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HLA Typing

HLA Typing. ▶ HLA 에 대하여 ▶ Crossmatching 에 대하여. HLA (Human Leukocyte Antigen). ▶Class1-A,B,C:T-lymphocytes ▶Class2-DR,DP,DQ:B-lymphocytes ▶Class3-C2,C4,TNF(tumor necrosis factor) ▶ 사람의 MHC(major histocompetibility complex) 에서 생성되는 분자 ▶ HLA 의 다형성 (polymorphism)

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HLA Typing

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Presentation Transcript

  1. HLA Typing ▶ HLA 에 대하여 ▶ Crossmatching 에 대하여

  2. HLA (Human Leukocyte Antigen) ▶Class1-A,B,C:T-lymphocytes ▶Class2-DR,DP,DQ:B-lymphocytes ▶Class3-C2,C4,TNF(tumor necrosis factor) ▶ 사람의 MHC(major histocompetibility complex)에서 생성되는 분자 ▶ HLA의 다형성(polymorphism) ▶ HLA 분자내 항원 결합부위-T 세포의 항원 수용체 인식부위에 밀접

  3. HLA 유전자 ▶사람의 제 6번 염색체의 단완부에 위치 ▶인체 세포의 표면에 존재하는 당단백 분자 ▶유전 haplotype (일배체형): 동일 염색체상에있는 HLA항원의 조합이며, 일배체형으로 유전함 부모 자식간에는 50% 유사 형제 자매간 일치 확률은 25% 타인간의 일치확률은 2-3만분의1

  4. 6번 chromosome • + Class II + +------ Class III - - - -------------+ + Class I+ • DP DQ DR 21B C4B 21A C4A BF C2 TNF B C A • ---------------------------------------------------------------------------------- <MHC gene complex on chromosome 6>

  5. HLA haplotype • (부) (모) (부) (모) • ab cd A24 ||A24 A2 || A11 • | | Cw1 ||Cw8 Cw3 || Cw6 • +---------------+ B5 ||B55 B46 || B13 • +-------+-------+--------+ DR4 ||DR8 DR9 || DR7 • | | | | a b c d • ac ad bc bd • HLA-identical : 25% chance • HLA-semi-identical : 50% chance • HLA-nonidentical : 25% chance

  6. HLA 형별 검사 이용 ▶ 장기이식: 적절한 장기 공여자 선정 ▶ 질병진단: 강직성 척추염(B27),혈색소증(A3) 류마티스관절염(DR4),Narcolepsy(DR2), Behcet’s disease(B5) … ▶ 법의학적: 친자감별, 범인검색 ▶ 면역학연구 ▶유전학적연구:인류학연구

  7. Crossmatch 원리 ▶ 미세림프구 독성 검사 ( microlymphocytotoxicity)

  8. Crossmatch 목적 ▶ 초급성 거부반응(hyperacute rejection)의 예방 ▶ 이식된 장기의 생존 예측 ▶ 장기이식 전 HLA 항체 존재 유무

  9. Crossmatch 채혈량 ▶ 환자(Recipient) ACD tube 7ml (4개) plain tube 3ml (1개) ▶ 공여자(Doner) ACD tube 7ml (4개) plain tube 3ml (1개)

  10. Crossmatch 검사 준비 ▶ 대조혈청 (control) ▶ 환자의 T cell, B cell ▶ 공여자의 T cell, B cell ▶ 환자와 공여자의 혈청 ▶ column ▶ 10%FBS(fetal bovine serum)

  11. 환자, 공여자의 림프구 분리 ▶ 원리: 비중원침법(density gradient centrifugation) ▶ 검사에 맞는 세포 상태 림프구 순도: 80% 이상 세포수:2,000~3,000/L 생존율:80% 이상

  12. RPMI로 중첩후 원심분리한 사진 Neubauer chamber

  13. T cell, B cell 분리 ▶ T cell 분리: B 림프구의 nylon 흡착 성질을 이용하여 분리된 림프구를 nylon wool column에 넣어 37℃ water bath 안에 있던 10% FBS-RPMI로 씻어낸다 이때 손이흔들리면안된다(B cell 이떨어지기때문) ▶ B cell 분리: column내에 nylon을 물리적인 충격을 주며 column을 씻어낸다.

  14. Coulmn and nylon

  15. T-Cell 과 B-Cell 을 분리하는모습

  16. Microplate 분주

  17. 검사 과정

  18. 임상적 의의 ▶초급성 거부반응의 원인 ▶ 음성 반응을 확인한 후에 장기이식을 시행 ▶T 림프구에 대한 항체가 양성인 경우: 이식 금기 ▶ B 림프구에 대한 항체가 양성인 경우: 이식 금기 사항은 아니지만 높은 역가일 때 이식 성적이 불량

  19. 염색 전후의 Microplate, inverted microscopy

  20. Hemilton sylringe , 5% Eosin-Y

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