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第十四章 维生素类药物分析 Analysis of Vitamins

第十四章 维生素类药物分析 Analysis of Vitamins. 定义 : 维持人类机体正常代谢功能所必需的一类活性物质 , 体内不能合成 , 必须从食物中摄取 . VitA, E, B, C, D. 脂溶性. VitA 、 D 2 、 D 3 、 E 、 K 1 等. 水溶性. VitB 族 (B 1 、 B 2 、 B 6 、 B 12 ) VitC 、叶酸、烟酸、烟酰胺. VitM. VitPP. 第一节 维生素 A. R -H 维生素 A 醇 -COCH 3 维生素 A 醋酸酯

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第十四章 维生素类药物分析 Analysis of Vitamins

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Presentation Transcript

  1. 第十四章 维生素类药物分析Analysis of Vitamins 定义:维持人类机体正常代谢功能所必需的一类活性物质, 体内不能合成, 必须从食物中摄取. VitA, E, B, C, D.

  2. 脂溶性 VitA、D2、D3、 E、K1等 水溶性 VitB族(B1、B2、B6、B12) VitC、叶酸、烟酸、烟酰胺 VitM VitPP

  3. 第一节 维生素 A • R • -H 维生素A醇 • -COCH3 维生素A醋酸酯 • -COC15H31维生素A棕榈酸酯

  4. 一、结构和性质 • 1.与有机溶剂混溶, • 2.共轭双键：UV、多个立体异构、易氧化.3.与SbCl3发生显色反应. 4.分为维生素A醇和酯.

  5. 相对生物效价 维生素A （全反式）325.5 100% 新维生素Aa 328 75% 新维生素Ab 320.5 24% 新维生素Ac 310.5 15% 异维生素Aa 323 21% 异维生素Ab 324 24%

  6. 脱氢 VitA2 脱水 VitA3 聚合物 鲸醇

  7. 共轭多烯侧链 易被氧化 • △或有金属离子存在时氧化↑；VitA密封凉暗处，充氮气或加入抗氧剂保存

  8. 环氧化物 VitA醛 VitA酸

  9. （Ｃarr-Price反应） 二、鉴别试验 1.三氯化锑反应 试剂：饱和无水SbCl3的无醇CHCl3溶液 现象：蓝色（渐变为紫红色）

  10. 蓝色 紫红

  11. 2.UV: VitA（λmax326nm）→HCl/加热得脱水VitA（350～390nm有3个峰,348,367,389nm）

  12. 3.TLC BP 对照品法 显色剂 三氯化锑 USP 显色剂 磷钼酸 规定斑点颜色和Rf值

  13. 三、含量测定 • （一）UV：三点校正法（★） • 1.原理： • （1）杂质的吸收在310~340nm波长范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小； • （2）物质对光的吸收具有加和性。 • A样=A纯品+A杂质

  14. 2.生物效价：每克供试品中所含VitA的国际 单位数（IU/g） 3.换算因子：每1个E数值所相当的效价。 换算因子=效价/E 4.VitA的国际单位数（IU/g）规定： 1 IU=0.344μg VitA醋酸酯=0.300µg VitA醇 每克维生素A醋酸酯相当于2907000IU 每克维生素A醇相当于3330000IU 1% 1cm

  15. 溶剂 max 换算因素 E • VitA醋酸酯 环己烷 328 1900 1530 • VitA醇 异丙醇 325 1830 1820 • 5、三点波长的选择： • 1）等法: 用于VitA醋酸酯测定， • 1=328，2=316，3=340nm • ( 3－1 = 1－2) • 2）等A法:VitA醇及不能用第一法测定的VitA醋 • 酸酯325，310，334nm • (A2=A3=6/7A1)

  16. 求算 • 并与规定值比较 • 判断 是否在326～329nm之间 在326～329nm之间 是 否 改用第二法

  17. 6、测定： • 第一法（适用于VitA醋酸酯 ） • VitA醋酸酯加环己烷制成9-15µg/ml，测5个波长下的吸收度，计算Ai/A328。 • 计算： • A×D×1900×W W×100×标示量 标示量%=

  18. A值选择 • （nm） 300 316 328 340 360 • A A1 A2 A3 A4 A5 • Ai/A3 A1/A3 A2/A3 A3/A3 A4/A3 A5/A3 药典规定值 0.555 0.907 1.000 0.811 0.299 判断方法： 1.最大吸收值是否在326-329nm间； 2.计算Ai/A328 与药典规定值 之差.若  0.02， 用A328计算. 3.若一个以上超过 0.02，计算 A328校正=3.52（2 A328 –A316 – A340）

  19. 4.求f值 （1） 3%，用A328计算 （2）-15%～-3%，用A328校正计算 （3）﹤-15%或﹥+3%用第二法

  20. 例:VitAD胶丸中VitA的含量测定 精密称取本品(规格10000VitAIU/丸)装量差异项下（平均装量0.08262g/丸）的内容物 0.2399g 至250ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀；精密量取2.0ml，置另一20 ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀。以环己烷为空白，测定最大吸收波长为328nm，并在下列波长处测得吸收度为

  21. A300 /A328 ：0.555 A316/A328 ：0.907 A328/A328 ：1.000 A340/A328 ：0.811 A360/A328 ：0.299 求本品中维生素A的含量？ A300 ：0.354 A316 ：0.561 A328 ：0.628 A340 ：0.523 A360 ：0.216

  22. 规定: 0.555 0.907 1.000 0.811 0.299 A300 /A328 ：0.564 A316/A328 ：0.893 A328/A328 ：1.000 A340/A328 ：0.833 A360/A328 ：0.344 + 0.01 －0.01 0 + 0.02 + 0.04 － － － － － = = = = =

  23. 如果用A328测定值计算，则为102.8%

  24. UV第二法（皂化法）适合于维生素A醇以及VitA醋酸酯用第一法无法消除杂质干扰时用此法UV第二法（皂化法）适合于维生素A醇以及VitA醋酸酯用第一法无法消除杂质干扰时用此法 1.方法：在300，310，325，334nm处测定吸收度 2.计算：求E

  25. 3、A值选择： （1）max在323～327nm之间，且A300/A325 0.73A325校正=6.815A325–2.555A310–4.260A334 （A325校正-A325）100%/A325 3%，则用A325计算 超出3%，则用A325校正计算 （2）若max不在323～327nm之间或A300/A325大于0.73，色谱法纯化后再测定。

  26. 判断max是否在323～327nm之间 是 否 取未皂化样品采用色谱法纯化后再测定 • 计算

  27. 判断 A300 /A325 是否小于或等于0.73 否 是 取未皂化样品采用色谱法纯化后再测定 • 计算A325(校正)

  28. （二） HPLC:NP-HPLC，ChP（2010）新增方法,第二法，外标A定量 (三)三氯化锑比色法 1、原理： VitA加饱和无水SbCl3的无醇CHCl3溶液显蓝色 2、方法：标准曲线法 3、注意：1)快速测定 , 2)无水操作 , 3)样品温度, 4)专属性

  29. 第二节 维生素B1的分析 氨基嘧啶环－CH2－噻唑环(季铵碱) HCl Cl-

  30. 一、结构和性质 • 1、易溶于水 • 2、硫色素反应 • 3、UV:λmax=246nm • 4、噻唑N（季胺盐）和伯氨基碱性强,显二元碱;嘧啶环上2个N碱性弱，不能成盐 • 5、与生物碱沉淀剂反应生成恒定的沉淀

  31. 二、鉴别试验 1.硫色素反应thiochrome reaction（VitB1特有） • 强碱性：NaOH试液（3.25mol/L）,加酸荧光消失. • 氧化剂：铁氰化钾, 产物：三环共轭显兰色荧光

  32. 氧化 硫色素

  33. 2.沉淀反应 碱性N：与硅钨酸，重金属盐等反应生成沉淀；类似生物碱性质

  34. 沉淀反应 H+ VitB1 H+ H+ H+

  35. 3. Cl- Cl-反应

  36. 4.硫元素反应 S元素反应

  37. 5.IR

  38. 三、含量测定 1、非水溶液滴定法(原料) • （1）盐酸盐ChP2005加HgAc25ml， • ChP2010不加 • （2）VitB1:HClO4（1:2）,指示剂:喹哪啶红-亚甲蓝（ChP2005），ChP2010用电位法 • T=0.1×1/2×337.27=16.86mg.

  39. 标示量%= 2、UV(制剂): 246nm， 片剂 A×D ×W ×1000×100% E × 100×W ×S标 D=100×100÷5 , E=421 注射液: A×D ×1000×100% E × 100×V ×S标 标示量%=

  40. 3、硫色素荧光法：USP34-NF29 • VitB1OHˉ/铁氰化钾 硫色素, 异丁醇提取, 365 nm下呈蓝色荧光，435nm, 对照品法测定含量.

  41. + NaOH + 铁氰化钾 + 异丁醇 + NaOH + 异丁醇 S 对照液 d A + NaOH + 铁氰化钾 + 异丁醇 + NaOH + 异丁醇 供试液 b

  42. 第三节 维生素 C

  43. 1、易溶于水 2、水溶液呈酸性 一、结构和性质 1.溶解性, C3－OH的 pKa = 4.17 一元酸 C2－OH的 pKa = 11.57

  44. 2. 光学活性 手性C（C4、C5） * L(+)－抗坏血酸 活性最强 *

  45. 3.强还原性:烯醇式(dienol group)结构

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