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Identificação de Enterobactérias .

Identificação de Enterobactérias . Dra. Tânia Mara Ibelli Vaz Pesquisador Científico Instituto Adolfo Lutz - São Paulo. Família Enterobacteriaceae Patogenia Isolamento e identificação de enterobactérias Aspecto das colônias Identificação Bioquímica ( cultura pura) Reação de VM e VP

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Identificação de Enterobactérias .

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Presentation Transcript

  1. Identificação de Enterobactérias. Dra. Tânia Mara Ibelli Vaz Pesquisador Científico Instituto Adolfo Lutz - São Paulo

  2. Família Enterobacteriaceae Patogenia Isolamento e identificação de enterobactérias Aspecto das colônias Identificação Bioquímica ( cultura pura) Reação de VM e VP Escherichia coli Salmonella Shigella Klebsiella Enterobacter Serratia Citrobacter Proteus - Providencia - Morganella Fluxograma BGN OXIDASE Considerações finais índice sair

  3. Família Enterobacteriaceae sair índice • Introdução • Definição • Bacilos Gram negativos • AAF / Fermentadores da glicose • Oxidase negativa e catalase + • Móveis / imóveis • Cresce em meios comuns • Habitat • Plantas, solo, água, intestino do homem e animais

  4. Família Enterobacteriaceae sair índice • Introdução • Nomenclatura e Classificação • Métodos Fenotípicos • Moleculares novas espécies • reclassificação • Classificação • Gêneros ( 42) • Espécies ( centenas ) • biotipos e sorotipos •  Complexos

  5. Identificação de Enterobactérias sair índice Classificação - patogenia - Enteropatógenos - Infecções nosocomiais - espécies importantes - Outras espécies - raras em material clínico isoladas em : meio ambiente plantas animais

  6. Família Enterobacteriaceae Patogenia sair índice Enterobactérias- principal componente da flora intestinal normal do homem. • Infecções -intestinal, feridas e trato urinário • Abcessos, pneumonia, meningites • Infecções nosocomiais

  7. Família Enterobacteriaceae Patogenia sair índice • Infecções intestinais • Características • normalmente na comunidade • DTA – doença transmitida por alimento • surtos / casos isolados • hospitalar • Patógenos entéricos clássicos • Salmonella spp • Shigella spp • E.coli - categorias diarreiogênicas • Yersinia enterocolitica

  8. Família Enterobacteriaceae Patogenia sair índice • Infecções extra-intestinais • Comunidade • Hospitalar • Qualquer espécie • Fatores de risco: • Paciente • Veículos de transmissão • Alimentos contaminados Espécies mais comuns Escherichia coli Klebsiella pneumoniae Klebsiella oxytoca Proteus mirabilis Enterobacter spp Salmonella ( sorotipos) Serratia marcescens Citrobacter spp Providencia spp

  9. Família Enterobacteriaceae sair índice ISOLAMENTO E IDENTIFICAÇÃO DE ENTEROBACTÉRIAS • Crescem bem nos meios comuns e meios seletivos para BGN • ( 18 a 24h  1 mm de diâmetro). • 1- Exame macroscópico da cultura: • Aspecto morfológico das colônias ( AS, MC,SS, TSA ) • Tempo de crescimento e tamanho da colônia • Observar pureza da cultura • 2-Exame microscópico da cultura: • Gram: tamanho, morfologia, reação tintorial, etc

  10. Aspecto das colônias sair índice Agar MacConkey

  11. Aspecto das colônias sair índice E.coli Salmonella. E.cloacae

  12. Salmonella.

  13. E. coli

  14. E. cloacae Aspecto das colônias

  15. Família Enterobacteriaceae sair índice Identificação Bioquímica ( cultura pura) • Meios presuntivos • IAL (Pessoa e Silva) • EPM-MILI • TSI IAL

  16. Família Enterobacteriaceae sair índice Identificação Bioquímica Série completa - 47 testes Provas complementares: Fermentação de açúcares LDC- ODC - ADH CiSi Pesquisa de enzimas DNase gelatinase,lipase, NAR, ONPGase Gram Oxidase VM e VP

  17. Família Enterobacteriaceae sair índice Reação de VM e VP Enterobactérias VP+ Enterobactérias VP - • Maioria das espécies dos outros Gêneros • Salmonella • Shigella • E.coli • Proteus • Morganella • Providencia • Citrobacter • Kluyvera • Enterobacter • Klebsiella • Serratia

  18. Escherichia coli sair índice Diagnóstico Diferencial lac+ CISI - K.oxytoca ( LDC+/ motil.-CiSi+) Citrato de Simmons Prova Citrobacter amalonaticus e C. diversus ( LDC-/motil.+CiSi+) Glicose+/Gás+/- sacarose+/- urease- *H2S- TDA- indol+ LDC+/- Motilidade+/- Marcadores Epidemiológicos Infec. Intestinais Sorotipagem Fatores de virulência Infec. Extra-intestinais Sorotipagem Met. moleculares Aeromonas

  19. Salmonella sair índice Diagnóstico diferencial Glicose+/gás v sac - H2S + urease- TDA - indol - LDC + Mov. + CiSi+ Lac - Citrobacter spp ( H2S + ) Proteus Prova de Fermentação glicerol Marcadores Sorotipagem Fagotipagem Moleculares

  20. Shigella sair índice Diagnóstico diferencial Glic.+ /gás - sac - urease - TDA - H2S indol v LDC - Mov. - CiSi - Lac - E.coli ( LDC - / Mov.-) Lactose Ci Christ. Acetato Trab. CitratoSódio Marcadores Sorotipagem Met.moleculares

  21. Klebsiella sair índice Diagnóstico diferencial Lac+ CiSi + Enterobacter ( LDC+ / Mov.-) ADH ODC Fermentação Marcadores Sorotipagem Met. moleculares

  22. Enterobacter sair índice Diagnóstico diferencial Lac+ CiSi+ Enterobacter Klebsiella Serratia LDC,ODC,ADH Motilidade DNase Fermentação E.cloacae Marcadores Sorotipagem Met. moleculares

  23. Serratia sair índice Espéciesde Serratia Glic.+ / gás- sac. - urease - H2S - TDA - indol - LDC + Mov. + CiSi + Lac - LDC,ODC, malonato, fermentação , pigmento DNase + Gelatinase + Lipase + Marcadores: Sorotipagem Met.moleculares

  24. Citrobacter sair índice Glic.+ / gás- sac =V urease - H2S = V TDA - indol = V LDC - Mov. + Espécies de Citrobacter CiSi + Lac + ODC, indol, H2S malonato fermentação

  25. Proteus - Providencia - Morganella sair índice Diagnósticodiferencial Glic.+/ gás - sac. - urease + TDA + H2S = V indol = V LDC - Mov. + Proteus Providencia EspéciesH2S + BGN NF Swarming TDA, H2S, ODC, gelatinase, fermentação CiSi + Lac +

  26. Fluxograma sair índice BGN Oxidase Lac - Lac + Ágar Mac Conkey IAL IAL Shigella Salmonella Serratia Proteus Providencia Morganella E.coli Enterobacter Klebsiella Kluyvera Citrobacter Salmonella Serratia Proteus/Prov.(V) Enterobacter Klebsiella Kluyvera Citrobacter VP + + + Cit. Simmons Cit. Simmons - - Shigella Morganella E.coli

  27. IDENTIFICAÇÃO DE ENTEROBACTÉRIAS sair índice Enterobactérias em microbiologia clínica  Poucas espécies Espécies incomuns , novas espécies, espécies atípicas  podem ocorrer (isoladas de material clínico, ambiente, plantas e animais) • PROBABILIDADES • Tratar-se de uma espécie rara • Cepa contaminada • Uma ou mais testes não adequados na identificação ( turvação) • Manipulação errada ( concentração do inóculo) • Composição e quantidade do meio ( substrato presente) • Controle de Q

  28. IDENTIFICAÇÃO DE ENTEROBACTÉRIAS sair índice O que fazer? • Checar tudo: • Pureza da cultura • Repetir todos os testes no mesmo sistema ou utilizando os meios anteriormente utilizados • Repetir todos os testes em outro sistema de identificação ou utilizar partidas diferentes do meio. • Encaminhar para laboratórios de referência

  29. Considerações finais sair índice • Importância da caracterização das espécies • Evitar falsos surtos • Não identificação do surto • Atenção para cepas atípicas • Atenção para espécies raras • Atenção para pureza das culturas

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