1 / 20

Fumarate hydratase (EC. 4.2.1.2)

Fumarate hydratase (EC. 4.2.1.2). Amalina Ghaisani Komarudin 10507008 Program Studi Kimia Institut Teknologi Bandung. Agenda Presentasi . Pendahuluan Struktur Fumarase Mekanisme Fumarase Isolasi Fumarase Pemurnian Fumarase Karakterisasi Fumarase Kinetika Fumarase Defisiensi Fumarase.

duscha
Télécharger la présentation

Fumarate hydratase (EC. 4.2.1.2)

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Fumarate hydratase (EC. 4.2.1.2) Amalina Ghaisani Komarudin 10507008 Program Studi Kimia Institut Teknologi Bandung

  2. Agenda Presentasi • Pendahuluan • Struktur Fumarase • Mekanisme Fumarase • Isolasi Fumarase • Pemurnian Fumarase • Karakterisasi Fumarase • Kinetika Fumarase • Defisiensi Fumarase

  3. Pendahuluan Siklus Krebs

  4. Reaksi yang Dikatalisis Reaction: (S)-malate = fumarate + H2O

  5. Tata nama enzim Fumarase Fumarase (EC. 4.2.1.2) EC 4 : Lyase EC 3.1 : Carbon-Oxygen Lyase EC 3.1.1 :Hydro-Lyase Accepted name: Fumarate Hydratase Hydro Lyase Lyase Carbon-Oxygen Lyase

  6. Penggolongan Enzim Fumarase • Klasifikasi berdasarkan penyusunan subunit, kebutuhan logam dan ketermostabilan. • Prokaryot memiliki tiga jenis Fumarase : Fumarase A, Fumarase B dan Fumarase C

  7. Struktur Fumarase C dari E.coli Terdiri dari tiga domain, dimana posisi region 1-3 berjauhan Memiliki dua buah dicarboxylate binding site yaitu A site dan B site A site dan B site teridentifikasi memiliki area yang tidak terisi ligan

  8. Residu pada sisi aktif Fumarase

  9. Mekanisme Enzim Fumarase

  10. Isolasi Fumarase Euglena gracilis var. bacillaris

  11. Pemurnian Fumarase Euglena gracilis var. bacillaris • + 70 mL buffer • French pressure cell pada 10.000 lb/in2 • Sentrifugasi 27.000 x g selama 30 menit Crude extract 50 g sel • Dipanaskan pada suhu 50o C selama 3,5 menit • Sentrifugasi pada 27.000 x g selama 20 menit Supernatan pH dibuat menjadi 7.8 dengan 2 M triethanolamine Fraksinasi dengan amonium sulfat 40 % dan 60 % Ekstrak enzim

  12. Pemurnian Fumarase Euglena gracilis var. Bacillaris (lanjutan) • Dialisis dengan bufer selama 3 jam • Sentrifugasi Supernatan Hasil fraksinasi • Ditambah NADH, NAD+, NADPH, NADP+ Kromatografi afinitasMatrix gel Orange A Karakterisasi Fumarase

  13. Karakterisasi Fumarase

  14. Hasil elektroforesis

  15. Parameter kinetika Enzim Fumarase • Aktivitas maksimum pada pH 8,4 • Km Malat = 0,14 mM • Km Fumarat = 0,031 mM • ATP merupakan inhibitor • Pada 10 mM Tris-acetate (pH 7.3) dan konsentrasi malat= 1 mM, 32,2 mU E. gracilis fumarase terinhibisi 50% oleh 0,35 mM ATP.

  16. Defisiensi Enzim Fumarase • Defisiensi fumarase disebabkan oleh mutasi gen yang mengkode fumarase • Kekurangan Fumarase menyebabkan ensefalopati, retardasi mental yang berat, fitur wajah yang tidak biasa, kelainan otak, dan serangan epilepsi karena jumlah abnormal rendah fumarase dalam sel. • Pola penurunan penyakit ini adalah autosomal resesif

  17. Referensi • Purification, Characterization and Immunological Properties of Fumarase from Euglena gracilis var. Bacilaris. Hitoshi Shibata, William E. Gardiner, Steven D. Schwartzbach. Journal of Bacteriology, Nov. 1985, P. 762-768 • The role of the allosteric B site in the fumarase reaction. Irwin A. Rose and Todd M. Weaver. www.pnas.orgcgidoi10.1073pnas.0307524101 • Structure of Free Fumarase C from Escherichia coli . Todd Weaver. Acta Cryst. (2005). D61. 1395-1401

  18. SEKIAN DAN TERIMA KASIH

More Related