BAKT RIUMOK TENY SZT SE

1. BAKT�RIUMOK TENY�SZT�SE

2. A n�veked�st befoly�sol� t�nyezok T�panyagok Sz�nforr�s (CH, AS sz�nl�nca), nitrog�nforr�s (pepton, amm�nia) !! n�veked�si faktorok, vitaminok, nyomelemek Hom�rs�klet pszichrofil (<20�C)� mezofil � termofil (>50 Thermus aquaticus) pH acidofil (Lactobacillus) � alkalofil (Vibrio cholerae), legt�bb 7,2-7,6

3. Oxig�nig�ny Oblig�t aerob (csak O2 jelenl�t�ben M. tuberculosis) / fakultat�v anaerob / oblig�t anaerob (Clostridiumok, toxikus az O2,) CO2 atmoszf�ra m�rt�ke l�gk�ri = 0.03% Mikroaerofil (alacsony O2, magas CO2, C. jejuni ), aerotoler�ns (02 jelenl�t�ben is ferment�l S.pyogenes) Toxikus oxig�nform�k k�z�mb�s�t�s�nek k�pess�ge: Szuperoxid diszmut�z (2 O2- + 2 H+ ? H2O2 + O2) Katal�z (2 H2O2 ? 2 H2O + O2)

4. T�pl�lkoz�si t�pusok - I Autotr�f szervetlenbol szervest �p�tenek fel ehhez energiaforr�s: f�ny (fotoautotr�fok) oxid�ci� (kemoautotr�fok) pl. szulfid ? szulf�t, nitrit ? nitr�t k�rtani jelentos�g�k nincs

5. T�pl�lkoz�si t�pusok - II Heterotr�f szerves t�panyagot ig�nyelnek C-forr�s: gl�k�z, tejsav, kem�ny�to, � N-forr�s: aminosavak, � majdnem az �sszes patog�n ide tartozik Paratr�f csak �lo sejtekben tudnak szaporodni pl. lepra k�rokoz�ja (eg�rtalpban), rickettsi�k

6. Energianyer�s t�pusai L�gz�s (aerobok!) van katal�z �s szuperoxid-diszmut�z enzim sz�nhidr�t anyagcsere: gl�k�z ? piroszolosav ? citr�tk�r ? l�gz�si l�nc ? sok ATP + CO2 + H2O termin�lis elektron-akceptor = O2 Ferment�ci� (anaerobok!) nincs enzim a k�ros oxid�ci�s term�kek semleges�t�s�re gl�k�z ? etanol + tejsav ? kev�s ATP + CO2 + H2

7. Bakt�riumok n�veked�si g�rb�je

8. T�ptalajok - I Halmaz�llapot szerint foly�kony (h�sl�, buillon) szil�rd (lemez, magas, ferde agar, Koch tal�lta ki) Petri cs�sze! Elo�ll�t�s szerint term�szetes (epe, tej, h�sl�, ...) mesters�ges Funkci� szerint �norm�l� szelekt�v (pl antibiotikummal g�tl�dik ami nem �rdekel minket) differenci�l� ( biok�m tul alapj�n elk�l�n�thetoek a hasonl� bakt�riumok) d�s�t�

9. T�ptalajok - II Bouillon

10. T�ptalajok - III Egyszeru lemez agar

11. Telepmorfol�giai jellemzok telep nagys�ga telep f�nye (t�kr�zodo, op�l, �ttetszo) telep alak (�p sz�lu, csipk�zett, k�ld�k�s , kerek, plat�szeru) telep �llaga (sima, sz�raz, gumiszeru, elfoly�s) telep sz�ne (pigment termel�s) hemol�zis: ? �s ? teny�szet szaga (h�rsfa, fokhagyma)

12. Hogy ezeket l�ssuk, IZOL�LT TELEPEK-re van sz�ks�g�nk: Telepmorfol�giai jellemzok

13. Mintateny�szetek - I Escherichia coli agar t�ptalajon semmi k�l�n�s jellemzo, �tlagos telepek

14. Mintateny�szetek - II Bacillus cereus agar t�ptalajon erosen ny�lk�s, csipk�zett sz�lu, felho-szeru (�med�zafo-szeru�) teny�szet, ritka az izol�lt telep

15. Mintateny�szetek - III Proteus mirabilis agar t�ptalajon rajz�s !

16. Mintateny�szetek - IVIntracellul�ris pigmenttermel�s Staphylococcus aureus arany pigment Staphylococcus epidermidis feh�r pigment

17. Mintateny�szetek - V Extracellul�ris pigmenttermel�s Pseudomonas auruginosa t�bbf�le pigment, extracellul�risan ?? az eg�sz t�ptalaj elsz�nezodik a z�ld pigment domin�l t�ptalajon

19. Mintateny�szetek - VI - hemol�zis ?-hemol�zis: Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, Bacillus cereus teljes feltisztul�s

20. Anaerob teny�szt�sI - Fizikai m�dszerek O2 kiforral�sa O2 kisz�v�sa (v�kuum � anaeroszt�t) Sz�rt teny�szet magas agaron (kar�csonyfa)

21. Anaerob teny�szt�sII - K�miai m�dszerek 1. Redoxpotenci�l cs�kkent�se Holman m�dium (apr�ra dar�lt h�sdarabk�k) tioglikol�tos m�dium indik�tor jelzi az �tlevegos�d�st lez�r�s paraffin gyuruvel

22. Anaerob teny�szt�sII - K�miai m�dszerek 2. Preis m�dszer erosen O2-ig�nyes reakci� j�tsz�dik le a teny�szt�si t�rben GasPak: a teny�szetek behelyez�se ut�n a felszak�tott zacsk�kban levo reagensek reag�lni tudnak egym�ssal, elvonva az oxig�nt (CO2 fejleszt�s)

23. Anaerob teny�szt�sIII - Biol�giai m�dszer Fortner elj�r�s elavult!! A k�t r�szre osztott Petri cs�sze egyik t�rfel�n erosen aerob bakt�riumot (pl. Serratia) teny�szt�nk, ami elvonja az �sszes oxig�nt

24. Hemokult�ra - I V�r vagy m�s steril minta teny�szt�s�re Milyen esetben alkalmazzuk: meningitis, endocarditis, bacteraemia, sziszt�m�s fertoz�s gyan�ja, peritonitis, FUO (=ismeretlen eredetu l�z), mesters�ges l�legeztet�s sor�n kialakul� fertoz�s, k�rokoz� v�lt�s ter�pia alatt, implant�ci� ut�ni l�z, � Inkub�ci�s ido: 7-10 nap de: 80-90%-ban m�r az elso 24 �ra alatt pozit�v lesz!

25. Hemokult�ra - II Fontos szab�lyok Legal�bb k�t minta kell: k�l. helyekrol, k�l. idoben ! Frissen sz�rt v�n�b�l !! legjobb a l�z kezdet�n elegendo mennyis�get kell levenni (2-30 ml) Sterilit�s!! Antibiotikum kezel�s alatt: ab-k�to gy�ngy�kkel Aerob / anaerob palackp�r

26. Hemokult�ra - III

27. Transzport m�diumok - I Transzport k�zeg p�lda: Stuart m�dium a bakt�riumok maximum 48 �r�ig t�l�lnek, de nem szaporodnak 0,2%-os agar T�rol�s szobahon! anaerobok is t�l�lnek

28. Transzport m�diumok - II Transzport t�ptalajok A bakt�riumok szaporodnak is benne, mire a laborba �rnek P�ld�k: Uriline, Uricult, Gonoline, stb. Muanyag lemez k�t oldal�n k�t vagy h�rom k�l�nb�zo t�ptalaj (szelekt�vek is)

29. Biofilm - I Jelentos�ge v�zben �lo mikroorganizmusok 99,9%-a biofilmk�nt �l a felsz�neken �lo szervezetben: fel�letek koloniz�ci�ja (nat�v �s be�ltetett) Kialakul�sa elok�sz�to r�teg (slime k�pz�s): elektrolitok (Ca2+, Mg2+), feh�rj�k, stb. bakt�riumok letapad�sa, konzorcium l�trehoz�sa biofilm leszakad�sa (disszemin�ci�) planktonikus

30. Biofilm - II Kimutat�sa elektronmikroszk�ppal �vegcso fal�n, fest�ssel Antibiotikum rezisztencia nagyobb penetr�ci� g�tolt szaporod�s lass�bb g�ntranszfer sokkal intenz�vebb (+leszakad�skor elviszik!)

31. Antibiotikum rezisztencia: biofilm versus planktonikus f�zis

32. Biofilm - III K�rk�pek biofilmmel: nat�v sz�vbillentyu endocarditis (Streptococcus, S. aureus, Enterococcus , Candida, Aspergillus) be�ltetett eszk�z�k: �rp�lya kan�l�k (pl. centr�lis v�n�s, perif�ri�s), h�gy�ti kat�terek (Enterococcus, Gram -, Pseudomonas, Serratia, Citrobacter), mubillentyu, intrauterin eszk�z�k, fog�szati implant�tumok (tit�nium), kontakt lencse, be�ltetett szemlencse, cs�poprot�zis, t�rdprot�zis, � kr�nikus bakteri�lis prostatitis CF (cisztikus fibr�zis): Pseudomonas aeruginosa, S. aureus, Burkholderia, H. influenzae (algin�t k�pz�s!) periodontitis, fog plaque