1 / 15

Oxidativní stres

Oxidativní stres. redoxní rovnováha poškození biologických makromolekul. Chemiluminescence. Chemiluminiscence (1)

maylin
Télécharger la présentation

Oxidativní stres

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Oxidativní stres • redoxní rovnováha • poškození biologických makromolekul Metody stanovení oxidativního stresu

  2. Chemiluminescence Chemiluminiscence (1) Luminofory jsou oxidovány RMKD. Při návratu dozákladního energetického stavu emitují fotony. Jejich detekce je možná pomocí luminometrů nebo scintilačních spektrofotometrů. Nejčastěji používané luminofory: • Luminol • Lucigenin • Izoluminol • Pholasin Metody stanovení oxidativního stresu

  3. Chemiluminescence luminol RMK aminoftalát isoluminol Metody stanovení oxidativního stresu

  4. plazmatická membrána fagosom granule NADPH oxidasa CL fagocytů Metody stanovení oxidativního stresu

  5. NADP+ NADPH + H+ NADPH oxidasa O2-• O2 luminol + oxidant -aminoftalát + N2 + světlo (425 nm) (O2-, H2O2, OH) CL fagocytů Metody stanovení oxidativního stresu

  6. CL fagocytů • Rozlišení intra- a extracelulární CL • SOD, kataláza, křenová peroxidáza, azid sodný • luminol vs. isoluminol • Streptococcus mutans Metody stanovení oxidativního stresu

  7. plazmatická membrána cytosol luminol isoluminol CL fagocytů Metody stanovení oxidativního stresu

  8. CL fagocytů Aktivátory fagocytů Místo působení opsonizované částice (OZP) povrchové receptory fMLP povrchové receptory PMA proteinkinasa C vápníkový ionofor A23187 Ca2+ PKC Metody stanovení oxidativního stresu

  9. Systémy generující RMKD • xanthin/xanthin oxidáza O2-• • peroxid vodíku + ionty přech. kovů •OH • peroxid vodíku H2O2 • ABAP ROO• • SIN-1 ONOO- • buněčné systémy (fagocyty) Metody stanovení oxidativního stresu

  10. Metoda TRAP • Total (peroxyl) Radical-trapping Antioxidative Parameter • stanovení celkové antioxidační kapacity ve vodě rozpustných antioxidantů • referenční vzorek: trolox Metody stanovení oxidativního stresu

  11. Metoda TRAP • 2,2‘-azobis(2-amidinopropane) dihydrochloride • 2,2‘-azobis(2-methylpropionamide) dihydrochloride Metody stanovení oxidativního stresu

  12. Metoda TRAP v lipidové fázi • 2,2‘-azobis(2,4-dimethylvaleronitrile) Metody stanovení oxidativního stresu

  13. Metoda TRAP RN = NR N2 + 2R* R2, další reakce 2O2 2RO2* peroxylový radikál Metody stanovení oxidativního stresu

  14. Metoda TRAP Přidání vzorku CL 50% peak Čas 1/2 peak-time Metody stanovení oxidativního stresu

  15. Chemiluminescence Chemiluminiscence (2) • aktivitaMPO: bromid-dependentní chemiluminiscence v přítomnosti vzorku a peroxidu vodíku • buněčná proliferace a cytotoxicita: luciferin-luciferáza závislé na ATP • exprese genů reporter gene assay Metody stanovení oxidativního stresu

More Related