MARGUERITE

41. La Fibrinémie • C’est le dosage de la fibrine dans le sang. • La fibrine est activée lors du processus de réaction inflammatoire. • Elle s’agglutine autour du corps étranger, son taux augmente alors. • Norme : 2 à 4,5 g/l Mireille PELLETIER IFSI Sainte MARGUERITE

42. 2. Les examens spécifiques du diagnostic en pathologie infectieuse Mireille PELLETIER IFSI Sainte MARGUERITE

43. Généralités • Les examens spécifiques du diagnostic permettent d’identifier l’agent infectieux. • Cette identification sera réalisée à partir d’un prélèvement de: • Sang, • Liquides biologiques  urines, selles, sécrétions de la sphère ORL, génitale, broncho-pulmonaires, LCR, pus et liquide d’épanchement… Mireille PELLETIER IFSI Sainte MARGUERITE

44. Techniques d’identification -1- • Plusieurs techniques permettent l’identification d’un agent infectieux: • Examen direct: • Sans coloration, • Avec coloration: Gram pour les bactéries, Ziehl pour les mycobactéries, Giemsa pour le Plasmodium, • Par immunofluorescence, • Par culture des bactéries ou champignons sur des milieux nutritifs spécifiques (bouillon de culture). Mireille PELLETIER IFSI Sainte MARGUERITE

45. Techniques d’identification -2- • Examen indirect: Mise en évidence d’anticorps dirigés contre l’agent infectieux  sérodiagnostic. Mireille PELLETIER IFSI Sainte MARGUERITE

46. 2.1. Le sérodiagnostic ou dosage des anticorps Mireille PELLETIER IFSI Sainte MARGUERITE

47. Le sérodiagnostic Le sérodiagnostic dépiste les Ac et en mesure le taux. C’est un examen sanguin qui recherche des anticorps spécifiques à un antigène suspecté. L’existence d’une séropositivité peut témoigner:  d’une primo-infection,  d’une infection ancienne (IgG),  d’une vaccination (Ac résiduels détectables)  son interprétation nécessite de connaître le statut sérologique antérieur Mireille PELLETIER IFSI Sainte MARGUERITE

48. Le sérodiagnostic • Compte tenu du temps de latence nécessaire à la fabrication d’anticorps, le 1er dépistage sanguin peut être négatif, il faudra donc un second prélèvement 2 à 3 semaines après le début de l’infection pour pouvoir confirmer ou infirmer le diagnostic. Mireille PELLETIER IFSI Sainte MARGUERITE

49. Sérologies: quelques exemples Mireille PELLETIER IFSI Sainte MARGUERITE

50. Principes généraux Mireille PELLETIER IFSI Sainte MARGUERITE