SUSCEPTIBILITY TESTING آزمایشات حساسیت یا مستعد بودن (انتانات)

1. SUSCEPTIBILITY TESTINGآزمایشات حساسیت یا مستعد بودن (انتانات)

2. SUSCEPTIBILITY TESTINGآزمایش حساسیت یا مستعدبودن باکتری ها به مقابل ادویه ضد مکروب 3a. Considering the clinical significance, determine step-by-step procedures involved in antibiotic susceptibility testing of bacterial organisms with a minimum of 70% accuracy. (1) History (2) How Antibiotics Work (3) Susceptibility Testing 3a. تمام پروسه های مرحله وار یا قدم بقدمی را که در آزمایش حساسیت یا مستعد بودن اورگانیزم های باکتریایی به مقابل انتی بیوتیک ها با در نظر داشت اهمیت سریری آن با دقت 70 درصد توضیح دهید ( معین سازید). (1) تاریخچه (2) انتی بیوتیک ها چطور عمل میکنند (3) آژمایش حساسیت

3. SUSCEPTIBILITY TESTINGآزمایش حساسیت یا معروض بودن 3b. Given the appropriate supplies, equipment, and reagents, perform susceptibility testing of a bacterial organism, correctly interpreting at least seven of ten antibiotic sensitivities. (1) Inoculate Mueller-Hinton Plate (2) Dispense Discs and Incubate (3) Interpret and Record (4) ORM Group Discussion 3b. با استفاده از وسایل و مواد لازمه و ریجنت های مناسب ، تست یا آزمایش حساسیت را روی یکی از اورگانیزم های باکتریایی طوری انجام دهید که حد اقل حساسیت مکروب تحت آزمایش را در مقابل 7 ادویه انتی بیوتیک بشکل درست تحلیل شود. (1) عامل باکتریایی مورد نظر را در پلیت حاویی وسط مولر هینتون تلقیح نمایید (2) قرص های انتی بیوتیک را در پلیت قرار داده و آن را انکیوبیشن نمایید (3) نتایج آزمایش را تحلیل و یادداشت نمایید (2) مباحثات گروهی ORM

4. SUSCEPTIBILITY TESTINGتست یا آزمایش حساسیت باکتری ها به مقابل انتی بیوتیک ها 3a. Considering the clinical significance, determine step-by-step procedures involved in antibiotic susceptibility testing of bacterial organisms with a minimum of 70% accuracy. عملیه ها یا طرز العمل های مرحله وار مربوط تست حساسیت باکتری ها در مقابل ادویه انتی بیوتیک را با حداقل 70 درصد دقت معین سازید.

5. Susceptibility Testingآزمایش حساسیت باکتری ها • History • First synthetic drugs • Called “chemotherapeutic agents” • Developed in the early 1900s when disease and bacteria were found to be related • Developed from chemicals that could harm the microorganism but not the patient • Sulfa drugs were developed during WW II • Additional antibiotics were produced to combat specific types of bacteria later • تاریخچه : • اولاً ادویه سنتیتیک ( ترکیبی ) • به نام ادویه شیموتراپیک ( عوامل تداوی کیمیاوی ) یاد میشوند. • این ادویه در اوایل اوایل سالهای 1900 هنگامی که ارتباط میان امراض و باکتری ها شناخته شد به میان آمدند( ایجاد گردیدند) • این ادویه یا عوامل ضد مکروبی از مواد کیمیاوی تشکیل شده اند که به مایکرواورگانیزمها صدمه رسانیده اما خطری را متوجه مریض نمیسازد. • ادویه گروپ سلفا (sulfa ) در جریان جنگ دوم جهانی به میان آمدند ( تولید شدند) • سایر ادویه اضافی ضد مکروبی بعد ها به منظور مجادله با انواع معین باکتری ها ساخته شدند.

6. Susceptibility Testing Cont.آزمایش حساسیت باکتری ها .... • Discovery of Penicillin • First antibiotic discovered; found in 1928 by Alexander Fleming • The growth of S. aureus was inhibited by a mold that accidentally contaminated the petri plate • کشف پنیسیلین ها : • نخستین انتی بیوتیک است که در سال 1982 توسط الکساندر فلمینگ کشف گردید. • نموی ستافیلوکوک های طلایی توسط فنگسی ( قارچی ) که بشکل تصادفی روی پتری دیش را آلوده ساخته بود ، نهی گردید.

7. How Antibiotics Workطرز تاثیر یا چگونگی عمل انتی بیوتیک ها • Definitions of antibiotic types • Natural – Chemical substances produced by bacteria and fungi that destroy or inhibit bacterial growth • Synthetic – Antibiotics made synthetically from man made chemicals • تعریف های انواع یا گروپ های مختلف انتی بیوتیک ها • انتی بیوتیک های طبیعی – مواد کیمیاوی اند که به وسیله باکتری ها و فنگس ها تولید گردیده و باکتری ها را تخریب نموده یا نموی آنها را نهی میکند. • انتی بیوتیک های ترکیبی – انتی بیوتیک های اند که از موادکیمیاوی ساخته بشر بشکل مصنوعی ( ترکیبی ) ساخته میشوند)

8. Spectrum of Antibiotic Activityطیف تاثیر یا ساحه فعالیت انتی بیوتیک ها • Broad spectrum – effective against a broad range of bacteria • Example - Acts against gram negative and gram positive organisms • Disadvantage • Can kill or harm normal flora • Limited spectrum – effective against a narrow range of bacteria • Example – Acts on gram positive bacteria only • انتی بیوتیک های باساحه تاثیر وسیع – به مقابل گروه یا طیف وسیعی از باکتری ها موثریت دارد • مثال – برضد اورگانیزم های گرام منفی و گرام مثبت فعال اند • نقایص این ادویه - فلورای نارمل عضویت را از بین میبرند • انتی بیوتیک های دارای طیف تاثیر محدود- در مقابل طیف بسیار کوچک باکتریا ها موثراند • مثال – تنها به مقابل باکتریهای گرام مثبت عمل میکند

9. Spectrum of Antibiotic Activity Cont. • Bactericidal • Kills the targeted bacteria • Bacteriostatic • Prevents replication or growth of targeted bacteria • انتی بیوتیک های باکتریسایدال ( کشنده باکتریها) • باکتری هدف یا مورد حمله را ازبین میبرند • باکتریوستاتیک ( نهی کننده نموی باکتری ها) - این انتی بیوتیک ها مانع تکثر و نموی باکتری مورد نظر ( هدف ) میشوند

10. Modes of Antibiotic Actionمیکانیزمهای تاثیر یا طرز فعالیت انتی بیوتیک ها • Cell wall synthesis inhibition – Prevents peptidoglycan synthesis in the cell wall • Protein synthesis inhibition • Cell membrane injury – Changes the permeability of the cell membrane • Nucleic acid synthesis inhibition – Prevents DNA or RNA from being formed • Metabolite synthesis inhibition – Prevents the formation of essential metabolites • نهی ترکیب جدار حجروی – انتی بیوتیک های که به این میکانیزم عمل میکنند مانع ترکیب پیپتیدوگلایکون در جدار حجروی میگردد. • نهی ترکیب پروتین باکتری • تخریب یا صدمه زدن به غشای حجروی • بدین ترتیب در قابلیت نفود غشای حجروی تغیر وارد میگردد • نهی اسید های هستوی یا نوکلیک اسید ها • انتی بیوتیک های که به این شیوه عمل مینمایند ، مانع تشکل یا ساخته شدن اسید های هستوی ( DNA یا RNA ) میشوند • نهی ترکیب یا سنتیز میتابولیت ها : • بدین ترتیب مانع از ساخته شدن میتابولیت های اساسی حجره باکتری میشوند

11. Resistance to Antibioticsمقاومت در مقابل انتی بیوتیک ها • Bacteria may pick up genes (plasmids) from other bacteria making them resistant • Bacteria may mutate during reproduction becoming resistant to the antibiotic • باکتری های میتوانند جین ها ( پلازمید ) را از باکتری های دیگر به ارث ببرند که آنها را در مقابل ادویه انتی بیوتیک مقاوم میسازد • باکتری ها میتوانند در جریان تکثر متحمل میوتیشن ( جهش ) گردند که آنها را درمقابل انتی بیوتیک ها مقاوم میسازد.

12. Susceptibility Testingآزمایش حساسیت • Definition • Testing in the clinical lab to determine the susceptibility or resistance of bacteria to antibiotics used for therapy • Purpose • To help the provider determine the best antibiotic for treatment of the infection • اجرای آزمایش در لابراتوار کلینیکی به منظور تعین حساسیت یا مقاومت باکتری های مورد استفاده در تداوی ،صورت میگیرد. • هدف یا مقصد • کمک به طبیب در تعین بهترین انتی بیوتیک برای تداوی انتان مورد نظر

13. Dilution Methodمیتود های رقیق سازی • Antibiotics are serially diluted in tubes • Each tube is inoculated with equal amounts of a bacterial suspension • After incubation, observe for growth (turbidity) • انتی بیوتیک ها به شکل مسلسل در تیوب ها رقیق ساخته میشوند • هر تیوب به مقدار مساوی محلول یا سوسپنشن باکتریایی تلقیح میگردد • بعد از انکیوبیشن تیوب ها را برای نموی باکتری ها مشاهده نمایید( برای مکدریت مشاهده کنید)

14. Dilution Method Cont.میتود های رقیق سازی .. • Minimum inhibitory concentration (MIC) • The lowest concentration of the drug that inhibits growth of the bacteria (no turbidity) • Goal • To give the lowest effective concentration of the drug possible due to toxicity of antibiotics to the patient • حداقل غلظت نهی کننده • پایینترین غلظت ادویه که نموی باکتری را نهی میکند • هدف • تا پایینترین غلظت موثره انتی بیوتیک را به مریض تطبیق کنیم زیرا ادویه تاثیر توکسیسیتی دارند.

15. Dilution Method Cont.میتود رقیق سازی ... • Advantages • Quantitative • Most accurate; can be compared to the actual concentration of the drug inside the patient • Easily adapted to automated systems • Disadvantage • Time consuming (A lot of pipetting) • فواید • مقداری • دقیق ترین روش : میتوان مقدار ادویه آزمایش شده را با غلظت واقعی ادویه درعضویت مریض مقایسه نمود • به آسانی با سیستم های اتوماتیک یا خودکار تطابق حاصل میکند • نواقص • زمان زیاد را در بر میگیرد. پیپت نمودن بیش ازحد ( وقت زیاد صرف پیپت نمودن میشود)

16. Diffusion Method میتود انتشار یا دیفیوژن (Kirby-Bauer Method)( میتود کیربی باویر) • Principle • Antibiotic impregnated discs are placed on heavy bacterial growth on Mueller-Hinton plates • After incubation, zones of inhibition can be seen and measured around the discs if the bacteria is susceptible to the antibiotic • اصول : • قرص های مملو از انتی بیوتیک روی باکتری های که در پلیت های وسط مولر هینتون نمو میکنند ،قرار داده میشوند. • بعد از انکیوبیشن ، اگر باکتری بمقابل انتی بیوتیک ها حساس یا مستعد باشد ، ساحات نهی نموی باکتری در اطراف قرص های انتی بیوتیک مشاهده گردیده واندازه میشوند.

17. Diffusion Method(Kirby-Bauer Method) Cont.میتود دیفیوژن...... • Zone sizes can be effected by: • Ability and rate of diffusion of the antibiotic into the media • Turbidity of the bacterial suspension (too much or too little bacteria) • Growth rate of the organism • Degree of sensitivity of the bacteria to the antibiotic • Advantages • Economical, simple, and reproducible • اندازه ساحات یا زون های نهی نموی باکتری در اطراف قرص های انتی بیوتیک میتواند توسط عوامل ذیل متاثر گردد: • قابلیت و سرعت انتشار انتی بیوتیک در وسط زرعیه استفاده شده • درجه مکدریت محلول حاوی باکتریا ( باکتری بسیار زیاد یا بسیار کم) • سرعت نموی اورگانیزم مورد نظر • درجه حساسیت باکتری به انتی بیوتیک • فواید • اقتصادی ( ارزان ) ساده و قابل تولید دوباره

18. SUSCEPTIBILITY TESTINGآزمایش حساسیت باکتری ها 3b. Given the appropriate supplies, equipment, and reagents, perform susceptibility testing of a bacterial organism, correctly interpreting at least seven of ten antibiotic sensitivities. 3b. با استفاده از مواد لازمه، تجهیزات و ریجنت های مناسب ، آزمایش حساسیت را روی یک اورگانیزم باکتریایی اجرا نموده و حساسیت آنرا درمقابل حداقل 10 انتی بیوتیک تفسیر و تحلیل نمایید.

19. Inoculate Mueller-Hinton Plateتلقیح یا وخذه در پلیت حاوی وسط مولر هینتون • Suspend 3-10 colonies in broth or saline • Compare turbidity to 0.5 McFarland standard • If suspension is too light – add more bacteria or incubate for 2-4 hours and recheck • If suspension is too heavy – add more broth or saline and recheck • در حدود 10-3 کالونی باکتری را در وسط برات(broth ) یا سالین به حالت تعلیق درآورید ( حل کنیدُ) • مکدریت یا درجه آلوده گی محلول حاصله را با معیار یا ستندرد مک فلوراند مقایسه نمایید • اگر سوسپنشن یا محلول بسیار روشن یا شفاف باشد َ، باکتری زیادتر را به آن علاوه نموده یا اینکه آنرا به مدت 4-2 ساعت انکیوبیشن نموده و مکدریت آنراردوباره چک کنید. • اگر محلول بسیارغلیظ باشد ، مقدار بیشتر saline یا broth را به آن علاوه نموده و آنرا دوباره چک کنید.

20. Inoculate Mueller-Hinton Plate Cont.وخذه باکتری در پلیت حاوی وسط مولر هینتون..... • Inoculate the plate with the bacterial suspension by streaking with a swab in three planes • Ring the swab around the edge of the plate • The suspension should be over the entire plate surface • پلیت را با محلول باکتریایی با فروبردن سواب در سه ناحیه تلقیح نمایید. • سواب را در اطراف پلیت ( امتداد کنار های آن) دور دهید ( با آن حلقه رسم کنید) . • محلول یا سوسپنشن باکتریا باید روی تمامی سطح پلیت موجود باشد.

21. Dispense Discs and Incubateقرار دادن دیسکها ( قرص های ادویه) روی پلیت و انکیوبیشن آنها • Dispense discs by hand or with a dispenser • Incubate for 18-24 hours at 35-37° C in the aerobic incubator • Do not place plates in the CO2 incubator • دیسک هایا قرص هارا با دست یا با استفاده از یک دسپنسر روی پلیت قرار دهید • پلیت را به مدت 24-18 ساعت به حرارت 37-35 درجه سانتی گرید، در انکیوبیتور ایروبیک یا هوازی نگهداری یا انکیوبیشن نمایید. • پلیت ها را در انکیوبیتور کاربن دای اوکساید قرار ندهید.

22. Interpret and Recordنتایج آزمایش را تفسیر یا تحلیل نموده ویادداشت نمایید. • Interpretation of susceptibility results • Reported as susceptible, intermediate, or resistant to each antibiotic based on the size of the zone of inhibition • Susceptible – Infection will be controlled by the prescribed dosage of antibiotic • Intermediate – Infection may be controlled by high concentrations of the antibiotic • Resistant – Infection will not be controlled by the antibiotic • تفسیر نتایج تست های حساسیت • نتیجه تست نظر به اندازه یا وسعت ساحه نهی نموی باکتری ها بشکل مستعد ( حساس ) ، حالت بین البینی و یا مقاوم در مقابل هرکدام از انتی بیوتیک ها ، راپور داده میشود. • حساس یا مستعد به انتی بیوتیک – انتان با دوز تجویز شده انتی بیوتیک کنترول خواهد شد • حالت بین البینی – انتان را میتوان با تجویز دوز یا غلظت بلند انتی بیوتیک کنترول نمود • مقاوم – انتان را نمیتوان با انتی بیوتیک مورد نظر کنترول نمود.

23. Interpret and Record Cont.مطالعه ( تفسیر) نتایج آزمایش ویادداشت نمودن آنها • Zones are measured for interpretation • Measure with calipers, rulers, or templates • Measure the diameter of the zone at the widest part • Manufacturer’s instructions will determine whether the zone size correlates to susceptible, intermediate, or resistant • ساحات اطراف دیسک های انتی بیوتیک ها ( که نموی باکتری در آن نهی شده است) ، باید اندازه شوند • این ساحات را با استفاده از پرکار ، خط کش ، یا اشکال معین ، اندازه نمایید • قطر ساحه مورد نظر را در عریض ترین ناحیه اندازه نمایید • اینکه سایز یا اندازه ساحه به کدام کتگوری حساس، بین البینی یا مقاوم مربوط میشود نظر به هدایات کمپنی مولد قرص ها ( وسایل آزمایش) معین میشود.

24. Interpret and Record Cont.تفسیر و ثبت نتایج آزمایشات .... • Sources of error • Zones overlapping • More than one species of bacteria on the plate • Zones too close to the side of the plate • Irregular growth of bacteria (too much, too little, or uneven growth) • Record results on the worksheet and turn in to the instructor for grading • Good Luck!! • منابع خطا های ممکنه • روی هم قرار گرفتن ساحات اطراف قرص ها • موجودیت اضافه تراز یکنوع باکتری در روی پلیت • قرار گرفتن ساحات در نزدیکی بسیار زیاد با کنار یا سرحد پلیت • نشو نموی غیر منظم باکتریا ( بسیار زیاد ، بسیار کم ، یا نموی غیر مساوی ) • نتایج را روی یک صفحه یا فورم لابراتوار یادداشت نموده و آنرا به آموزگار تسلیم نمایید تا آنرا درجه بندی نمایید.

25. SUSCEPTIBILITY TESTINGتست برای مساعد کردن 3a. Considering the clinical significance, determine step-by-step procedures involved in antibiotic susceptibility testing of bacterial organisms with a minimum of 70% accuracy. (1) History (2) How Antibiotics Work (3) Susceptibility Testing 3a. تمام پروسه های مرحله وار یا قدم بقدمی را که در آزمایش حساسیت یا مستعد بودن اورگانیزم های باکتریایی به مقابل انتی بیوتیک ها با در نظر داشت اهمیت سریری آن با دقت 70 درصد توضیح دهید ( معین سازید). (1) تاریخچه (2) انتی بیوتیک ها چطور عمل میکنند (3) آژمایش حساسیت

26. SUSCEPTIBILITY TESTING تست برای مساعد کردن 3b. Given the appropriate supplies, equipment, and reagents, perform susceptibility testing of a bacterial organism, correctly interpreting at least seven of ten antibiotic sensitivities. (1) Inoculate Mueller-Hinton Plate (2) Dispense Discs and Incubate (3) Interpret and Record (4) ORM Group Discussion 3b. با استفاده از وسایل و مواد لازمه و ریجنت های مناسب ، تست یا آزمایش حساسیت را روی یکی از اورگانیزم های باکتریایی طوری انجام دهید که حد اقل حساسیت مکروب تحت آزمایش را در مقابل 7 ادویه انتی بیوتیک بشکل درست تحلیل شود. (1) عامل باکتریایی مورد نظر را در پلیت حاویی وسط مولر هینتون تلقیح نمایید (2) قرص های انتی بیوتیک را در پلیت قرار داده و آن را انکیوبیشن نمایید (3) نتایج آزمایش را تحلیل و یادداشت نمایید (2) مباحثات گروهی ORM